云南迪庆传统发酵乳制品中乳酸菌多样性分析及具有发酵性能菌株的筛选

为了寻找优质的发酵乳制品生产菌种,同时分析云南省迪庆藏族自治州传统发酵乳制品中乳酸菌的多样性分布状况,从云南迪庆藏族自治州传统乳制品制作和食用较多的牧区采集传统发酵乳制品29份,通过选择性分离,采用16S rRNA基因序列测定的方法对分离到的乳酸菌种进行鉴定及同源分析。对分离到的乳酸菌进行产酸性能测定、传代稳定性检测、菌株生长活力检测。结果共得到148株乳酸菌,其中各属型的数量为乳杆菌属53株、肠球菌属48株、明串球菌属37株、乳酸乳球菌属8株、片球菌属2株。这些乳酸菌属型中,乳杆菌是优势菌群(35.8%),其次依次是明串球菌(35%),肠球菌(32.4%),乳酸乳球菌(5.4%),片球菌属(1.4%)。在所有的菌种中,植物乳杆菌是优势菌,占全菌的26.4%。以产酸能力、传代稳定性、生长活力为指标,从分离到的菌株中获得发酵性能较好的乳酸菌9株。本研究初步阐明了云南迪庆藏族自治州地区传统乳制品中的乳酸菌群落的多样性分布,获得9株发酵性能较好的乳酸菌,为发酵剂的生产应用奠定了基础。     

内蒙古克鲁伦河流域牧区乳及乳制品中乳酸球菌的分离及其鉴定

从克鲁伦河流域牧区24个牧民家庭37份乳及乳制品中,分离到16株乳酸球菌,其中嗜热链球菌4株,乳酸乳球菌乳酸亚种5株,其他棉子糖乳球菌、格氏乳球菌、盲肠球菌、鸡肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌各1株,均属乳酸同型发酵菌,发酵糖的能力也较强.     

微生物制剂源粪肠球菌的分离鉴定及耐药性分析

粪肠球菌是国家允许使用的微生态制剂菌种,但其特殊的耐药性一直饱受争议,为了解市售的两种微生物制剂中粪肠球菌的耐药性,采用常规微生物学方法结合肠球菌属tuf基因的PCR扩增方法分离鉴定粪肠球菌;同时采用Kirby-Baller(K-B)琼脂扩散法检测粪肠球菌分离株对9种抗菌药物的敏感性。结果表明:共分离鉴定出2株粪肠球菌;2株分离菌均对阿莫西林、青霉素、链霉素和四环素耐药,对环丙沙星、呋喃妥因、红霉素、氨苄西林和万古霉素敏感。说明在动物中饲用粪肠球菌类微生物制剂时需要谨慎小心,以免粪肠球菌的耐药性通过各种途径在动物和人之间传递。     

内蒙古克鲁伦河流域牧区乳及乳制品中乳酸球菌的分离及其鉴定

从克鲁伦河流域牧区24个牧民家庭37份乳及乳制品中，分离到16株乳酸球菌，其中嗜热链球菌4株，乳酸乳球菌乳酸亚种5株，其他棉子糖乳球菌、格氏乳球菌、盲肠球菌、鸡肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌各1株，均属乳酸同型发酵菌，发酵糖的能力也较强。     

利用RFLP分型方法鉴定牛源性链球菌和肠球菌

为分离及种属鉴定引起牛乳腺炎相关的链球菌和肠球菌,本研究于兰州及周边地区采集疑似奶牛乳腺炎乳样382份,通过THB(Todd-Hewitt Broth)固体选择培养基初步分离到67株疑似链球菌或疑似肠球菌。参照已发表文献合成链球菌属16S r RNA和16S~23S r RNA间隔区基因引物序列,扩增分离菌株16S~23S r RNA间隔区序列,产物分别利用AluⅠ和RsaⅠ单酶切消化,并以参考菌株的16S~23S r RNA酶切图谱为参考,对分离株进行限制性片段多态性(RFLP)分类分析;再选取各RFLP类群的任一菌株,扩增其16S r RNA基因并测序,并经NCBI核酸数据库进行比对,结果显示67株疑似链球菌中有53株为粪肠球菌(79.1%)、3株为屎肠球菌(4.5%)、3株为肠道肠球菌(4.5%)、8株为无乳链球菌(11.9%)。结果表明肠球菌属细菌(粪肠球菌、肠道肠球菌、屎肠球菌)与兰州市及周边地区奶牛乳腺炎的发病紧密相关,肠球菌属细菌与链球菌属细菌16S r RNA基因同源性很高,但可以通过分子生物学方法准确区分。     

