柔嫩艾美耳球虫毒害艾美耳球虫变位艾美耳球虫交叉免疫试验

柔嫩艾美耳球虫毒害艾美耳球虫变位艾美耳球虫交叉免疫试验黄兵，赵其平，何林华，吴薛忠，陈兆国，史天卫（中国农科院上海家畜寄生虫病研究所，２００２３２）鸡感染球虫后会产生一种抵抗再次感染的免疫反应，这种免疫反应具有种的特异性，即感染某种球虫不能保护抵抗另...     

中药联合复合益生菌对鸡柔嫩艾美耳球虫的预防作用

【目的】探究中药方剂与复合益生菌联合应用预防柔嫩艾美耳球虫病的作用效果。【方法】试验选择180只12日龄贵农金黄鸡,分成空白对照组、感染组、中药组、益生菌组、中药+益生菌组和莫能菌素组,每组3个重复,每个重复10只鸡。空白对照组和感染组空腹灌服生理盐水(200μL/只),中药组在基础饲粮中添加2%中药方剂,益生菌组空腹灌服复合益生菌(200μL/只),中药+益生菌组空腹灌服复合益生菌(200μL/只)+基础饲粮添加2%中药方剂,莫能菌素组在基础饲粮中添加100 mg/kg莫能菌素。14日龄时,除空白对照组外其余各组经口灌服1×10⁵个/只柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊悬液。接种球虫和剖杀前称重并统计相对增重率和存活率;感染0、4和8 d采集血液,用ELASA法检测血清生化、免疫和抗氧化指标;试验结束后采集盲肠组织并观察组织病理学变化。【结果】各预防给药组相对增重率均高于感染组,盲肠每克卵囊数均显著低于感染组(P<0.05),其中中药+益生菌组相对增重率最高、盲肠每克卵囊数最低,抗球虫指数(anticoccidial index, ACI)超过莫能菌素组。与感染组相...     

中草药复方制剂对鸡柔嫩艾美耳球虫的疗效研究

对用常山、苦参等组成的中草药复方制剂进行了抗球虫效果的研究。试验共分5组，即中药1组、中药2组、地克珠利组、感染不给药组和不感染不给药组。试验结果表明：中药1组、中药2组、地克珠利组的抗球虫指数分别为174.8、154.5、183.0。中药1组具有中等抗球虫效果。     

抗鸡柔嫩艾美耳球虫中药复方的筛选(初报)

采用人工感染发病方法，对由常山，柴胡，青蒿、白头翁，地榆，黄芪等十多味中草药按照不同的组成和配比组成的12个中药复方的抗鸡柔嫩艾美耳球虫的效果进行了试验观察，结果方6和12效果最佳，抗球虫指数分别达131．13和132．15，较感染不给药组分别提高了138．85％和140．71％，存活率也均达100％，相对增重率分别为71．13％和73．15％，较感染不给药组分别提高了17．23和19．25个百分点。     

NO对柔嫩艾美耳球虫感染鸡盲肠粘膜大细胞及组胺的影响

将试验鸡分为5组，每组18只，除空白对照组外，其他组鸡均用柔艾美耳球虫（E.tenella)进行免疫和攻毒接种，其中3组分别给予氨基胍（AG），N^W-硝基－L－精氨酸甲酯（L－NAME）和L-精氨酸（NOS底物，L－Arg）处理，结果表明，血清中NO^-2浓度以AG处理组最低，L－NAME处理组和L－Arg处理组比空白对照组明显升高，但都显著低于免疫攻毒组（P＜0．05），AG处理组盲肠肥大细胞（MC）数与空白对照组无明显差异，而极显著地高于其他组（P＜0．01），免疫攻毒组盲肠MC数明显高于L－NAME处理组和L－Arg处理组，而L－NAME处理组与L－Arg处理组之间则没有明显差异，AG处理组鸡盲肠组胺（HT）含量极显著高于其他组（P＜0．01）；LAME处理和L－Arg处理组的HT含量差异不显著，但都高于空白对照组而你于免疫攻毒组。体外试验明，磷酸组织胺能够明显抑制伴刀豆球蛋白A对鸡外周血淋巴细胞的诱导增殖作用（P＜0．01），结果提示，E.tenella感染鸡盲肠MC数与HT含量之间未见明显的相关性，活化的MC或其分泌物HT和NO产生有一定抑制作用，另一方面，NO也可能抑制MC的增殖。     

