L-茶氨酸对过氧化氢诱导山羊瘤胃上皮细胞凋亡的保护作用

本试验旨在研究L-茶氨酸对过氧化氢(H_2O_2)诱导山羊瘤胃上皮细胞凋亡的保护作用。采集42日龄的湘东黑山羊的瘤胃组织进行原代细胞分离、培养、纯化。对照组采用完全培养基,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别在完全培养基中添加800μmol/L H_2O_2、4 mmol/L L-茶氨酸+800μmol/L H_2O_2、8 mmol/L L-茶氨酸+800μmol/L H_2O_2和16 mmol/L L-茶氨酸+800μmol/L H_2O_2,每组3个重复。培养12 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,采用流式细胞术检测细胞周期,采用实时定量PCR法和蛋白质印迹(Western blot)法检测Bax和Bcl-2基因及其蛋白的表达。结果表明:L-茶氨酸能显著提高H_2O_2损伤的瘤胃上皮细胞存活率(P0.05),显著增加S期细胞比例(P0.05),显著降低Bax基因和蛋白表达量(P0.05),显著提高Bcl-2基因和蛋白表达量(P0.05),显著提高Bcl-2和Bax基因和蛋白表达量的比值(P0.05)。结果提示,L-茶氨酸能通过抑制细胞凋亡来有效地保护由H_2O_2导致的瘤胃上皮细胞损伤;体外条件下,培养液中添加的L-茶氨酸浓度高于8 mm/L时能有效发挥抗凋亡作用。对瘤胃上皮细胞损伤有一定的治疗和保护作用。     

谷氨酰胺及其二肽对过氧化氢诱导山羊瘤胃上皮细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

本试验通过建立过氧化氢(H2O2)诱导山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡模型,研究谷氨酰胺(Gln)、甘氨酰谷氨酰胺(Gly-Gln)和丙氨酰谷氨酰胺(Ala-Gln)对凋亡细胞的凋亡率及Bcl-2、Bax基因表达量的影响。选用60日龄湘东黑山羊的瘤胃上皮传代细胞,采用不同浓度[0(对照组)、100、400、800μmol/L]的H2O2培养细胞,应用流式细胞术检测细胞凋亡情况。传代瘤胃上皮细胞分为5组,对照组和1组分别添加0、800μmol/L H2O2,2组、3组、4组均添加800μmol/L H2O2,同时分别添加17.28 mmol/L Gly-Gln(2组)、16.0 mmol/L Gln(3组)、16.0 mmol/L AlaGln(4组),应用流式细胞术检测细胞凋亡情况,同时采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测细胞Bcl-2、Bax基因表达量。结果显示:1)与对照组相比,当H2O2浓度增加到800μmol/L时,早期凋亡的凋亡率显著增加(P0.05),而晚期凋亡的凋亡率随着H2O2浓度的增加呈现增加后减少的趋势,但相对于对照组,都呈显著增加(P0.05)。2)与对照组相比,4组晚期凋亡的凋亡率显著增加(P0.05),试验组早期凋亡的凋亡率均显著增加(P0.05)。3)与对照组相比,试验组Bcl-2/Bax均显著增加(P0.05);与1组相比,2组、3组和4组Bcl-2/Bax均显著增加(P0.05),且2组显著高于3组、4组(P0.05)。综合得出,Gly-Gln对H2O2引起山羊瘤胃上皮细胞早期凋亡具有一定的保护作用。     

日粮能量水平对山羊个体和瘤胃上皮生长的影响

系统研究日粮能量水平对山羊瘤胃上皮生长的影响,并初步探讨了高能量日粮促进瘤胃上皮生长的细胞和分子生物学机理。选取18只青年波杂山羊(波尔山羊×淮南羊,120 d,体重(14.27±0.69)kg)随机分成高能量组(HL,n=9,ME:1.00 MJ/(kg0.75·d))和低能量组(LL,n=9,ME:0.60 MJ/(kg0.75·d)),饲喂持续42 d。结果:与LL组相比,HL组山羊日增重、瘤胃干重、瘤胃上皮乳头长度和表面积显著增大(P0.05),表明高能量日粮显著促进瘤胃上皮乳头生长。组织切片观察发现,HL组棘突层和颗粒层细胞层数增多(P0.05),体积减小(P0.05),提示高能量日粮促进瘤胃乳头生长主要通过加速细胞增殖,而非细胞肥大。     

