不同方法提取青藏高原蕨麻总DNA的比较研究

以改良CTAB法、改良SDS法、试剂盒法提取青藏高原蕨麻总DNA;用紫外分光光度法测定提取的青藏高原蕨麻的总DNA浓度和质量;用琼脂糖凝胶电泳法、分光光度法测定提取的青藏高原蕨麻的总DNA质量,以期筛选出青藏高原蕨麻总DNA提取的最佳方法。结果表明:用改良SDS法提取的蛋白质含量最高,OD260/OD2801.61左右,用改良CTAB法提取的DNA的OD260/OD2801.76左右;用试剂盒法提取的DNA的OD260/OD2801.70左右;用改良CTAB法提取DNA的浓度在100μg/mL。     

山楂总DNA提取方法的比较

为选择一种快速、简单、有效的山楂总DNA的提取方法,分别应用改良CTAB法、改良SDS法和QIAGEN试剂盒法提取山楂幼嫩叶片的总DNA,用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳和RAPD对所提取的总DNA进行检测。QIAGEN试剂盒法简单省时,提取的山楂总DNA产量高、纯度高、杂质少、DNA碎片少。以该法提取的总DNA为模板进行RAPD扩增,谱带清晰,多态性、稳定性、重复性好。QIAGEN试剂盒法是较为理想的山楂总DNA提取方法,该法提取的总DNA适用于PCR扩增和其他分子生物学研究。     

花椒DNA提取方法的研究

采用经过改良的SDS法和CTAB法对不同品种花椒进行基因组DNA提取,用核酸蛋白分析仪测量DNA浓度,将提取的基因组DNA进行ISSR分析,以期找到一种提取花椒总DNA提取的最优方法。结果表明:改良的CTAB法更适合花椒基因组DNA的提取,CTAB法比SDS法提取的DNA纯度好,所获得DNA样品的OD260/OD280比值在1.8~2.0范围内,琼脂糖凝胶电泳图谱显示条带清晰。     

灰枣成熟叶片DNA提取及ISSR反应体系构建

针对枣DNA提取须用幼嫩叶片或组织培养幼苗这一限制相关实验顺利进行的问题,对常用的DNA提取方法CTAB法进行了改良,在破碎细胞之后,先加入2%β巯基乙醇,3%PVP,100mmol/LEDTA以去除成熟叶片细胞质中的多酚等次生物质,再加核裂解液CTAB以释放DNA。改良的CTAB法提取灰枣成熟叶片基因组DNA,分光光度法检测该法提取的样品DNA得率为55.1～79.1μg/g,D260nm/280nm为1.78～1.87;琼脂糖凝胶电泳检测的结果表明,该法提取的样品DNA分子量为23kb左右;该法提取的样品DNA可以被EcoRI和HindⅢ限制性内切酶进行切割。在此基础上构建了方便快捷的灰枣ISSR反应体系。     

永定县琯溪蜜柚果实套袋比较试验

本文以永定洪山乡琯溪蜜柚为材料,开展了永定产区琯溪蜜柚果实套袋对其果实品质指标的变化及市场销售效益的跟踪调查试验,结果表明,琯溪蜜柚果实套袋可以有效减轻成熟期果实裂果,减少病虫伤疤,提高果面着色,明显改善外观,增加商品率,同时还能明显提高果实的可溶性固形物含量,降低果皮厚度,改良果实品质,经济效益也得到了提升.     

茭白黑粉菌及茭白植株中DNA的提取方法

研究了茭白黑粉菌及茭白植株中基因组DNA的高效提取方法。采用改进的CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）法提取DNA,根据琼脂糖凝胶电泳检测、A260/A280的测定和PCR扩增结果表明,用改进的CTAB法提取茭白黑粉菌及茭白植株基因组DNA,所得DNA无论是纯度还是完整性都比较好,适合于酶切和PCR扩增,可以用于分子生物学研究。     