鸡柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫双重PCR检测方法的建立

为了建立一种能够快速实现对鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)和巨型艾美耳球虫(E.maxima)同时进行检测的双重PCR方法,基于2种艾美耳球虫各自的ITS-1基因筛选2对特异性引物,对制备的阳性DNA样品进行PCR扩增,凝胶电泳检测结果显示,分别在约450bp和150bp处出现目的条带。对PCR反应中的退火温度、MgCl2浓度、DNA模板量等进行优化。结果表明,当退火温度为59℃、MgCl2浓度为2.5mmol/L、DNA模板量为2μL时,双重PCR扩增结果最佳。特异性检测结果显示,所建立的双重PCR对环形泰勒虫、羊巴贝斯虫、隐孢子虫和蓝氏贾第虫的扩增结果均呈阴性,表明建立的方法具有较高的特异性。成功建立了柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫双重PCR检测方法,为临床中鸡球虫病的快速诊断提供了一种可靠的检测方法。     

鸡球虫病四价活疫苗对毒害艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫的免疫效果观察

为评价一种商品化鸡球虫病四价活疫苗[柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)、毒害艾美耳球虫(E.necatrix)、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫]对E.necatrix和E.tenella的免疫保护效果,本研究基于试验鸡血便记分、存活率、相对增重率、病变值、卵囊值及抗球虫指数(ACI)等指标对其免疫效果进行检测.结果表明,免疫攻虫组抗E.necatrix和E.tenella的ACI分别为157.3和135.6,均低于160,表明该球虫疫苗抗两种球虫的效果均为低效.然而,免疫攻虫组鸡血便数量、血便记分、增重、卵囊产量和病变记分等指标均优于阳性对照组.综合指标显示,该疫苗对E.necatrix和E.tenella具有一定的免疫保护力,但单纯采用疫苗并不能够达到防控鸡球虫病的目的.     

柔嫩艾美耳球虫果洛分离株的耐药性试验

雏鸡分组后人工感染果洛地区柔嫩艾美耳球虫分离株2.4×105个/只,分别采用地克珠利、氨丙啉、尼卡巴嗪、磺胺氯吡嗪钠、复方磺胺对甲氧嘧啶等5种常用抗球虫药进行治疗观察,以POAA、RLS、ROP、ACI作为评定指标.结果表明,柔嫩艾美耳球虫果洛分离株对氨丙啉、地克珠利高度敏感,对尼卡巴嗪、磺胺氯吡嗪钠均产生不同程度的耐...     

柔嫩艾美耳球虫YL株抗药性研究

用柔嫩艾美耳球虫杨凌株 ( YL t)对 1 4日龄雏鸡进行感染 ,检测了该虫株对 4种常用抗球虫药 (马杜拉霉素、地克珠利、克球粉和氯苯胍 )的敏感性。以最适抗球虫活性百分率、抗球虫指数、相对卵囊产量和病变记分减少率为指标 ,进行综合评定 ,其抗药程度分为无抗药性、轻度抗药性、中度抗药性和完全抗药性 4个等级。结果表明 ,该虫株对马杜拉霉素有轻度抗药性 ,对地克株利有完全抗药性 ,对克球粉和氯苯胍无抗药性。     

通扬球虫清对鸡球虫病的疗效试验

测定了通扬球虫清对鸡球虫病的疗效,三批试验结果显示,通扬球虫清高剂量组(甲基三嗪酮37.5mg/L饮水浓度,8天)和中剂量1组(甲基三嗪酮25mg/L饮水浓度,8天)的抗球虫指数始终在高效水平;中剂量2组(甲基三嗪酮25mg/L饮水浓度,2天)和通扬独霸组(地克珠利0.5mg/L饮水浓度,8天)的抗球虫指数相近,也属高效抗球虫范围;通扬球虫清低剂量组(甲基三嗪酮12.5mg/L饮水浓度,8天)的抗球虫指数属中等有效水平。综合各项指标及与通扬独霸组的药效相比,通扬球虫清在临床上选用25mg/L饮水浓度,连续饮用2天或2天以上切实可行。     

不同中药复方抗鸡柔嫩艾美耳球虫的效果观察

采用人工感染发病的方法，对由常山、柴胡、青蒿、白头翁、地榆、黄芪等10多味中草药，按照不同的组成和配比组成的12个不同中药复方的抗鸡柔嫩艾关耳球虫的效果进行了试验观察。结果方6和方12效果最佳，抗球虫指数分别达到131．13和132．15，较感染不给药组分别提高了138．85％和140．71％；存活率也均达100％；相对增重率分别为71．13％和73．15％，较感染不给药组分别提高了17．23和19．25个百分点。     

球安对人工感染球虫的岭南黄鸡保护效能试验

选择柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫人工混合感染岭南黄鸡,采用笼养和平养的方法,比较球安(Avatec)与甲基盐霉素、盐霉素、马杜霉素和球虫康对鸡球虫感染的保护效能.笼养试验结果显示,球安按110 mg/kg添加到饲料中,对3种球虫超高剂量(15万个孢子化卵囊)的混合感染具有很强的抑杀作用,其抗球虫指数和饲料报酬分别为181.5和1.77.平养试验显示,在球虫持续感染的情况下,从增重方面看,与阳性对照相比,球安组、甲基盐霉素和球虫康组在20、30、40和50日龄段体重始终差异极显著.除了盐霉素和马杜霉素以外,各试验组屠宰率与阳性对照相比差异不显著;与阴性对照相比差异不显著.在胸肌率方面,无论是与阴性对照还是与阳性对照相比,均为差异不显著.     