L-茶氨酸对黄羽肉鸡生产性能和免疫功能的影响

本试验旨在探讨L-茶氨酸对黄羽肉鸡生产性能和免疫功能的影响。选用1日龄黄羽肉鸡690只,随机分为6个处理,每个处理5个重复,每个重复23只。6个处理分别为对照组(饲喂无抗生素基础饲粮)、抗生素组[饲喂在基础饲粮中添加10%硫酸黏杆菌素的饲粮,前期(1～3周)添加200 mg/kg,后期(4～7周)添加150 mg/kg]、4个不同梯度(100、200、400和800mg/kg)L-茶氨酸试验组,试验期为49 d。试验检测了黄羽肉鸡的生产性能、免疫器官指数、肠道分泌性免疫球蛋白A(sIgA)含量及血清溶菌酶活性、抗体水平和免疫细胞因子含量等指标。结果表明:在试验前期,100 mg/kg L-茶氨酸组黄羽肉鸡的体增重显著低于其他各组(P<0.05),100、200和800 mg/kg L-茶氨酸组黄羽肉鸡的法氏囊指数显著低于对照组(P<0.05),各L-茶氨酸组黄羽肉鸡的肠道sIgA含量和血清干扰素-γ(IFN-γ)含量显著高于对照组(P<0.05)。在试验后期,与对照组及抗生素组比较,L-茶氨酸对黄羽肉鸡生产性能、免疫器官指数、肠道sIgA的含量影响不显著(P>0.05);100、200和400 mg/kg L-茶氨酸组黄羽肉鸡血清白细胞介素-2(IL-2)的含量显著高于对照组(P<0.05),200和400 mg/kg L-茶氨酸组黄羽肉鸡血清IFN-γ的含量显著高于对照组(P<0.05)。在整个试验期,各组黄羽肉鸡血清溶菌酶的活性和白细胞介素-4的含量差异不显著(P>0.05);一免后第6天,100和200 mg/kg L-茶氨酸组黄羽肉鸡血清新城疫抗体滴度显著低于对照组和抗生素组(P<0.05),一免后第14天,100、200和400 mg/kg L-茶氨酸组黄羽肉鸡抗牛血清白蛋白(BSA)抗体水平显著高于对照组(P<0.05),其他各阶段各组间的抗BSA抗体水平和新城疫抗体滴度均差异不显著(P>0.05)。由此可知,饲粮添加L-茶氨酸对黄羽肉鸡生长后期生产性能、免疫器官指数均无显著影响,说明其对黄羽肉鸡后期生长是安全的;同时L-茶氨酸可提高黄羽肉鸡生长前期肠道sIgA的含量、后期血清IL-2的含量及全期血清IFN-γ的含量,从而增强其机体免疫功能。     

L-茶氨酸的生物学功能及其在畜禽生产中的应用

L-茶氨酸是天然存在于茶树中的一种非蛋白氨基酸,属于酰胺类化合物,具有较强的抗氧化、抗应激、抗肿瘤、保护神经、增强机体免疫力等多种作用。目前主要用于食品、保健品和医药领域,而在畜禽生产中的应用研究还较少。已有的研究证明,L-茶氨酸能够提高猪和鸡的生产性能、抗氧化能力和免疫力。本文概述了L-茶氨酸的来源与理化性质、安全性评价和生物学功能,重点综述了其在畜禽生产上的应用研究,旨在为将L-茶氨酸更好地应用于畜禽生产提供理论参考。     

L-茶氨酸在动物体内的免疫调节及抗氧化作用研究进展

L-茶氨酸(L-theanine)是茶叶中的一种非蛋白氨基酸,具有多种生理功能。本文主要对L-茶氨酸在动物体内的吸收代谢、免疫调节及抗氧化作用及其作用机制进行了综述,以期为L-茶氨酸作为动物饲料添加剂应用提供参考依据。     