赤腹松鼠肠道细菌分离鉴定及耐药性分析

采用松鼠源肠道样品进行细菌分离培养和细菌16SrRNA基因PCR扩增、测序分析,并进行纸片扩散法药敏试验。结果显示,在33只赤腹松鼠肠道中分离出117株细菌,赤腹松鼠肠道内细菌类群主要有葡萄球菌属(金色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、松鼠葡萄球菌)、埃希菌属(大肠埃希菌)、芽胞杆菌属(蜡样芽胞杆菌、Weihenstephanensis芽胞杆菌、苏云金芽胞杆菌、Samanii芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌)、肠球菌属(粪肠球菌)、克雷伯菌属(肺炎克雷伯菌)、假单胞菌属(荧光假单胞菌)、明串珠菌属(肠膜样明串珠菌);粪肠球菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌对大部分试验药物高度敏感,其他细菌对部分受试药物耐药。赤腹松鼠肠道细菌种群具有多样性,且存在天然耐药现象。本研究为进一步研究野生动物体内细菌携带天然耐药基因提供了素材,也为森林旅游开发的安全性评估及环境保护提供了参考。     

2022年北京市宠物源细菌耐药性监测浅析

为了解北京市宠物源细菌的抗菌药物耐药情况,2022年,笔者对北京市四个城区的四家宠物医院的犬、猫共计50份样本的肛拭子进行了研究。试验对样品中的大肠杆菌和肠球菌首先进行了分离培养和质谱鉴定,然后采用微量肉汤稀释法分析分离菌株的耐药表型。结果共分离出大肠杆菌25株、肠球菌25株（屎肠球菌14株、粪肠球菌11株）。大肠杆菌耐药率最高的2种抗菌药为四环素和氨苄西林,多重耐药菌占44%;肠球菌耐药情况较严重,粪肠球菌耐药率最高的抗菌药物为磺胺异噁唑,屎肠球菌耐药率最高的抗菌药物为磺胺异噁唑、头孢西丁和红霉素,二者多重耐药菌占分离株总数的100%。综上,北京地区宠物源大肠杆菌、肠球菌的耐药情况较为严峻,且多重耐药现象突出,需要加强对宠物抗菌药使用的监督与管理。     

江淮地区猪链球菌和肠球菌分离株的鉴定、分型及药物敏感性分析

为了解江淮地区猪链球菌(SS)和肠球菌分离株的血清型或基因型分布特征及临床耐药性,本研究对江淮地区临床病例196株分离菌进行SS与肠球菌的鉴定,采用PCR方法进行SS及其1、2、7、9血清型和mrp、ef、sly毒力基因型鉴定;脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析SS和肠球菌基因型;K-B法测定其药物敏感性。结果显示,在196株分离菌中,鉴定出112株SS,40株肠球菌。血清型2型SS 44株(39.3%)为优势血清型,ef^-/mrp^-/sly^-型SS 36株(32.1%)为优势毒力基因型,Ps28 18株(16.1%)和Ps27 14株(12.5%)为优势PFGE基因型。肠球菌中屎肠球菌21株(52.5%)为优势菌,Pe12 9株(22.5%)和Pe7 7株(17.5%)为肠球菌优势PFGE基因型。SS和肠球菌对20种药物均表现出不同程度的耐药,耐8种以上药物的菌株数分别占85.7%(96/112)和95%(38/40)。结果表明,江淮地区SS和肠球菌种型复杂,已经成为引起猪细菌性疾病的重要致病菌。分离菌株PFGE基因型均呈多态性,在传播过程中可能存在遗传变异。SS PFGE基因型与血清型、毒力基因型不呈现相关性。菌株耐药现象严重,多重耐药普遍,且耐药谱越来越广。本研究为江淮地区SS和肠球菌的分子流行病学研究及相关疫病防控提供科学依据。     