柔嫩艾美耳球虫对藏鸡和隐性白羽鸡致病性差异分析

为进一步明确柔嫩艾美耳球虫对球虫易感性差异鸡种的致病性,本研究以1×10⁵个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊的剂量分别感染对球虫具有抗性的藏鸡和易感的隐性白羽鸡,接种后观察记录各组鸡的临床表征、血便记分、死亡率、增重、盲肠病变记分、卵囊产量,并于感染前和感染后3、6和8 d每个品种分别随机选择5只鸡采集抗凝血,应用流式细胞仪（FCAS）检测外周血CD4⁺T和CD8⁺T淋巴细胞亚群数量。结果显示,柔嫩艾美耳球虫感染后藏鸡相对增重率高于隐性白羽鸡,死亡率、血便记分和盲肠病变记分均低于隐性白羽鸡,但卵囊产量高于隐性白羽鸡。外周血T淋巴细胞亚群变化方面,感染前,藏鸡CD4⁺T淋巴细胞数及CD4⁺/CD8⁺比值均高于隐性白羽鸡。感染后第3天,藏鸡CD4⁺、CD8⁺ T淋巴细胞数及CD4⁺/CD8⁺比值下降,隐性白羽鸡CD8⁺ T淋巴细胞数略有下降,CD4⁺T淋巴细胞数及CD4⁺/CD8⁺比值上升,但CD4⁺/CD8⁺比值仍显著低于藏鸡（P<0.05）。感染后第6天,2个品种鸡CD4⁺ T淋巴细胞数及CD4⁺/CD8⁺比值均下降,其中藏鸡表现为显著下降（P<0.05）,而隐性白羽鸡仅CD4⁺/CD8⁺比值显著降低（P<0.05）,隐性白羽鸡CD8⁺ T淋巴细胞数显著升高（P<0.05）。感染后第8天,2个品种鸡CD4⁺/CD8⁺比值显著下降（P<0.05）,藏鸡CD8⁺ T淋巴细胞数显著高于隐性白羽鸡（P<0.05）,但CD4⁺/CD8⁺比值显著低于隐性白羽鸡（P<0.05）。结果表明,球虫对藏鸡和隐性白羽鸡的致病性存在差异,这种差异与T淋巴细胞介导的免疫应答反应密切相关。     

藏鸡和隐性白羽鸡感染柔嫩艾美耳球虫后免疫相关基因的表达变化分析

试验旨在从免疫遗传学的角度初步探讨藏鸡（TC）和隐性白羽鸡（RWC）对柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）易感性差异的分子机制,分别用1×10⁵个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊感染对球虫具有抗性的藏鸡和易感的隐性白羽鸡。应用实时荧光定量PCR检测藏鸡和隐性白羽鸡感染前0 d和感染后第2、4、6和8天脾脏、盲肠、胸腺、法氏囊中γ-干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-2（IL-2）、IL-16、Toll样受体（TLR3）和TLR15免疫相关基因的转录水平变化。结果显示,藏鸡脾脏IFN-γ、IL-2、IL-16及TLR3、TLR15免疫相关基因转录水平于感染后第4和8天明显上调,隐性白羽鸡则无明显变化。藏鸡盲肠IFN-γ转录水平在感染后第2天显著上调（P<0.05）,TLR3在感染后第4天起显著上调（P<0.05）,其余免疫相关基因变化幅度不大;隐性白羽鸡盲肠IFN-γ转录水平在感染后第8天显著上调（P<0.05）,IL-2在感染后第2天起显著上调（P<0.05）,IL-16在感染后第6天起显著上调（P<0.05）,TLR3在感染后第2和8天显著上调（P<0.05）,TLR15变化幅度不大。各免疫相关基因在2个品种鸡胸腺和法氏囊中均出现上调或下调,但除藏鸡法氏囊TLR3和TLR15转录水平变化幅度相对较大外,其余免疫相关基因与感染前相比变化幅度不大。以上结果显示,球虫感染主要导致藏鸡和隐性白羽鸡脾脏和盲肠中的各免疫相关基因出现显著变化,表明宿主的遗传背景在一定程度上可影响球虫感染的免疫应答。     