L-茶氨酸对氧化应激断奶仔猪生长性能及血液生化指标的影响

本研究探讨了L-茶氨酸对氧化应激断奶仔猪生长性能、抗氧化能力及免疫功能的影响。试验采用2×2二因素设计,160头断奶仔猪（7.53 kg±0.51 kg）随机分为4个处理组：1组（日粮中不添加L-茶氨酸,腹腔注射5 mL生理盐水）;2组（日粮中不添加L-茶氨酸,腹腔注射8 mg/kg体重敌快死）;3组（日粮中添加1 000 mg/kg L-茶氨酸,腹腔注射5 mL生理盐水）;4组（日粮中添加1 000 mg/kg L-茶氨酸,腹腔注射8 mg/kg体重敌快死）。预试期7 d,正试期28 d。结果显示：①与1组相比,2组仔猪平均日增重（ADG）和平均日采食量（ADFI）显著降低,而料重比显著升高（P<0.05）;与2组相比,4组仔猪ADG显著增加（P<0.05）。②与1组相比,2组仔猪血清丙二醛（MDA）含量显著增加,而总抗氧化能力（T-AOC）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性显著下降（P<0.05）,3组仔猪血清MDA显著降低,而T-AOC显著增加（P<0.05）;与2组相比,4组仔猪血清MDA含量显著降低,而T-AOC和GSH-Px活性显著上升（P<0.05）。③与1组相比,2组仔猪血清IgA、IgG、IL-2、IL-4水平显著增加,C3和C4水平显著下降（P<0.05）,3组仔猪血清IgA、IgG和IL-4水平显著降低,而C3和C4水平显著增加（P<0.05）;与2组相比,4组仔猪血清IgA、IgG、IL-2、IL-4水平显著降低,而血清C3水平显著增加（P<0.05）。结果表明,注射敌快死可引发仔猪氧化应激,造成生长性能下降、体液免疫能力下降;日粮中添加1 000 mg/kg L-茶氨酸可缓解仔猪氧化损伤,提高氧化应激仔猪的生长性能、抗氧化能力和体液免疫能力。     

黄芪3种成分对H_2O_2诱导Chang liver细胞凋亡的抑制作用

以H2O2建立Chang liver细胞损伤模型,设空白对照组、损伤模型组、黄芪甲苷保护组、毛蕊异黄酮葡糖苷保护组、芒柄花素保护组和阳性对照组。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、微板法、流式细胞术、DNA Ladder检测等方法测定细胞存活率、细胞外液转氨酶活性、周期分布及凋亡情况。结果显示H2O2的诱导使Chang liver细胞存活率降低、活性升高、发生G0/G1期阻滞及细胞外液转氨酶、细胞凋亡率的升高,3种成分对细胞的预处理均可显著或极显著的升高细胞存活率、缓解G0/G1期的阻滞现象、并降低细胞外液转氨酶活性及细胞凋亡率(P0.05或P0.01)。表明黄芪主要成分(黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡糖苷和芒柄花素)对H2O2诱导的Chang liver细胞凋亡均有一定的抑制作用。     

茶多酚和L-茶氨酸对热应激下蛋用仔公鸡生长性能及抗氧化能力的影响

本试验采用单因子试验设计研究茶多酚与L-茶氨酸在热应激下对蛋用仔公鸡生长性能及抗氧化能力的影响。选用1日龄蛋用仔公鸡180只,随机分为6组,每组3个重复,每个重复10只鸡。试验1组为对照组,饲喂基础日粮;试验2~6组分别在基础日粮中添加400 mg/kg茶多酚、200 mg/kg L-茶氨酸、200 mg/kg茶多酚+200 mg/kg L-茶氨酸、400 mg/kg茶多酚+200 mg/kg L-茶氨酸、600 mg/kg茶多酚+200 mg/kg L-茶氨酸,试验期28 d。结果表明,茶多酚可有效降低热应激下蛋用仔公鸡的料重比（P<0.05）,L-茶氨酸单独添加或与茶多酚同时添加对生长性能影响均不显著（P>0.05）;茶多酚可显著降低各组织器官的丙二醛（MDA）含量 （P<0.05）,显著提高各组织器官的谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）与过氧化氢酶（CAT）活性（P<0.05）;L-茶氨酸能显著提高各组织器官的CAT活性（P<0.05）,不同程度降低各组织器官的MDA含量;茶多酚与L-茶氨酸同时添加时,抗氧化能力与茶多酚的添加量不呈正比;400 mg/kg茶多酚+200 mg/kg L-茶氨酸组肝脏样总超氧化物歧化酶（T-SOD）与GSH-Px活性均显著降低（P<0.05）,MDA含量显著提高（P<0.05）。在热应激条件下,200 mg/kg茶多酚+200 mg/kg L-茶氨酸同时添加时,抗氧化效果较理想。     

