黄斑星天牛幼虫白僵病研究——Ⅰ、僵菌分离鉴定和室内生物活性测定

1980年12月,西北地区黄斑星天牛科研协作组的同志们在甘肃省天水市四十里铺大队进行虫害木剖析调查时,发现一具该种幼虫僵尸,交我们带回。1981年,本着探求对该害虫微生物防治途径的目的,我们从事了三项工作,即:1、僵菌的分离,培养及提纯;2、菌种鉴定;3、对黄斑星天牛幼虫寄生活性的测定。工作中,得到西北农学院植保系植物病理研究室李建义副教授鉴定菌种和指导,得到西北林学院森     

黄斑星天牛幼虫白僵病研究——Ⅱ.白僵菌防治黄斑星天牛幼虫的试验

通过从黄斑星天牛幼虫僵尸上僵菌的分离培养,菌种鉴定和室内对该虫种寄生的生物活性的测定研究以后,肯定白僵菌(产地:黄斑星天牛)对黄斑星天牛大幼虫的寄生率在室内可达92.5%(1.1亿孢子/毫升),说明该菌有进一步研究利用的价值。为了探索该菌在自然条件下对黄斑星天牛幼虫的致病效果和防治生产上将使用的剂型、施药方式和时机等问题,我们于1982年3月—7月,在甘肃省天水市和武山县选点部署这项试验。试验期间,得到天水地区林木病虫防治检疫站和武山县林业局的大力支持和协助,从而保证了预期计划的顺利完成,我们深为感谢。这里把此项研究结果整理报告如下:一、本项研究的范围。     

光肩星天牛幼虫病原真菌—粉拟青霉的分离与鉴定

通过对肖肩星天牛Ａｎｏｐｌｏｐｈｏｒａ ｇｌａｂｒｉｐｅｎｎｉｓ的天敌种类和自然死亡率调查研究，从罹病死亡的幼虫虫体上分离出一种真菌菌株，做室内致病力测定，寄生死亡率达８８．８９％。再分离后，所得菌种与接种用菌种完全相同，经鉴定为粉拟青霉菌Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｆａｒｉｎｏｓｕｓ。此菌的最适生长温度是１５℃－２５℃。     

光肩星天牛幼虫病原真菌──粉拟青霉的分离与鉴定

通过对光肩星天牛Ａｎｏｐｌｏｐｈｏｒａｇｌａｂｒｉｐｅｎｎｉｓ（Ｍｏｔｓｃｈ）的天敌种类和自然死亡率调查研究，从罹病死亡的幼虫虫体上分离出一种真菌菌株，（编号为９２０９０９—Ｚ２６）做室内致病力测定，寄生死亡率达８８．８９％。再分离后，所得菌种与接种用菌种完全相同，经鉴定为粉拟青霉菌Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓｆａｒｉｎｏｓｕｓ。此菌的最适生长温度是１５℃～２５℃。     

光肩星天牛幼虫感染绿僵菌后营养生理的变化研究

光肩星天牛幼虫感染绿僵菌后,饲养于柳树枝条中,然后放入适于其正常生长的气候箱中。定时进行观察,同时选择感染明显的幼虫,称量其体重、计算其取食量。结果表明:光肩星天牛幼虫感染绿僵菌后取食量减少、体重增加变缓,营养生理变化显著。     

4株绿僵菌的鉴定及对松褐天牛成虫致病效果比较

【目的】为筛选对松褐天牛毒力更高的微生物资源,开展生物防治通过培养性状、分生孢子形态及系统发育树鉴定4个绿僵菌菌株,比较测定各自对松褐天牛的毒力。【方法】对4株绿僵菌的培养性状和分生孢子形态特征进行描述,并对4株绿僵菌的EF-1α基因进行克隆和测序,构建系统进化发育树,综合鉴定4株绿僵菌的分类地位。测定了不同孢子浓度及接种方法(浸虫、浸枝和无纺布)对松褐天牛成虫的致病效果,构建4个菌株对松褐天牛的毒力方程。【结果】1)菌株WTKH和WP08鉴定为平沙绿僵菌;菌株LV2鉴定为金龟子绿僵菌;菌株qc1401鉴定为瘿绵蚜绿僵菌。2)平沙绿僵菌WP08菌株和金龟子绿僵菌LV2菌株对松褐天牛校正死亡率较高,瘿绵蚜绿僵菌qc1401菌株次之,平沙绿僵菌WTKH菌株最低。4个菌株对松褐天牛的致死速度依次为WP08LV2qc1401 WTKH,LT50分别为5. 52、10. 38、16. 93和20. 80天。3)以平沙绿僵菌WP08为供试菌株,在1. 0×108、1. 0×107、1. 0×106个·m L-1共3个浓度下,孢子浓度越高则松褐天牛校正死亡率越高、半数死亡时间越短,孢子浓度为1. 0×108、1. 0×107时,试验期内校正死亡率均达到100%;半数死亡时间LT50分别为11. 38、16. 44和24. 22天。4)以平沙绿僵菌WP08为供试菌株,3种接种方法 40天内松褐天牛死亡率均为100%,LT50浸虫法为5. 52天,浸枝法为11. 38天,无纺布法为17. 21天。【结论】4株绿僵菌均可侵染松褐天牛致其死亡,其中,平沙绿僵菌WP08的致死率和致死速度较快,为防治松褐天牛的优良菌株。     

