锦鲤疱疹病毒病的研究进展

就锦鲤疱疹病毒病的病原学、流行病学特征、临床症状、检测方法和防治技术方面取得的成果进行了综述,为研究和预防锦鲤疱疹病毒病提供参考。     

锦鲤疱疹病毒病的诊断病例

锦鲤疱疹病毒病(koi herpesvirus disease,KHVD)是由锦鲤疱疹病毒(koi herpesvirus,KHV)感染锦鲤、鲤及其普通变种如框镜鲤等而导致的一种具有高度传染性和致死性的疾病。该病多发生在水温为18℃～28℃的春秋季节,具有高度传     

锦鲤疱疹病毒病简述

锦鲤疱疹病毒病是一种危害严重,尚无有效治疗方法的高致病性传染病。本文汇集大量科研成果,从病原学、流行病学、病理学三个角度对该病毒的特性进行简述,在此基础上,推荐了实验室检测技术,提出了防控建议。     

台湾省发生锦鲤疱疹

台湾近日大范围发生锦鲤疱疹(KHV),遭传染的锦鲤大面积死亡。记者从广东检验检疫部门及广东省海洋渔业局获悉,广东鱼类市场暂未发现KHV鱼病毒。但有关部门提醒,由于KHV传染性较强,各农产品进口商进口鱼类时要多加注意。据悉,台湾目前流行的KHV鱼病毒,造成市场价格高昂的锦鲤大量死亡。而该种病毒亦曾在以色列、印尼、日本等国大面积爆发,去年冬季KHV在日本爆发,造成660t、大约330万条的鲤鱼感染死亡,其渔业损失金额超过了1.5亿日元。台湾省发生锦鲤疱疹     

锦鲤疱疹病毒的PCR鉴定

根据锦鲤疱疹病毒(koi herpesvirus,KHV)的基因序列合成了2对引物,对送检的发病锦鲤样品提取DNA进行PCR检测,分别扩增出KHV的胸腺嘧啶脱氧核苷激酶基因(thymidine kinase,TK)409 bp和AF411803基因序列484 bp的条带,对484 bp的PCR扩增产物经限制性内切酶TaqⅠ和AluⅠ酶切,分别得到200 bp/284 bp和185 bp/299 bp的片段,484 bp的PCR扩增产物的测序结果与GenBank上已发表的KHV序列一致。结果显示发病锦鲤为KHV阳性。     

进口蜂产品传入蜂类疫病风险评估

本研究应用OIE风险分析的基本原理,借鉴欧美、澳新等发达国家的经验,针对OIE规定的6种蜂类疫病通过进口蜂产品传入风险的评估,得出在进口蜂产品时需关注的传入蜂类疫病的风险,提出市场准入、产地要求、进口检疫、实验室检测等关键环节的风险管理措施,降低我国进口蜂产品所带来的疫病传入风险。     

桉液对锦鲤疱疹病毒细胞内复制影响的试验

本试验使用细叶桉树的树叶制备成的桉液作为病毒致弱的试剂,将不同稀释度的桉液分别作用于锦鲤鳍条细胞系和在锦鲤鳍条细胞系复制的锦鲤疱疹病毒。结果表明,桉液浓度越高KF-1细胞增殖越困难。桉液浓度低于1:400时,对细胞生长无明显影响。当桉液浓度在1:400时,其病毒抑制率达到77.2%。用统计软件SPSS11.5的Linear-regression分析直线回归方程为,y=0.375x+6.264,R=0.971,P0.05。说明桉液的浓度与病毒抑制率间有相关直线关系。即药物浓度越高,抑制病毒增殖的能力越强,其量效关系表现显著。     

利用PCR方法检测锦鲤疱疹病毒3个主要靶基因

为建立锦鲤疱疹病毒(KHV)多靶基因PCR检测方法,本实验将KHV接种鲤鱼鳍条细胞,收获病变细胞悬液,提取DNA,根据GenBank中登录的KHV基因序列及出入境检验检疫行业标准推荐的基因(ORF7),设计合成3对特异性引物,针对胸苷激酶基因(TK)、聚合酶基因(Sph)和ORF7基因进行PCR检测.通过优化后的反应体系进行特异性、敏感性试验和样品检测.结果表明:3对引物能够分别特异性扩增出409bp、292 bp和484bp片段;敏感性试验表明对TK基因检测的敏感性高于Sph和ORF7基因,其最低检测量为1.9×106copies/μL;采用优化的3个PCR方法对8个有临床症状的样品进行检测,其中3份样品的3个基因PCR扩增结果均为阳性.因此,本研究选取的3个基因均可用于KHV的检测及确证实验.     