不同氮源对瘤胃上皮细胞凋亡的影响

本试验采用细胞增殖试验、流式细胞术检测试验、Western blot试验、Hochest33342染色荧光显微镜检测等探究不同氮源（蛋氨酸与氯化铵）对瘤胃上皮细胞凋亡的影响及其可能的调控机制。结果表明：对瘤胃上皮细胞来说,处理36 h时,添加0.12 mmol NH4Cl组和0 mmol Met缺失组的OD值均达到对照组的一半,且均显著低于0.048 mmol Met组、0.12 mmol Met组（对照组）和0.048 mmol NH4Cl组（P <0.05）,0 mmol Met组比0.12 mmol NH4Cl组细胞活性显著降低（P <0.05）;添加0 mmol Met组的总凋亡率和晚期凋亡率最高,显著高于0.12 mmol Met组（对照组）和0.12 mmol NH4Cl组（P <0.05）,而0 mmol Met组和0.12 mmol NH4Cl组的早期细胞凋亡率均显著高于0.12 mmol Met组（对照组）（P <0.05）;与对照组相比,0.12 mmol NH4Cl组和0 mmol Met组的线粒体膜电势分别显著下降到71.99%和67.6...     

高精料对泌乳奶山羊瘤胃上皮氧化应激和胆固醇代谢的影响

为了研究长期或短期饲喂高精料日粮对泌乳期奶山羊瘤胃上皮组织氧化应激和胆固醇代谢的影响,实验选用17只健康的经产泌乳中期关中奶山羊,随机分为3组:饲喂低精料组(对照组,LC,n=5);长期饲喂高精料组(HL, n=7),19周饲喂期;短期饲喂高精料组(HS,n=5),4周饲喂期。实验结束后采集瘤胃组织,用PBS反复清洗,于液氮中速冻后置于-80 ℃冰箱保存。结果显示,与对照组相比,HL和HS组山羊瘤胃上皮组织中细胞周期相关基因CDK2和CDK4 mRNA表达水平显著升高(P<0.05),且HS组p-ERK1/2蛋白表达显著升高(P<0.05),但GPR41和GPR43蛋白表达无显著变化(P>0.05);HL和HS组山羊瘤胃上皮组织促细胞凋亡基因Casepase9 mRNA表达显著升高(P<0.05),HS组抗凋亡Bcl-2/Bax mRNA表达比例呈下降趋势(0.050.05);HS组瘤胃上皮组织中胆固醇含量下降达显著水平(P<0.05),且HL组呈下降趋势(0.05+ ATPase mRNA表达显著升高(P<0.05),NHE2蛋白表达升高但未达显著差异水平(P>0.05)。与HL组相比,HS组山羊瘤胃上皮组织中总抗氧化能力T-AOC显著升高(P<0.05);且胆固醇含量显著下降(P<0.05)。以上结果说明,短期饲喂高精料日粮可加快泌乳期奶山羊瘤胃上皮组织的更新,提高组织总抗氧化能力;而长期饲喂高精料日粮未引起细胞增殖相关蛋白和总抗氧化能力的显著变化;饲喂高精料日粮可以加快瘤胃上皮组织对VFA的转运。此外,饲喂高精料日粮引起瘤胃上皮组织内胆固醇含量降低,胆固醇酰基转移酶基因表达的显著上调,提示其对瘤胃上皮组织更新的潜在影响。     