不同球孢白僵菌菌株对星天牛幼虫的致病力

为筛选出可用于星天牛生物防治的高致病力菌株,测定了8株球孢白僵菌菌株(Bb Ma A-01、Bb MQ-04、Bb MQ-07、Bb QZ-01、Bb QZ-02、Bb YXTR-03、Bb TK-02、Bb XJ-11)的生长速度和产孢量及其对星天牛幼虫的致病力。结果表明:不同球孢白僵菌菌株的生长速度、产孢量和对星天牛幼虫致病力差异十分显著。采用浸渍法接种15 d后,不同球孢白僵菌菌株对星天牛幼虫累计致死率(幼虫死亡率)在70%~100%之间,其中Bb XJ-11、Bb QZ-02菌株对幼虫的累计死亡率最高,均达100%;且接种后星天牛幼虫的僵虫率(感染率)也分别高达90%、80%;致死中时(LT50)较短,分别为5.38 d、5.83d。研究结果表明Bb XJ-11、Bb QZ-02菌株对星天牛幼虫的致病力较强,同时2个菌株的生长速度快、产孢量高,故可作为防治星天牛的优良菌株加以推广应用。     

金龟子绿僵菌、球孢白僵菌不同菌株对星天牛成虫的生物测定

在测定8株虫生真菌产孢量的基础上,选用4株金龟子绿僵菌和1株球孢白僵菌茵株,采用爬行接种法对星天牛成虫进行生物测定,旨在筛选出对星天牛成虫具有强致病力的生产菌株.星天牛成虫在产孢充分的平皿上爬行后所接触到的孢子量差异不显著.接种后不同菌株对星天牛成虫的致死趋势较一致,死亡高峰期在9～15 d.通过死亡率一时间几率值分析发现,MaYTTR04,MaZPTR01,B08 3个菌株的LT50分别为9.14,9.48,9.67 d,较另2个菌株要短.最高僵虫率的菌株是MaZPTTR01,为53.3%;其次是MaYTTR04,为40.0%;其余3个茵株均较低.试验结果表明MaYTTR04,MaZPTR01 2个菌株对星天牛有较高的致死率,僵虫率也较高,可以作为优良茵株进一步的研究、推广.     

敦煌地区黄斑星天牛化学防治效果研究

通过在黄斑星天牛化学防治区和对照区建立临时标准地,调查树下黄斑星天牛死亡成虫数、刻槽数、3龄以下活幼虫数、3龄以上活幼虫数、羽化孔数等,进行黄斑星天牛化学防治效果的研究,结果表明:"树干注药+树冠喷药"有机结合的防治措施可使树下黄斑星天牛死亡成虫率达到52.1%,刻槽减退率达到89.1%,3龄以下幼虫减退率达到94.3%,且防治效果不受限于天牛重度、中度、轻度发生区。     

金龟子绿僵菌在松墨天牛成虫僵虫体上的宿存动态

将被金龟子绿僵菌MaYTTR-04菌株感染后的松墨天牛成虫僵虫放置于林地中,研究在林间自然条件下僵成虫体上绿僵菌孢子的宿存动态.通过2年试验发现:林间松墨天牛僵成虫体上孢子数量在试验初期(42天内)显著下降,以后下降趋势趋缓,84天后至僵虫完全腐烂基本稳定在每成虫10~5个孢子数量级;林地僵虫体上的孢子在126天内萌发率均保持在90%以上的较高水平.通过对不同时间僵虫体上绿僵菌对松墨天牛成虫的致病力研究发现,在10~7,10~6孢子·mL~(-1)数量级的接种量下,僵成虫体上的孢子致病力与对照差异不显著,说明僵虫体上的孢子在野外宿存的过程中可以较好地保持其致病力.     

