人感染猪链球菌2型的研究进展

猪链球菌2型是一种重要的人畜共患病原菌,可引起人的脑膜炎、败血症等疾病.2005年6月发生的四川疫情是由猪链球菌2型引起的人猪共同感染,流行广,发展快,人猪患病数量多.本文从病原、流行特点、感染途径、临床表现、实验室鉴定(包括培养特性、形态特征、生化特性、血清凝集、毒力基因)等方面做了详细的综述,初步探讨了2型猪链球菌病的防治方法.     

猪链球菌2型和猪圆环病毒2型混合感染的检测

2006年9月,温州某猪场断奶仔猪出现消耗性综合征,剖检的仔猪主要表现为淋巴结肿大和脑膜炎等。分别设计针对猪圆环病毒2型CAP蛋白和猪链球菌2型溶血素蛋白基因的特异性引物,用PCR技术从患病仔猪的肺脏、脾脏、淋巴结和脑组织中扩增出了猪链球菌2型和猪圆环病毒2型特异性片段。结合本病的临床症状和病理变化,病例确诊为猪链球菌2型和猪圆环病毒2型的混合感染。     

猪链球菌2型胞外蛋白因子基因片段的克隆与表达

根据猪链球菌2型（Streptococcus suis type 2)胞外蛋白因子（extracellular factor protein,EF)基因序列，设计和合成1对引物，以猪链球菌2型江苏98分离株HA9801的基因组DNA为模块，通过PCR技术，扩增epf基因1207－1675bp序列，并按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pGEX-6p-1中谷胱甘肽转移酶（GST）基因的下游；将重组质粒转化入大肠杆菌BL21株，经IPTG诱导可表达相对分子质量约为41000的融合蛋白。用EF抗血清进行的免疫印迹分析表明，含有epf基因1207－1675bp序列编码的肽段的融合蛋白不能被EF抗血清识别。     

猪链球菌2型对PK-15细胞的黏附动力学

为研究携带不同毒力因子的猪链球菌2型对细胞侵袭作用的差异,本实验室从全国各地分离100多株猪链球菌,PCR鉴定出10株链球菌2型,其中携带毒力因子菌株为7-4［MRP⁺EF+］、8-3［MRP⁺EF^-］、ZH-1［MRP^-EF⁺］,另外选择1株LN-2 ［MRP^-EF^-］与PK 15细胞进行黏附动力学试验,结果表明MPR毒力因子与菌株对PK-15细胞黏附具有密切相关性。     

猪链球菌2型分解代谢控制蛋白A的克隆和原核表达

原核表达猪链球菌2型分解代谢控制蛋白A(catabolite control protein A,ccpA)并进行纯化,通过免疫印迹反应初步鉴定重组蛋白的抗原性和特异性。采用PCR方法,扩增ccpA基因序列,克隆至原核表达载体pET-28a中,转入大肠杆菌BL21中进行诱导、表达和亲和层析纯化;经Western blotting初步评价ccpA的抗原性。重组原核表达质粒pET-28a-ccpA经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约38000,能被相关抗体所识别。因此,能成功在大肠杆菌中表达猪链球菌2型ccpA,为猪链球菌2型相关调节蛋白的免疫学研究奠定基础。     

H1N1亚型流感病毒感染A549细胞的环状RNA表达分析

通过对甲型H1N1流感病毒感染A549细胞前后表达的环状RNA进行鉴定,筛选病毒感染引起的差异表达环状RNA,为进一步研究环状RNA在流感病毒感染过程中的调控作用奠定基础。本研究从病毒感染和PBS处理的A549细胞中提取RNA,构建测序文库后进行全转录组测序。通过生信分析,鉴定了病毒感染前后宿主细胞表达的环状RNA。以未感染组为对照,使用EdgeR包,筛选条件：■、P value<0.05,筛选获得感染前后的细胞中差异表达的环状RNA。使用ClusterProfiler包对差异表达环状RNA的来源基因进行GO和KEGG分析。最后通过荧光定量PCR、外切核糖核酸酶处理、Sanger测序等手段验证了病毒感染前后宿主细胞内部分环状RNA的差异表达。结果表明：流感病毒感染细胞后,环状RNA的表达数目增加。感染组和未感染组分别鉴定到1 101和676个环状RNA表达,这些环状RNA广泛分布在所有染色体上,其中大部分(约60%)长度在300～1 000 nt,约20%的环状RNA长度超过2 000 nt。基于基因位置关系的分析发现,75%～82%的环状RNA源自外显子,12%～17%源自正链...     