L-精氨酸对肺动脉高压肉鸡肺小动脉平滑肌细胞凋亡的影响

将240羽14日龄艾维茵-2000商品代肉鸡于14d时随机等分为常温对照组（NT组），低温组（LT组）和低温加L-精氨酸组（LA），白14d起，LT和LA组舍内温度从28℃以1～2℃／d的速度下降，至21d降至12～14℃，并维持到试验结束。此外，LA组自14d起在饲料中按100mg／kg剂量添加L—Arg，直至试验结束。记录肺动脉高压综合征（PHS）发病率，并分别于24、32、39和45d测定右心室／全心室质量比（RV／TV）、血浆NO、肺小动脉管壁面积／管总面积（WA／TA）和平均中膜厚度（mMTPA），并用原位缺口末端标记法（TUNEL法）对肺小动脉凋亡平滑肌细胞进行染色和计数。结果：LT组肉鸡PHS发病率、RV／TV、mMTPA和WA／TA值较NT组升高（P〈0．05）；LA组肉鸡PHS发病率较LT组降低（P〈0．05），mMTPA和WA／TA值与LT组相比呈下降趋势，在32d时显著降低（P〈0．05）；LT组血浆N0浓度总体上与NT组差异不显著（P〉0．05），仅在39d时降低（P〈0．05），而LA组血浆N0浓度自32d时起较NT和LT组显著升高（P〈0．05）；LA组肉鸡肺小动脉平滑肌凋亡细胞百分率较NT组和LT组均显著升高（P〈0.05），但LT组与NT组之间相比无显著差异（P〉0．05）。上述结果表明，L-Arg／NO通过促进肺小动脉平滑肌细胞凋亡，从而在一定程度上抑制了肺血管重构的形成。     

不同浓度氟对山羊成骨细胞周期和凋亡的影响

为了探讨氟化物对反刍动物成骨细胞的细胞周期和凋亡的影响,本研究以初生山羊股骨骨膜为材料分离成骨细胞,接种于含15?S的DMEM培养液,于37℃、5%CO2的培养箱中培养。通过形态观察(Hoechst33342/PI双重染色)、DNA ladder电泳、透射电镜、流式细胞仪等方法检测氟对成骨细胞的调控作用。结果表明,高氟(1.0×10-3及2.5×10-3mol/L)使成骨细胞G0/G1期减少,S期细胞增多,抑制成骨细胞周期由合成DNA的S期向G2M期转化,使细胞停滞在S期。1.0×10-5~2.5×10-3mol/L氟可使DNA断裂,诱导成骨细胞凋亡,其中1.0×10-4mol/L氟所致早期和晚期凋亡率最高,分别为3.33%和2.92%。本试验证实氟可诱导成骨细胞凋亡。     

日粮添加钛对山羊瘤胃消化代谢的影响

本试验研究了日粮中添加钛对山羊瘤胃消化代谢及日增重的影响。试验分为3个系列: 系列Ⅰ:体内试验。选用装有永久性瘤胃瘘管的本地空怀母山羊4只,采用前后两期自身对照方法进行试验,每期4天。前期为对照,饲以基础日粮(以青干草、玉米粉、小麦麸、豆饼为主);后期为试验期,饲以基础日粮加50mg/kg钛。钛以TiVc形式添加。试羊舍词。每日8:00及16:00时定量饲喂,自由饮水。瘤胃液及血样在试验结束最后一天晨饲前经瘤胃瘘管     

瘤胃微生物与宿主的互作及其对瘤胃上皮发育的影响

瘤胃上皮在挥发性脂肪酸的吸收和代谢中发挥着重要作用,但瘤胃上皮发育的机制尚不清楚。近年来研究报道,瘤胃微生物与宿主存在互作关系,瘤胃微生物可以通过与宿主的相互作用,在瘤胃上皮发育和代谢中发挥作用。然而,瘤胃微生物与宿主相互作用的调节机制在很大程度上是未知的。因此,本文总结了瘤胃微生物与宿主互作以及其促进瘤胃上皮发育的最新研究成果,以期从瘤胃微生物与宿主互作角度,分析瘤胃上皮发育机制,为进一步了解瘤胃上皮发育过程中瘤胃微生物与宿主之间的关系研究提供理论依据。     