中药复方对鸡柔嫩艾美尔球虫病的疗效观察

通过人工感染预防试验和治疗试验,对由常山、青蒿等5种中草药按特定配比组成的中药复方的抗球虫效果进行了试验观察。试验结果表明,以常山和青蒿为主药的该中药复方对柔嫩艾美耳球虫在预防和治疗上均有较好的效果。     

TA4和EtMIC-2表达产物免疫后对感染柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)鸡增重和盲肠卵囊数的影响

实验用Etmic-2和ta4两种基因的表达产物经口服，肌注免疫鸡，然后用柔嫩艾美耳球虫攻击免疫鸡，以观察重组产物的免疫保护作用。结果表明，免疫鸡的增重均高于红对照，口服两种活菌200μg组最佳，其相对增重为96．54％，其它组为77．07％－90．30％。从盲肠卵囊数看，同样是口服两种活菌200μg组最佳，相对卵囊产量为16．58％，其它均有降低，为17．72％－94．08％，从增重与卵囊产量来看，两种重组表达产物对E.tenella球虫有一定的免疫保护作用。尤其口服活工程菌效果最佳。     

柔嫩艾美耳球虫感染对鸡血清凋亡蛋白的影响

为了研究柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）感染对鸡血清细胞凋亡相关蛋白的影响,探讨柔嫩艾美耳球虫与宿主相互作用,将240只体重接近的7日龄海兰灰公雏鸡分为4组：A组为不感染不诱导凋亡组;B组为不感染诱导凋亡组;C组为感染不诱导凋亡组;D组为感染诱导凋亡组。诱导凋亡的处理方法是采血前2.5 h按6.4 mL/kg体重灌服40%酒精诱导凋亡,不诱导凋亡的处理则同时灌服与40%酒精等体积的生理盐水替代。于柔嫩艾美耳球虫感染（每只鸡感染1×10⁵个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊）后第24、48、72、96、120 h,每组抽取10只鸡心脏采血,制备血清,采用ELISA法检测血清中细胞色素C（Cyto-C）、半胱氨酸蛋白酶（Cas）-9、Cas-8、Cas-3、B细胞淋巴瘤/白血病（Bcl）-2、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、Bcl-XL、BH3结构域凋亡诱导蛋白（Bid）的浓度。结果显示,感染后24、48、72、96 h D组Cyto-C、Cas-9、Cas-8、Cas-3的浓度均低于B组,感染120 h D组Cyto-C、Cas-9、Cas-8、Cas-3的浓度均显著高于B组（P<0.05）,感染24、48、72、96 h D组Bcl-2/Bax和Bcl-XL/Bid值均高于B组,感染120 h D组的Bcl-2/Bax低于B组,Bcl-XL/Bid值高于B组。说明柔嫩艾美耳球虫感染早期通过Bcl-2/Bax值、Cyto-C、Cas-9、Cas-8、Cas-3浓度的增加来抑制宿主细胞凋亡,感染中晚期通过Bcl-2/Bax值、Cyto-C、Cas-9、Cas-8、Cas-3浓度的降低促进宿主细胞凋亡。     

中草药制剂防制鸡柔嫩艾美尔球虫病的效果研究

鸡球虫病是影响养鸡生产的重要寄生虫病，试验采用单味钩藤和以钩藤为主的中草药复方制剂进行抗球虫病的疗效试验。按给药剂量分为9组，每组10羽，1、2、3组给药剂量分别为0．5ml、1．0ml、1．5ml的单味钩藤中药组，4、5、6组则以钩藤为主的中草药复方制剂组及地克珠利组、感染不给药组和不感染不给药组。结果表明，单味钩藤中药1、2、3组和以钩藤为主的中草药复方制剂4、5、6组、地克珠利组的抗球虫指数（ACI）分别为177．1、181．4、182．1；179．9、182．4、188．5；185．4，单味钩藤中药1组和以钩藤为主的中草药复方制剂4组为轻度抗荮陛，其余均为敏感。结果表明，钩藤对抗鸡柔嫩艾美尔球虫具有显著疗效。由于中草药具有毒性低，使用安全、残留少等优点，在防制鸡球虫病方面具有良好的应用前景。     

柔嫩艾美耳球虫拉沙里菌素抗性虫株的实验室诱导

采用实验室建立抗性虫株的方法,用４０、６０、７５、１０５、１２５、１３５μｇ／ｇ梯度的拉沙里菌素作用于柔嫩艾美耳球虫盐霉素敏感株和盐霉素抗性株,经过１５次继代,诱导产生了对１３５μｇ／ｇ拉沙里菌素的抗药性虫株。在同一诱导条件下,盐霉素敏感株和盐霉素抗性株对拉沙里菌素产生抗药性的时值和强度没有差异。