积温法推算平和县不同海拔区琯溪蜜柚物候期及其应用

针对目前福建省平和县不同海拔区琯溪蜜柚生产中,因未掌握当地物候期,大多仍按照传统月历进行管理的问题,以2009—2013年在平和县小溪镇(海拔36 m)观测的琯溪蜜柚从春梢开始萌发至某物候所需有效活动积温为参照值,利用不同海拔区历史气象资料进行物候期推算,并与田间实测物候期进行比较,探讨有效积温法推算物候期用于生产的可行性。结果表明,有效积温法推算的各海拔区琯溪蜜柚物候期与田间实测物候期基本吻合,可用于指导生产;根据有效活动积温情况,可划定平和县海拔400m以下区域为琯溪蜜柚种植适宜区,海拔400m以上区域为琯溪蜜柚种植次适宜区。     

辣椒基因组DNA提取方法研究

本项研究采用SDS法、CTAB法和高盐低pH法对辣椒(CapsicumannuumL.)叶片基因组DNA进行提取;紫外吸收检测法与琼脂糖凝胶电泳法对DNA的纯度进行检测。紫外吸收检测结果表明,SDS法提取的辣椒叶片DNA具有典型的天然DNA分子的标准紫外吸收光谱特点,其A260/A280在1.771～1.912之间。SDS法提取的DNA经琼脂糖凝胶电泳检测得到一条迁移率很低的整齐清晰的DNA谱带,所提取DNA的质量和产率均较高,用该法提取的辣椒DNA进行RAPD分析,DNA扩增效果较好,带形清晰、整齐,说明SDS法提取的DNA分子较为完整,能用作PCR模板来开展辣椒分子水平的研究。     

越橘基因组DNA的快速提取及分析

为了从富含多酚、多糖及色素的越橘叶片中提取适用于分子生物学研究的高质量基因组DNA。以越橘幼叶为实验材料,比较了CTAB、SDS、高盐低pH值3种提取方法,获得了一种以CTAB法为基础的分离高质量完整DNA的简便、快速方法。用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳、RAPD-PCR、酶切等方法对获得的DNA进行了分析,结果表明,快速CTAB法所提取的DNA产量高、质量好,完全能够满足RAPD、PCR等分子生物学实验的要求。     

几种三华李基因组DNA提取方法的比较研究

以CTAB法、改良CTAB法、SDS法、改良SDS法、改良陈大明法、高盐低pH值法、SDSCTAB法和氯化苄法等8种目前常用植物基因组DNA提取方法为基础,通过采用异丙醇和无水乙醇进行2次常温短暂沉淀、提高离心力等多种去杂质措施进行适当改进,对它们用于三华李基因组DNA提取的效果进行比较。结果表明,8种方法中以CTAB法最优,改良CTAB法其次,高盐低pH值法稍逊,其他5种方法则不适合于三华李基因组DNA的提取;CTAB法不仅适合于早食李不同季节(4月、8月和12月)和不同成熟度叶(未展开嫩叶、展开嫩叶、成熟叶和老叶)基因组DNA的提取,也适合于华蜜大蜜李、白脆鸡麻李、大鸡麻李、中蜜李、小蜜李、串珠李、从化三华李、红线李、香蕉李、中熟李和软枝三华李等11个三华李品种嫩叶基因组DNA提取。     

鼠尾草属品种DUS测试指南的研制

以国际植物新品种保护联盟（UPOV）指南（TG/361/1）为主要参考指导，遵循植物品种特异性（可区别性）、一致性和稳定性测试技术规范，收集并测试了鼠尾草属22份材料，最终确定47个测试性状，在UPOV指南基础上增加了1个性状，重新定义了2个性状，调整了10个性状的表达状态和5个性状的观测方法，并对部分测量细节进行了调整。本指南适用于观赏型鼠尾草属植物（已发布测试指南的一串红和丹参除外）测试。13个数量性状可将测试鼠尾草属植物聚为3支，参与测试的林地鼠尾草及其栽培品种均聚在第1支，表明该指南测试数据可靠，可对鼠尾草属新品种判定起重要作用。     