青海部分地区野生植物花朵附着乳酸菌的分离与鉴定

本试验对青海省部分地区自然生长植物花朵附着乳酸菌进行了分离及鉴定,通过形态学初步鉴定分离到的10株菌为乳酸菌,再通过16Sr RNA分子技术鉴定,其结果为粪肠球菌(Enterococcus faecalis)4株,肠球菌(Enterococcus)1株,猪肠球菌(Enterococcus hirae)3株,屎肠球菌(Enterococcus faecium)2株。     

奶牛瘤胃中粪肠球菌的分离鉴定

粪肠球菌(Enterococcus faecalis)属于链球菌科(Streptococcaceae)肠球菌属(Enterococcus),为兼性厌氧的革兰阳性球菌,可分解葡萄糖,主要产物为乳酸.试验从健康奶牛瘤胃中分离出1株粪肠球菌,为以后进一步研究其在瘤胃发酵中的作用、构建基因工程菌、研制微生态制剂奠定基础.     

四川攀西地区奶牛乳房炎病原菌调查与敏感药物筛选试验

为了解四川攀西地区奶牛乳房炎病原菌和主要病原菌的耐药性情况,采用常规方法对3个奶牛场92个牛奶样品中的病原菌进行了分离鉴定,结果分离到17种菌,共计86株,分离到的病原菌数量最多的依次是大肠杆菌23株、绿脓杆菌17株、葡萄球菌15株、链球菌7株、沙雷菌属4株、弗劳氏枸橼酸杆菌3株、沙门氏菌3株、阴沟肠杆菌复合菌3株、粪肠球菌2株、猪丹毒丝菌2株以及坐皮肤球菌、产酸克雷伯氏菌、屎肠球菌、睾丸酮丛毛单胞菌、枯草芽孢杆菌、施氏假单胞杆菌、奇异变形杆菌各1株。采样量为12头、16头、18头奶牛的3个场,分别分离出14种、13种、16种乳房炎病原菌。同时,采用常规药敏试验方法对分离病原菌株数量最多的8种主要病原菌即大肠杆菌、绿脓杆菌、葡萄球菌、链球菌、沙雷菌、弗劳氏枸橼酸杆菌、沙门氏菌、阴沟肠杆菌复合菌进行了常用抗生素敏感试验,结果表明他们均存在不同程度的耐药性。     

林麝源屎肠球菌LS170308株多重耐药基因岛PRI1分析

屎肠球菌作为条件致病菌在临床上报道的越来越多,主要引起宿主心内膜炎、败血症等,目前关于屎肠球菌的耐药性研究已日益突出,其原因主要在于该菌对β-内酰胺类药物天然耐药及对万古霉素等糖肽类抗生素耐药性不断增强,但该菌耐药性传播机制仍在进一步研究中。本研究拟描述1株林麝源屎肠球菌多重耐药基因岛的特征,显示出该基因岛在不同属细菌中的传播。采用单分子测序技术对这株林麝心源屎肠球菌进行从头测序,同时采用分子生物学工具对该基因岛进行分析。结果显示:这株屎肠球菌染色体上携带多个耐药基因,其中携带ANT(9)、ErmA的Tn554转座酶和携带AAC(6′)-le-APH(2″)-la的一对插入元件IS256共同构成的一个多重耐药基因岛来自金黄色葡萄球菌,该基因岛对大环内酯类、林可酰胺类及氨基糖苷类抗生素具有抗性。结果表明从死亡林麝内脏组织中分离得到1株屎肠球菌,该菌株携带有一个多重耐药基因组岛PRI1,该类型基因岛目前在屎肠球菌中并未有相关报道,同时这株菌来自野生动物,可为野生动物源细菌耐药性传播提供数据支持。     