双条杉天牛幼虫病原真菌——球孢白僵菌的分离鉴定与利用

2002-2006年在对呼和浩特地区杜松死亡原因调查的过程中,从死亡的树干内发现了罹病致死的双条杉天牛幼虫。通过对虫体内病原真菌的分离与鉴定,确定为球孢白僵菌。经管氏肿腿蜂带菌接种与人工接种方法的室内致病力测定,在22~25℃条件下饲养30 d,双条杉天牛幼虫感病致死率分别为100%、58.22%,证明球孢白僵菌是双条杉天牛的病原菌。同时,利用管氏肿腿蜂带菌接种,菌剂使用浓度低,虫菌结合能显著提高双条杉天牛幼虫的感病致死率。     

白僵菌和绿僵菌林间感染星天牛成虫试验

应用白僵菌和绿僵菌的菌条,在林间通过星天牛成虫在木麻黄树干的菌条上自由爬行接触的方法,对星天牛成虫进行感染试验。结果表明:林间星天牛成虫接触白僵菌和绿僵菌菌条13 d后,死亡率达100%(对照组死亡率仅为16.7%),致死中时(LT50)分别为6.77 d和5.93 d;感染白僵菌和绿僵菌菌条的天牛成虫存活期分别为7.9 d(3～13 d)和7.1 d(3～13d),极显著低于对照的26.1 d(8～43 d)。说明利用白僵菌和绿僵菌菌条林间防治星天牛成虫效果显著,可进一步推广应用。     

不同方式接种绿僵菌后松墨天牛带菌量及致死率的比较

对松墨天牛成虫采用爬行、跗节、喷雾3种方式接种金龟子绿僵菌MaYTTR-04后的带菌量和死亡率进行了比较试验,结果表明:不同接种方式松墨天牛体的带菌量间差异极显著(F=79.179,P=0.0001),其中爬行接种的接种量最大,达到(5.60±0.49)×106孢子.成虫-1,是跗节接种的4倍多;接种后15 d,各处理天牛累计死亡率均达100%;模拟各处理毒力回归方程发现,爬行接种的方程的斜率最大,说明处理后天牛在致死中时(LT50)后期死亡速率较快,爬行、喷雾、跗节接种的LT50分别为5.3 d、6.8 d和6.9 d。综合分析表明,3种方式接种绿僵菌后松墨天牛的致死率非常高,其中爬行接种效果最好。可为松墨天牛的生物防治提供有效的施菌技术。     

利用天敌防治黄斑星天牛的研究

为控制黄斑星天牛的为害,通过释放花绒寄甲和肿腿蜂2种天敌昆虫,开展了黄斑星天牛生物防治试验.结果表明:肿腿蜂释放应选择气温在25℃左右、相对湿度70％的晴朗天气进行;花绒寄甲应选择本地培养的成虫和卵进行投放,可提高天敌防治黄斑星天牛效果.     

球孢白僵菌对光肩星天牛幼虫的毒力

从自然感病的光肩星天牛虫尸上分离出球孢白僵BF菌株,在室内用109孢子/mL、108孢子/mL和107孢子/mL3种浓度的孢子液侵染光肩星天牛低龄幼虫。试验结果表明:感染天牛幼虫累积死亡率分别为73.3%、64.8%、14.4%,接种前2种浓度的天牛幼虫第6 d后死亡率显著增大,而107孢子/mL没有出现急速死亡现象。在野外试验中,用108孢子/mL菌液喷于木段表面并将天牛成虫置于罩网木段上产卵。结果显示,皮下大量天牛幼虫及少量卵感染了白僵菌致死,防治效果可达76.8%。     

增效剂对球孢白僵菌产孢量及对光肩星天牛致死速率的影响

在应用昆虫病原菌防治光肩星天牛（Ａｎｏｐｌｏｐｈｏｒａ ｇｌａｂｒｉｐｅｎｎｉｓＭｏｔｓｃｈ）的试验中，筛选出一种增效剂，可使病原菌的产孢量增加，光肩星天牛的致死速率加快。在生产病原菌的培养基内加入０．０２％的增效剂培养５天，产孢量比对照增加一倍多。在含孢量１０＾８／ｍｌ的球孢白僵菌的菌悬液中加入０．０２％的增效剂，以每头光肩星天牛幼虫接种１ｍｌ菌悬液，使光肩星天牛幼虫第６天开始发病，第１６天死亡     