猪链球菌2型对家兔的试验感染及其病理学观察

利用猪链球菌2型四川分离强毒菌株458#,通过腹腔注射接种日本大耳白家兔,观察其临床症状和病理学变化。结果表明,猪链球菌2型强毒株458#可引起家兔发病或死亡,并能从发病家兔的组织样品中分离到所接种毒株。感染家兔的特征性组织病理学变化表现为典型的弥漫性血管内凝血和微血栓形成。猪链球菌2型感染家兔动物模型的建立,对于评价猪链球菌2型的毒力,探索其发病机制具有重要的意义。     

2015年华中地区猪链球菌2型感染的血清学调查

监测华中地区22个未免疫猪链球菌疫苗猪场2015年不同月份、不同猪群的猪链球菌2型(SS2)抗体水平,以期揭示SS2的感染流行情况。共收集923份血清样品,结果 442份为SS2抗体阳性,阳性率为4789%,表明SS2在华中地区感染普遍存在;统计分析发现不同月份感染阳性率差别较大,其中6~9月份最高,说明该病与季节有一定的关系,在夏季尤其应该注意该病的防控;不同阶段猪群统计结果表明保育猪阳性率最低,更应做好保育猪的SS2免疫防控工作。     

2型猪链球菌病

猪链球菌能引起猪脑膜炎、心内膜炎、关节炎、肺炎和败血症等,并可以感染人,是一种重要的人畜共患病病原。该菌有35个血清型,其中2型流行最广、致病性最强。本文就2型猪链球菌病的病原、流行病学、致病机理、检测技术及免疫预防等各方面情况作一综述。     

猪链球菌2型感染SPF小型猪模型的构建

构建了致病性猪链球菌2型(SS2)感染模型。通过典型临床症状观察、剖检病变和组织学观察及病原分离鉴定,证实该模型能成功模拟自然感染状态下SS2引起的典型临床症状和病理变化特点,稳定性好,可进一步用于致病性SS2在动物体内动态分布规律、致病机制和机体免疫应答以及疫苗的效果评价和相关药物筛选等方面的研究,对于猪链球菌2型感染的防控具有重要意义。     

Microarray analyses of THP-1 cells infected with Streptococcus suis serotype 2

Streptococcus suis serotype 2 (S. suis 2) is a pathogen responsible for several diseases in both pigs and humans. To gain more insight into the pathogenesis of this organism, an oligonucleotide (oligo)-based microarray was used to investigate gene expression changes in human monocytic cells (THP-1) in response to exposure to S. suis 2 strain SC19. A total of 328 differentially expressed genes were identified. These differentially expressed genes belonged to a variety of functional categories, including genes involved in apoptosis, immunity, signal transduction, chemokine production and the ubiquitin-proteasome system. Our findings can be of interest for future research.     

2型猪链球菌的血清学鉴定

本试验首次证实了２型猪链球菌在我国的存在，采用玻片凝集、琼脂扩散及毛细管沉淀等３项试验，对１９９０年以来广东某猪场断奶仔猪暴发流行的败血症、脑膜炎及关节炎病猪中分离的１５株链球菌进行了血清学鉴定。结果表明：１５株链球菌均为２型猪链球菌；用高压法提取抗原进行沉淀反应，其结果比酸热法提取抗原具有简便、敏感、特异性强的特点。     

猪链球菌2型诊断与防制措施

<正>猪链球菌(Streptococcus suistype 2,SS2)已经成为危害养猪生产及人类健康的重要人畜共患病。可引起猪脑膜炎、关节炎、心内膜炎及猝死等;致人败血症、心内膜炎、脑膜炎,严重的致人链球菌毒素休克综合征而死亡。1998年7月江苏南通某地猪群暴发猪链球菌2型,同时导致21     

猪链球菌2型CPS2J基因PCR检测技术研究进展

猪链球菌广泛存在于自然界,可引起猪链球菌病,以发烧、败血症、脑膜炎、肺炎、关节炎等为主要特征;猪链球菌病是一种重要的人畜共患传染病,共有35种血清型,其中以2型流行最广,危害最大。荚膜多糖抗原作为链球菌重要毒力因子,在引起猪链球菌病的过程中起到了关键性的作用,以此作为目的基因的PCR检测方法的报道也不在少数,现就近年来国内外猪链球菌2型荚膜多糖抗原基因（CPS2J）PCR检测技术进行综合论述,以期为实验室检测人员提供有关的资料。     