内蒙古发酵酸乳制品中乳酸菌的分离鉴定

以采集自内蒙古锡林郭勒盟正蓝旗的2份发酵酸乳样品为研究对象,采用传统纯化培养技术、16S rDNA基因序列测定并构建系统发育树的方法,对样品中的乳酸菌进行了分离鉴定,以期解析发酵乳中乳酸菌的多样性,积累食品微生物资源。研究结果显示,共分离15株乳酸菌,被鉴定为3个属9个种,3个属分别为乳酸乳球菌属、明串珠菌属和乳杆菌属,9个种分别为乳酸乳球菌叶蝉亚种（Lactococcus lactis subsp. hordniae,3株）、乳酸乳球菌（Lactococcus lactis,1株）、乳酸乳球菌乳脂亚种（Lactococcus lactis subsp. cremoris,1株）、乳明串珠菌（Leuconostoc lactis,3株）、肠膜明串珠菌肠膜亚种（Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides,1株）、肠膜明串珠菌右旋葡聚糖亚种（Leuconostoc mesenteroides subsp. dextranicum,1株）、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum,1株）、副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei,3株）和干酪乳杆菌（Lactobacillus casei,1株）。综上表明,该研究采集的酸乳样品中乳酸菌资源丰富,是内蒙古传统乳制品优良发酵剂的研发和产业化生产的潜在微生物资源。     

湖南健康猪源与流行性腹泻病猪肠球菌毒力基因检测分析

为研究猪流行性腹泻(PED)病猪群中肠球菌及其携带毒力基因的变化情况,本研究采用PCR方法对115株猪源肠球菌检测其11种毒力基因的分布情况及进行了其溶血试验和明胶液化试验。结果,共检测到9种毒力基因:EF3314、efaA、gelE、ace、asal、cylA、esp、Hyl和EF0591,其中asa373和AS未检测到。72株健康猪源分离菌中毒力基因检出率分别为12.5%、9.7%、5.6%、2.8%、13.9%、4.2%、8.3%、15.3%和1.4%。43株PED病猪分离菌毒力基因阳性率分别为20.9%、25.6%、2.3%、18.6%、51.2%、11.6%、20.9%、0和7.0%。溶血试验结果显示115株肠球菌中溶血的占88.7%,其中α-溶血占40%,β-溶血占48.7%,共有8株检测到溶血素A基因(clyA),检出率为6.9%。11株粪肠球菌全部表现溶血,其中健康猪源分离株为α-溶血,PEDV感染猪分离株为β-溶血。明胶液化试验表明115株肠球菌中只有两株能液化明胶,均为粪肠球菌,一株为健康猪源分离株,一株为PEDV感染猪分离株,而且从这两株菌中均检测到了明胶酶E(gelE)基因。表明PED猪源肠球菌毒力基因检出率明显高于健康猪源肠球菌(p0.05)。明胶液化试验和溶血试验结果表明,粪肠球菌的这两种表型与基因型为肠球菌种中表达一致性是最高的,其携带毒力基因为肠球菌中所占比例最高。通过两种不同来源肠球菌毒力基因的比较,为PED的分析治疗与防控提供依据。     

牦牛源肠球菌的分离鉴定及耐药性分析

试验结合革兰氏染色及16S rRNA分子鉴定,对分离自红原县的17份牦牛粪便样中的肠球菌进行鉴定。结果显示,通过细菌分离纯化及PCR扩增,从牦牛粪便样品中分离出8株疑似肠球菌,分离菌的扩增产物经凝胶电泳后均产生1 500 bp特异性条带。16S rRNA测序结果显示,8株疑似肠球菌中,6株为粪肠球菌,2株为屎肠球菌。同源性比对分析显示,粪肠球菌与参考序列同源性为99.7%~100.0%,屎肠球菌与参考序列同源性为98.2%~99.2%,说明牦牛源肠球菌在遗传进化过程中高度保守。运用K-B纸片法进行药敏试验,结果显示,分离株对氨基糖苷类抗生素耐受性较高,2株屎肠球菌中,11-1-2菌株表现为5重耐药,且该菌株耐万古霉素,粪肠球菌主要表现为3重耐药,药敏结果提示牦牛源肠球菌耐药较严重,应引起高度重视。     

狐源屎肠球菌的分离鉴定及药敏试验

为研究病死狐的发病原因,从死亡狐狸肺脏中分离出1株细菌,命名为分离株11001。然后对分离菌株进行形态学鉴定、16S rRNA鉴定、特异PCR检测、药敏试验、毒力基因检测以及致病性试验。结果表明,分离株培养可见灰色干燥小菌落,革兰氏阳性球状菌,16S rRNA鉴定为屎肠球菌,PCR扩增条带为112 bp,与屎肠球菌片段大小一致;毒力基因检测显示该分离株携带屎肠球菌的致病基因,对氯霉素及万古霉素表现出一定的敏感性。致病性试验显示,接种分离株小鼠死亡。证实该株狐源分离株为屎肠球菌,且具有致病性,可能是引起狐狸死亡的主要原因。     