草莓未受精子房离体雌核发育的研究

 将凤梨草莓（Fragaria × ananassa Duch.）品种‘明旭’未受精子房在适宜离体条件下培养,诱导其雌核发育。在雌核发育的不同时期采用爱氏苏木精整体染色—石蜡切片法、整体染色—冬青油透明—石蜡切片法、解剖—整体透明法观察研究,结果表明雌核发育有3种不同的现象：①卵细胞启动分裂形成原胚,即卵细胞孤雌生殖;②偶尔有反足细胞启动分裂形成细胞团,但进一步发育的方向不清楚,很难形成胚体,未发现助细胞的无配子生殖;③个别极核分裂形成少数类胚乳游离核、游离核集团或胚乳状细胞结构等自发胚乳。胚的形态表现多样,可划分为典型胚、具畸形细胞胚和愈伤组织化胚。但无论哪种胚均是卵细胞孤雌生殖的结果;典型胚的发育和体内正常胚胎发育途径相似;胚囊植株主要经典型胚发育而成。具畸形细胞胚和愈伤组织化的胚很难形成胚囊植株。     

菊花新品种‘东篱雅韵’

菊花新品种‘东篱雅韵’是以中国传统大菊品种‘玉狮子带’为母本，以重瓣性高、不同色系的‘桃花浪’、‘永寿墨’和‘金背大红’等大菊品种的混合花粉进行人工授粉杂交，经连续选择育成。重瓣性高，主要观赏期10月下旬到11月上旬，舌状花基部红色，先端黄色，盛开时向外翻卷，植株低矮，直立性强，适于盆栽观赏，可以用于北京地区节日布展或庭院观赏。     

中早熟辣椒新品种‘农大7号’

‘农大7号’辣椒是以HP1016为母本，Y0931为父本杂交选育而成。植株长势强，平均株高78.7 cm，中早熟。果实羊角形，青熟果黄绿色，果面光滑，果肉厚，平均单果质量80 g，平均单株结果数26.8个。果实维生素C含量0.56 mg • g-1，粗纤维含量1.15%。抗疫病、炭疽病等。适宜河南全省各地（含烟区）早春保护地种植。     

菊花新品种‘东篱知秋’

‘东篱知秋’菊花以大菊品种‘太液池荷’为母本，以重瓣性高、不同色系的‘紫如意’、‘金丝荷’和‘朱紫蛟龙’等混合花粉进行人工杂交，经连续选择育成的新品种。花期早，主要观赏期为9月下旬—10月上旬。舌状花粉色，植株低矮，直立性强，适于盆栽，可以满足北京地区国庆节用花需求。     

月季花瓣特异表达启动子的筛选和鉴定

以月季品种‘萨曼莎’（Rosa hybrida‘Samantha’）为试验材料，选取了13个花色、花香相关的基因，研究其在根、茎、叶和花等器官中的表达规律及其启动子活性。结果表明，RhOOMT2（Rosa hybrida orcinol o-methyltransferase 2）和RhCCD4（Rosa hybrida carotenoid cleavage dioxygenase 4）在花瓣中具有相对较高的表达量，RhNUDX1（Rosa hybrida nudix hydrolase 1）在根部表达量最高，花瓣中其次，在茎和叶中几乎没有表达，另外10个类黄酮代谢途径相关基因在各器官中表达差异较小。使用FPNI-PCR的方法克隆到ATG上游1 601 bp的RhOOMT2启动子、1 539 bp的RhCCD4启动子和1 433 bp的RhNUDX1启动子。将携带RhOOMT2、RhCCD4和RhNUDX1启动子的PBI121载体通过农杆菌的介导，在月季‘Samantha’、洋桔梗（Eustoma grandiflorum‘Green Pelleted’）和百合（Lillium Oriental hybrida‘Siberia’）花瓣中进行瞬时表达，GUS染色结果表明，与阳性对照35S启动子相比，RhOOMT2启动子在月季、洋桔梗和百合花瓣中具有更强的活性，RhCCD4启动子在百合花瓣中具有较弱的活性，而在月季和洋桔梗中活性很弱，RhNUDX1启动子则在3种花中均无活性。进一步在4个月季品种‘萨曼莎’、‘戴安娜’、‘香槟月季’和‘雪山’中比较了RhOOMT2和35S的启动子活性，证实了在花瓣中RhOOMT2启动子具有比35S更高的活性。     