三重PCR方法检测猪链球菌2型

根据发表文献,设计合成三对引物,建立三重PCR方法,分别扩增猪链球菌2型cps2J、epf,mrp基因,目标片断大小分别为:230bp、570bp、860bp。对三重PCR方法进行特异性、敏感性、重复性试验,结果显示该三重PCR方法特异性好,敏感性高,重复性好,能快速的检测猪链球菌2型。     

猪链球菌4型分离株生物学特性研究

为分析猪链球菌4型(Streptococcus suis type 4,SS4)分离株的病原生物学特性,试验对来自中国不同地区的10株猪链球菌4型进行了多位点序列分型,通过PCR方法对猪链球菌7个保守管家基因aroA、gki、dpr、mutS、recA、thrA、cpn60进行扩增,测序后将结果上传至MLST数据库查找序列型,然后制作聚类分析图来阐明菌株之间的亲缘关系;采用PCR方法对7种主要的毒力基因gdh、mrp、epf、sly、fbps、gapdh与orf2进行鉴定,通过毒力因子谱来分析猪链球菌4型毒力因子的分布;以纯化的10株细菌对BALB/c小鼠进行动物致病性试验,根据小鼠致死数量筛选出最强毒株,并进行新西兰兔致病性试验。结果显示,10株猪链球菌4型经多位点序列分型,6株为ST850型,3株为ST1006型,1株为ST94型;结合菌株分离地区分析发现,广东和江苏地区菌株有较高的同源性,江沪地区菌株出现分化现象,表现为遗传多样性;10株菌株均检测到了gdh、gapdh和orf2毒力基因,7株检测到sly基因,4株检测到fbps基因,根据毒力因子谱发现共有3个毒力基因型,gdh+sly+gapdh+orf2+型有6株,gdh+fbps+gapdh+orf2+型有3株,gdh+sly+fbps+gapdh+orf2+型仅有1株。动物致病性试验表明,10株细菌均能使BALB/c小鼠死亡,其中SH1510的半数致死量低至1×108 CFU,对小鼠的致病性最强,将纯化的SH1510菌液接种新西兰兔,可使新西兰兔出现典型的神经症状并死亡。以上结果为猪链球菌的遗传进化、毒力研究提供了新的数据,丰富了猪链球菌病的研究。     

绵羊SUN2基因生物信息学分析及其在A549细胞中的表达

本研究旨在克隆绵羊SUN2（Sad1 and UNC84 domain containing 2）基因并进行生物信息学分析,构建真核表达载体并检测其在A549细胞中的表达。根据绵羊SUN2基因序列（GenBank登录号：XM_015095026.2）设计特异性引物,应用RT-PCR方法扩增并克隆绵羊SUN2基因CDS序列,测序鉴定后对其进行生物信息学分析,并构建pEGFP-C1-SUN2重组质粒。利用脂质体转染方法将pEGFP-C1-SUN2重组质粒转染至A549细胞并检测其表达。结果显示,绵羊SUN2基因CDS区序列全长2 187 bp,编码728个氨基酸,理论分子质量为81.06 ku,分子式为C₃₅₉₃H₅₆₃₉N₁₀₃₁O₁₁₁₀S₁₄,等电点（pI）为6.20,总原子数为11 387,不稳定系数为56.88,属于不稳定蛋白。绵羊SUN2基因序列与山羊、牛、猪、马、家犬、大鼠、小鼠及人的相似性分别为98.9%、97.2%、91.6%、90.6%、87.1%、82.4%、82.1%和86.1%,不同物种间基因相似性较高,进化过程中相对保守。系统进化树分析表明,绵羊SUN2基因与山羊、牛、猪、马和家犬等哺乳动物的遗传距离相对较近,与鸡的遗传距离较远。结构域及跨膜结构域预测显示,绵羊SUN2蛋白含有1个高度保守的SUN结构域,且存在跨膜结构域。信号肽预测显示其不存在信号肽位点,疏水性分析为亲水性蛋白,氨基酸序列二级结构主要为α-螺旋（51.65%）,其余为无规则卷曲（31.46%）、延伸链（12.36%）和β-转角（4.53%）。试验成功构建了绵羊SUN2基因真核表达载体pEGFP-C1-SUN2,将其转染至A549细胞并检测到蛋白表达。本试验结果为绵羊SUN2基因功能的研究提供了参考依据,为后续探究SUN2基因在绵羊肺腺瘤病中的作用奠定了基础。