鸡源粪肠球菌的分离鉴定

试验选择9日龄健康肉仔鸡的肠道内容物,利用肠球菌琼脂培养基分离获得12株疑似肠球菌的细菌。通过对12株菌的生态特征、培养和生理生化特征的测定,筛选3株疑似粪肠球菌的菌株进行16S rDNA分子鉴定,最终获得3株粪肠球菌,命名为HEW-S05、HEW-S09和HEW-S12。为禽用微生态制剂的研制提供菌种来源。     

鲜蛋表面屎肠球菌耐药性及万古霉素vanA基因检测

为了研究新鲜鸡蛋表面屎肠球菌耐药性和万古霉素A(vanA)基因的携带情况,试验在养鸡场收集新鲜鸡蛋,分离蛋壳表面的屎肠球菌,用16S rDNA通用引物对分离的屎肠球菌进行种属鉴定,K-B纸片琼脂扩散法进行耐药性分析,并检测耐万古霉素屎肠球菌携带vanA基因的情况。结果表明:革兰氏染色镜检可见革兰氏阳性单个、成对或短链状排列的圆形菌体,符合屎肠球菌的染色和形态特征;从200枚鸡蛋样品中分离到38株屎肠球菌,分离率为19%;分离到的屎肠球菌对14种抗生素表现出不同程度的耐药性,耐药谱广,最多发现8重耐药菌;在5株耐万古霉素的菌株中检测到了vanA基因。说明新鲜鸡蛋蛋壳表面的屎肠球菌对抗生素耐受性较高,对屎肠球菌特别是耐万古霉素屎肠球菌的监测具有公共健康意义,需要进一步调查以评估食源性传播给人类带来的风险。     

我国18个省份猪源肠球菌耐药调查及分析

为研究我国猪源肠球菌的耐药情况,本研究采集18个省市猪养殖场的粪便样品836份进行了肠球菌的分离鉴定,并通过琼脂稀释法测定11种抗菌药物的最小抑菌浓度.结果 显示:从836份样品中共分离出225株肠球菌,其中屎肠球菌106株,粪肠球菌56株,小肠肠球菌34株,鹑鸡肠球菌17株,铅黄肠球菌7株,坚忍肠球菌4株,Enter...     

福建南平地区猪场饮用水中肠球菌耐药特性研究

旨在探讨不同猪场来源的饮用水肠球菌对6种抗菌药的耐药情况,了解南平地区猪场水源与饮水器出水在肠球菌耐药表型及耐药谱方面的差异。水样中富集培养肠球菌,通过生化、PCR方法鉴定肠球菌菌株。微量肉汤稀释法开展药物敏感性试验,测定肠球菌对抗菌药的最小抑菌浓度(MIC)。结果显示:南平地区11个猪场46株饮用水分离菌对抗菌药的耐药率由高到低分别为:红霉素土霉素氯霉素环丙沙星氨苄西林万古霉素,对前4种药的耐药率分别为:84.78%、76.09%、67.39%和50%,对氨苄西林的耐药率较低,为19.57%,分离出2株耐万古霉素肠球菌(VRE),耐药率为4.35%。蓄水池分离菌总体表现为对土霉素、红霉素、氯霉素耐药,耐药率较饮水器饮用水分离菌略低,为72.73%、72.73%、63.64%,对环丙沙星、氨苄西林的耐药显著低于饮水器分离菌,分别为27.27%、9.09%。保育舍饮水器分离菌对所有药物都有更高的耐药率,其次为育肥舍、哺乳舍、怀孕舍饮水器。南平地区11个猪场一共有13种耐药谱,有19株分离菌对4~5种的抗菌药耐药,其中5株来自于保育舍饮水器。水池进水口及蓄水池分离菌的多重耐药率均低于饮水器分离菌,保育舍饮水器多重耐药率最高。研究结果提示,猪场源头饮用水与饮水器饮用水分离菌对抗菌药耐药存在差异,饮水管网内耐药菌的存在可能是主要原因。