辣椒碱基–抗坏血酸转运蛋白（NAT）家族基因的鉴定和表达分析

利用生物信息学手段，在辣椒‘遵辣1号’中鉴定到12个碱基–抗坏血酸转运蛋白（NAT）基因，命名为CaNAT01 ~ CaNAT12，它们不均等的分布在7条染色体上，片段复制和串联复制是其扩增的原因。CaNATs包含多个跨膜结构域，等电点主要集中在8.39 ~ 10.15。系统进化分析发现植物中的NAT起源于D亚组基因，后经过分化，在双子叶植物中稳定存在4个亚组，C亚组基因间的核苷酸差异最小，在进化过程中最保守，CaNATs在这4个亚组均有不同分布。辣椒NAT家族基因具有明显的组织表达差异性，部分基因在根、茎以及果实发育过程中具有重要的调控作用。在低温、高温、干旱和盐胁迫下通过qRT-PCR分析发现CaNATs具有不同程度的响应，对低温和高温具有较强的响应。     

LED补光组合对大棚越橘生长发育的影响

以2年生南高丛越橘‘Emerald’为材料，以大棚内自然光作为对照，研究LED光源的红蓝光（3︰1和6︰1）、紫外光（UVA）对植株长势、叶片光合作用、碳氮代谢、开花基因表达及开花率、果实品质的影响。结果表明：红蓝光组合处理下‘Emerald’的植株营养生长较旺盛，株高、1年生枝条长度和粗度显著高于对照。此外，红蓝光（6︰1）处理下叶片的叶绿素相对含量、比叶重和净光合速率均显著提高。红蓝光组合也可诱导植株开花，开花基因FT表达量和开花率明显高于对照。紫外光下叶片的氮含量、开花率及FT基因表达量显著高于对照。不同光质组合补光对‘Emerald’的果实品质有显著影响，红蓝光（3︰1）处理下果实的质量、横纵径、可溶性固形物、可溶性糖、花青素含量和糖酸比均高于对照。总之，不同光质补光会促进越橘‘Emerald’的生长发育，红蓝光6︰1组合对促进营养生长作用相对较大，红蓝光3︰1组合对提高果实品质效果较好。紫外光虽能改变植株形态和促进开花，但果实品质提高效果较红蓝光处理稍弱。     

Establishment and application of cell model for P2ry2 modulators screening based on CaCC

AIM To construct a high-throughput screening cell model for P2Y₂ purinergic receptor （P2ry2） modulators based on calcium-activated chloride channel （CaCC）. METHODS The mRNA expression of P2ry2 in Fischer rat thyroid （FRT） cells was detected by RT-PCR， and the PCR products were collected and sequenced. The protein expression of P2ry2 in the FRT cells was also detected by Western blot. The eukaryotic expression vectors ANO1 and YFP-H148Q/I152L were constructed. The FRT cells co-expressing ANO1 and YFP-H148Q/I152L were obtained by liposome transfection， antibiotic screening and limited dilution. The expression of ANO1 and YFP-H148Q / I152L in the cells was observed under fluorescent inverted microscope. The validation of the cell model for screening P2ry2 modulators was verified by the fluorescence quenching kinetics tests， and intracellular free calcium was analyzed by Fura-2 staining to investigate the dose-dependent relationship between intracellular calcium concentration and P2ry2 modulators. Z' factor was applied to evaluate the stability and repeatability of the cell model. RESULTS P2ry2 were endogenously expressed in the FRT cells. The expression of ANO1 on the cell membrane and the expression of YFP-H148Q/I152L in the cytoplasm were observed under fluorescent inverted microscope. The cell model was successfully constructed. The fluorescence quenching kinetics test confirmed the cell model for screening P2ry2 modulators was constructed successfully， and the calcium concentration in cytoplasm was increased rapidly after the addition of a small amount of P2ry2 agonist， indicating that the cell model was sensitive for detecting the calcium concentration in cytoplasm. The calcium concentration in cytoplasm， P2ry2 modulators and the slope of fluorescence change were in a dose-dependent manner， respectively. The Z' factor was 0.75， indicating that the established cell model was able to use for high-throughput screening of P2ry2 modulators with excellent stability and repeatability. CONCLUSION A simple， economical， and efficient cell screening model of P2ry2 modulators is successfully constructed， which is suitable for the detection and evaluation of P2ry2 modulators.