人工捕捉成虫控制黄斑星天牛

黄斑星天牛（AnoplophoranobllsGan-glbauer）是陕、甘、宁三省（区）杨树毁灭性的害虫。70年代以来，黄斑星天牛曾多次造成西北地区防护林体系中的主体树种一杨树的毁灭，严重影响着“三北”防护林建设工作的进行。仅1990年调查，甘谷县有杨树4400hm2，黄斑星天牛成灾面积2167hm2，平均有虫株率58.3％。关于黄斑星天牛的防治，曾采取过多种措施，但防效一直不够理想。主要是黄斑星天牛卵、幼虫在树体内营隐蔽生活，防治难度大，防治效果差;其次是杨树栽植分散，难于采取集中防治措施;再次是防治技术实用性差，难干奏效。黄斑星天牛成虫羽…     

金龟子绿僵菌、球孢白僵菌不同菌株对星天牛成虫的生物测定

在测定8株虫生真菌产孢量的基础上，选用4株金龟子绿僵菌和1株球孢白僵菌菌株，采用爬行接种法对星天牛成虫进行生物测定，旨在筛选出对星天牛成虫具有强致病力的生产菌株。星天牛成虫在产孢充分的平皿上爬行后所接触到的孢子量差异不显著。接种后不同菌株对星天牛成虫的致死趋势较一致，死亡高峰期在9～15d。通过死亡率一时间几率值分析发现，MaYTTR04，MaZPTR01，t3083个菌株的LT50分别为9．14，9．48，9．67d，较另2个菌株要短。最高僵虫率的菌株是MaZFrrR01，为53．3％；其次是MaYTTR04，为40．0％；其余3个菌株均较低。试验结果表明MaYTTR04，MaZPTR012个菌株对星天牛有较高的致死率，僵虫率也较高，可以作为优良菌株进一步的研究、推广。     

绿僵菌毒素的提取方法

利用金龟子绿僵菌的液体培养物,通过匀浆、过滤、CCl_(?)萃取、减压浓缩、薄层层析、柱层析洗脱、真空干燥等过程:提取出绿僵菌毒素,每升培养物可提取0.7毫克毒素。用绿僵菌毒素注射青杨天牛幼虫,72小时死亡率为100%。其致死剂量为0.3微克/克体重。     

星天牛幼虫人工饲料的饲养效果及温度对其生长的影响（英文）

【目的】研究星天牛人工饲料、饲养方法及温度对其生长发育的影响,为防治技术研究提供大量、生理标准统一的试虫。【方法】通过连续3年在4种不同配比的人工饲料上连续传代饲养星天牛,研究不同人工饲料配方的饲养效果;比较室内自然温度和恒温模式下星天牛在人工饲料上的化蛹和羽化情况;同时定期测定星天牛幼虫在不同饲料、不同温度模式下的体质量变化。【结果】星天牛幼虫在4种不同配方的人工饲料上均可完成生活史并传代饲养,但其化蛹率、羽化率在不同饲料上差异显著,其中以同时含有木麻黄锯屑和麦麸的Diet A和Diet D上饲养效果较好。在Diet A上,3代(持续3年)星天牛幼虫化蛹率依次为100%,90%和95%,羽化率依次为100%,83%和90%;在Diet D上,3代星天牛化蛹率依次为87%,78%和87%,羽化率依次为87%,67%和80%。在室内自然温度模式下,星天牛幼虫的化蛹率和羽化率较恒温模式(25℃和28℃)下高,且化蛹和羽化时间整齐一致(均在4—5月,与林间观察一致);而在恒温模式下化蛹和羽化时间明显延迟,且无规律性。人工饲料饲养条件下,星天牛幼虫体质量先增加,达到最大值后逐渐减小,直至化蛹或死亡。星天牛幼虫在Diet D上的体质量增长速度较其在Diet A上快,体质量最大值及到达时间因饲料种类、温度模式的不同而存在差异;在室内自然温度模式下,星天牛幼虫在饲养16周(11月下旬)后达到最大值,且在Diet D上的幼虫平均体质量(2.077 g)显著高于在Diet A上的体质量(1.685 g)。而在恒温模式(28℃)下,星天牛幼虫平均体质量在Diet D上饲养16周后达到最大值(2.106 g),而在Diet A上饲养20周后达到最大值(1.785 g)。【结论】星天牛幼虫可在筛选出的人工饲料Diet A和Diet D上连续传代饲养并完成生活史,饲养效果稳定,化蛹率和羽化率高;温度条件是决定星天牛化蛹时间的重要因素,星天牛幼虫在发育过程中不一定需要低温滞育,但是其存在可以提高星天牛幼虫的化蛹率和促进化蛹、羽化的一致性。研究结果为星天牛提供了人工饲料及方法,可为科学研究提供大量试虫,同时通过人工饲养有助于更深入了解其生物学特性;研究结果也可为其他天牛类蛀干害虫幼虫的饲养提供参考。