阴阳离子平衡对山羊瘤胃代谢参数的影响

选用安有永久性瘤胃瘘管的黄淮山羊6只,随机分为3组,分别饲喂3种不同水平阴阳离子平衡(A组332 mEq/kgDM、B组418mEq/kgDM、C组496 mEq/kgDM)的日粮,研究日粮阴阳离子平衡对瘤胃代谢参数的影响.结果表明:提高日粮阴阳离子水平可以有效地提高瘤胃液的pH值,在饲喂后8 h 差异显著(P<0.05);随着DCAB的增加,丙酸、丁酸含量增加,但乙酸的相对含量减少,其中试验B组乙酸(418 mEq/kgDM)最高,试验C组最低(P>0.05),试验A组丙酸、丁酸的含量(332mEq/kgDM)最低,且试验A组和试验B组、试验C组丁酸含量差异显著(P<0.05),但乙酸/丙酸、乙酸/(乙酸+丙酸)的比例却逐渐降低;氨态氮的含量随着阴阳离子含量的增加而降低,在整个采样期间变化有波动.     

椰子油对海南黑山羊羔羊瘤胃上皮发育的影响

为了探讨椰子油对羔羊瘤胃上皮发育的影响,该试验选用24只10日龄海南黑山羊羔羊,随机分成4个组,每组6个重复,在基础日粮中分别添加0(Ctrl组)、4 g/d(LCO组)、6 g/d(MCO组)和8 g/d(HCO组)椰子油,饲养周期90 d,集中屠宰采集瘤胃,分别测定瘤胃重量、体积,制备瘤胃上皮石蜡切片,光镜下检测瘤胃上皮发育情况。结果表明：MCO组羔羊瘤胃容积显著大于其它3组(P<0.05),瘤胃重和瘤胃指数无显著差异(P>0.05);LCO组和MCO组瘤胃上皮乳头表面积显著增加(P<0.05),HCO组上皮乳头密度与其它组相比极显著降低(P<0.01),椰子油对上皮乳头长度和厚度无显著影响(P>0.05);椰子油使羔羊瘤胃上皮乳头角质层(SB)细胞明显增多(P<0.05),LCO组和HCO组颗粒层(SG)细胞显著增多(P<0.05),MCO组和HCO组棘突层(SS)细胞显著增多(P<0.05)。结果提示,添加6 g/d的椰子油能使羔羊瘤胃的容积显著增加,一定程度刺激瘤胃上皮乳头细胞层的增生,促进羔羊瘤胃的发育。     

丙酮酸钙对山羊瘤胃挥发性脂肪酸浓度动态变化的影响

以8只装有永久性瘤胃瘘管的成年徐淮山羊为试验动物,采用自身对照设计,研究丙酮酸钙对山羊瘤胃内挥发性脂肪酸浓度动态变化的影响。结果表明:与对照组相比,添喂丙酮酸钙后,在0~8h内,对pH值无显著影响。4h时,总挥发性脂肪酸(TVFA)浓度升高25%(P<0.01);丙酸浓度升高60%(P<0.01)。0~8h内,丙酸比例均高于对照组(17%~30%);乙丙比均低于对照组(20%~29%)。说明在山羊日粮中添加一定量丙酮酸钙,可在不影响pH值的情况下,提高丙酸比例,降低乙丙比,改变瘤胃发酵类型。     

丙酮酸钙对山羊瘤胃挥发性脂肪酸浓度动态变化的影响

以8只装有永久性瘤胃瘘管的成年徐淮山羊为试验动物,采用自身对照设计,研究丙酮酸钙对山羊瘤胃内挥发性脂肪酸浓度动态变化的影响.结果表明:与对照组相比,添喂丙酮酸钙后,在0～8h内,对pH值无显著影响.4h时,总挥发性脂肪酸(TVFA)浓度升高25%(P<0.01);丙酸浓度升高60%(P<0.01).0～8h内,丙酸比例均高于对照组(17%～30%);乙丙比均低于对照组(20%～29%).说明在山羊日粮中添加一定量丙酮酸钙,可在不影响pH值的情况下,提高丙酸比例,降低乙丙比,改变瘤胃发酵类型.