肝素和钙离子载体诱导波尔山羊精子体外获能和体外受精

运用肝素、钙离子载体（IA）协同咖啡因诱导波尔山羊精子体外获能，利用去透明带金黄地鼠卵穿透试验检测了精子的获能效果。结果发现：精卵孵育4h和6h时的穿透率均高于2h时的穿透率；肝素和钙离子载体对精子获能有明显的促进作用，与未添加组相比差异极显著（P〈0．01）；20mg／L和50mg／L的肝素剂量组，去透明带金黄地鼠卵穿透率为64．7％、68．4％；钙离子载体的添加剂量在0．3μmol／L时，穿透率达到68．2％；咖啡因与肝素、钙离子载体具有明显的协同作用。将获能的精子与山羊卵母细胞进行体外受精孵育17h，也获得了60％以上的受精率。     

波尔山羊精子体外获能及穿卵效果的研究

通过不同培养液对精子获能效果、获能后穿卵效果的比较,确定培养液的适宜配方及获能液中肝素的适宜添加浓度。精子用含有肝素的3种培养液进行获能处理,每个处理4个重复。试验设计了5个不同的肝素水平,即0、5、10、15、20μg/mL。于获能处理后4 h检查精子的顶体反应率、活力和活精子率。结果表明,添加15μg/mL和20μg/mL肝素能促进精子的获能效果和获能精子的穿卵效果。     

不同获能条件对猪精子体外获能和体外受精的影响

探讨猪精子在mTBM和TALP中分别获能2、3、4、5h和6h对体外获能的影响,并研究最适获能时间的精子体外受精的效果。结果表明:随着获能时间的延长,猪精子顶体反应率逐渐升高、质膜完整性逐渐下降,获能6h时的顶体反应率显著高于其他时间组,分别为52.5%和50.8%(P<0.05);质膜完整性显著低于其他时间组,分别为30.5%和31.4%(P<0.05);可获能4h的超激活运动率显著高于其他时间组,分别为56.6%和54.5%。将鲜精与冻融的精子获能4h后与成熟的猪卵母细胞进行体外受精,mTBM处理组的卵裂率显著高于TALP,分别为42.7%与40.2%和35.9%与33.4%,但鲜精与冷冻精液组间差异不显著。     

肝素对山羊精子体外获能的影响

哺乳动物的精子在刚射入雌性生殖道时,或从附睾取时,并不具备受精能力,必需在雌 性生殖道内经过一段时间,发生生理及形态学的变化才能获得受精能力,这一现象是被美籍 华人科学家张明觉和澳大利亚科学家Austin发现的,后来被Austin称为精子获能(Sperm Cap acitation) .获能是哺乳动物精子的成熟过程和受精的必要前提,影响获能的因素有很多 ,如肝素、钙离子载体、温度、pH等.而肝素在多种动物身上被证实对精子的体外获能有很 好的诱导作用.肝素中高度硫酸化的氨基多糖GAG可促使精子对钙离子的吸收,从而诱发顶体反应.     

获能液及精子密度对牛性控精子体外受精成功率的影响

本实验探讨了不同的精子获能添加物、精子密度、精子获能液对牛性别分离精子体外受精（IVF）的影响。结果表明：受精液中同时添加10μg/mL的肝素与5mmol／L的咖啡因,能促进牛性控精子体外获能与受精。精子密度在1．0×10^6个/mL时其囊胚发育率最高。用BO液和mTyrode’s液对牛性控精子进行获能和受精处理．其受精效果差异不显著（P〉0．05）,但BO液作用时间短对早期胚胎的发育影响较小,比较适合牛性控精子IVF。     

鸭精子体外获能及获能后测定方法的研究

本试验采用常规家禽稀释液为对照组,另设获能稀释液三个组,以不同类型的试剂:肝素钠、同种血清、水解蛋白液为试验组.结果表明:常规稀释液处理的鸭精子不具有穿透卵黄膜的能力,而其它三组获能稀释液,经筛选比较,最为理想的是添加同种血清组,通过获能稀释液处理后,鸭精子不仅存在获能过程,且具有穿透卵黄膜之功能.     

葡萄糖对牛精子体外获能及体外受精的影响

哺乳动物精子在离开生殖道时,还不具备受精能力,必须在雌性生殖道中经过一段时间的成熟,才获得受精能力,即精子获能,该过程也可在体外适宜的环境中完成,称之为体外获能。在这个过程中,葡萄糖是重要的能源物质,并且获能过程中的葡萄糖对随后的胚胎发育也有很大影响。Francoise U     

猪精子体外获能的研究概况

精子获能现象的发现大大促进了体外受精技术的发展。近年来,在精子体外获能的研究过程中不断加深了人们对精子获能机理的认识,同时也不断提高了精子体外获能的效果．进一步推动了体外受精技术的发展。就当前猪精子体外获能研究概况进行综述,希望能对进一步深入研究有所启示。     

牛精子体外获能的研究进展

文章从精子体外获能的分子机制和体外获能的影响因素等两个方面对牛精子体外获能的发展现状作了比较全面的概括.同时指出了各种处理精子方法的优缺点.并指出了牛精子体外获能的研究价值和意义.     

小鼠获能精子体外短期保存的初步研究

本实验以小鼠为实验动物 ,检测已获能精子在 4℃、 2 4℃保存能否维持其受精能力 ,以期为家畜的体外受精提供有益参考。结果表明 :1) 2 4℃保存的精子受精率明显高于 37℃和 4℃保存的精子 (P <0 0 5 ) ;2 ) 2 4℃保存的精子浓度增加 ,其受精率明显增加 (P <0 0 5 ) ;3)获能精子于 2 4℃、 5 %CO2 和空气保存 2 4h ,其受精率没有明显差异 (P >0 0 5 ) ;4 )获能精子于 2 4℃保存 5 %CO2 2 4、 4 8和 72h后的体外受精率有明显的差异 (P <0 0 5 )。     

肝素浓度对辽宁绒山羊精子体外获能的影响

在TALP液中添加不同浓度(25、50、100μg/mL)的肝素对辽宁绒山羊精子进行获能处理,在显微镜下检测处理1、2、3、4、5h后的精子活力,用考马斯亮蓝染色法检测获能处理0.5、1、2、4h后的精子获能状况,探讨肝素浓度对绒山羊精子活力、存活时间、获能率的影响。结果发现,在38.5℃、5%CO2、饱和湿度条件下,精子活力随肝素浓度升高而下降,3 h以后25μg/mL肝素组精子活力显著高于其它肝素组(P<0.05)。添加肝素组获能率显著高于对照组(P<0.05),各肝素组精子获能率差异不显著(P>0.05)。对照组精子存活时间最长,25μg/mL肝素组精子存活时间为10.12 h,显著高于其它两组(P<0.05)。表明25μg/mL肝素处理辽宁绒山羊精子体外获能较为适宜。     

影响哺乳动物精子体外获能的因素

精子的体外获能是哺乳动物体外受精技术中的关键环节之一。笔者阐述了温度、培养液的pH值、渗透压、动物的种类及培养液的组成对精子体外获能的影响。     

牛精子体外获能前后超微结构的研究

应用透射电镜技术,对牛精子体外获能前后超微结构观察的结果表明,牛精子的超微结构相似于其他哺乳动物,但顶体较大;获能后精子发生了顶体反应.在顶体反应中,囊泡化有3种形式:(1)顶体外膜相互融合,形成囊泡;(2)顶体外膜内陷形成囊泡化;(3)顶体外膜和质膜融合形成囊泡.此外,对精子的结构特点和囊泡形成过程进行了讨论.     

获能处理对山羊精子结合外源DNA能力的影响

鲜精离心洗涤除去精浆,然后用0.4 μmol/L钙离子载体(IA组)作用10 min或用10 mg/L肝素(HE组)作用90 min获能后,与DNA孵育,再用地高锌(DIG)末端标记的线形外源DNA进行转染,用免疫组化的方法分别检测它们的转染效率;用透射电镜观察精子获能前后的超微结构变化,并用碘化丙锭和羟化荧光素双探针检测获能对精子质膜完整性的影响,探讨精子获能影响精子结合及内化外源DNA变化的原因.结果显示,获能处理降低了精子结合和内化外源DNA能力,IA组和HE组结合率分别为(17.41±4.69)%和(15.00±4.36)%,都极显著低于未经获能处理的精子(32.97±4.58)%(P<0.01).IA组、HE组和对照组(未获能)内化率分别为(12.09±2.50)%、(8.93±1.79)%和(25.52±2.57)%,IA组、HE组均极差异小于对照组(P<0.01).超微结构观察和双荧光探针检测都发现精子获能后质膜完整性降低.用IA或HE获能后的精子质膜完整率是分别是(33.16±6.46)%和(33.90±4.14)%,与对照组差异极显著(P<0.01).结果表明,精子结合及内化外源DNA不是纯粹的分子渗透现象,而是受严格的分子调控的.     

棕熊精子体外获能及异种穿卵的超微结构研究

对棕熊精子体外获能前后和异种穿卵的超微结构观察表明，棕熊精子全长７７μｍ，由头、颈和尾３部分组成，头部长７．３ｍ，宽２．５μｍ，主要由核、顶体及顶体后区组成；颈部由中心粒和９条纵行分节的节柱组成；尾部全长６８．２μｍ，其中中段长１３．２１ｍ，线粒体为６５－６８旋，主段中央为“９＋２”的微管结构，基外方被９条致密纤维和纤维鞘包裹。精子获能前群集成簇，运动缓慢；获能后精子呈超激活运动。获能的精子质膜膨     

CTC法结合体外受精比较不同方法对绵羊精子体外获能的影响

为比较不同获能方法对绵羊精子的获能效果，新鲜绵羊精液分别经肝素上游法(swim-up)、钙离子载体(IA，A23187)诱导法、Percoll离心法和Percoll离心后肝素孵育法进行精子获能的诱导后与体外成熟的绵羊卵母细胞进行体外受精，并利用金霉素荧光染色（chlortetracycline，CTC）法结合各自相应的体外受精结果对其获能效果进行检验。结果显示上游法处理后精子的获能比例和受精后的卵裂率均高于其它组, 说明肝素上游法可以较好的诱导绵羊精子获能。