锦鲤疱疹病毒荧光定量PCR检测方法的建立

根据锦鲤疱疹病毒(KHV)胸苷激酶(TK)基因的保守序列设计一对引物和相应的TaqMan探针,建立荧光定量PCR方法,用于锦鲤疱疹病毒快速、灵敏、可定量的检测手段。构建并制备实时荧光定量PCR的标准品,对反应体系进行优化,并做特异性,敏感性和重复性试验。结果表明,成功构建荧光定量PCR标准品,建立荧光定量标准曲线,标准曲线的相关系数为0.992,所建立的荧光定量PCR方法特异性强、敏感性高,重复性好。     

多重PCR方法检测锦鲤疱疹病毒基因

根据对已报道的PCR检测方法灵敏性评价,以常用KHV病毒PCR检测的目的基因KHVSphI片段(AY568590)、KHV5/9(AF411803)和KHVTK基因(AJ535112)作为靶基因,设计并选择3对特异性引物建立的多重PCR检测体系用于KHV病毒多基因的检测。本研究建立的多重PCR体系具有较高的特异性,能够特异性扩增出KHVSphI片段290bp、KHV5/9片段484bp和KHVTK基因片段409bp,对锦鲤和鲤鱼的另外一种病毒性病原鲤春毒血症病毒检测结果为阴性。多重KHV病毒PCR体系检测KHVSphI、KHV5/9和KHVTK基因片段单一模板的检测下限分别为:10fg、100fg和100fg,在相同模板浓度的情况下,KHVSphI、KHV5/9和KHVTK基因片段同时被检出的检测下限为100fg。对KHV病毒感染组织的检测结果表明,多重KHV病毒PCR检测结果与常规PCR检测结果基本吻合,在多重PCR检测体系中KHVTK基因片段检测的灵敏度高于检验检疫行业标准方法。结果表明,多重KHV病毒PCR检测方法能够快速、准确和灵敏地检测KHV病毒基因。     

一种新发现的鱼类病毒KHV在国外的流行和研究现状

１锦鲤疱疹病毒 (ＫＨＶ)简介锦鲤疱疹病毒 (ＫｏｉＨｅｒｐｅｓＶｉｒｕｓＫＨＶ)是近三年做为锦鲤的致死病因而被鉴定发现的 ,是一种新发现的烈性水生动物疱疹病毒。在英国、以色列、美国和欧洲等国家和地区都曾暴发过这种病毒。２００１年夏末 ,设在英国的国际观赏鱼贸易协会 (ＯＡＴＡ)报道 :这种专门危害锦鲤等鱼类的病毒感染鱼后 ,超过５０%的病例表现出发病快和死亡率高的特点。然而 ,只有极少数研究机构在研究该病毒及所致疾病。目前 ,在我国尚未发现有关报道。２ＫＨＶ病毒的生物学特点及其所致疾病的临床症状２．１ＫＨＶ病毒的生…     

Testing and Identification of Carp Edema Virus Disease in Cultured Koi

An acute infectious diseases occurred in a koi farm in Fangshan district, Beijing, and it resulted in mortalities of more than 50%.The main symptoms of sick koi were gills necrosis, kidney erosion and edema,which were similar to the clinical signs of koi herpes virus disease (KHVD).But PCR tests showed negative results for KHV. For further diagnosis, bacterial cultures, transmission electron microscopy studies, virus isolation and PCR tests were used. Electron microscopic observation revealed pox virus particles having a size of about 200 nm×400 nm in the kidney. 548 and 180 bp fragments were amplified from organs of sick koi by PCR method using specific primers of carp edema virus (CEV). The fragments were sequenced and analysed. The results showed that they were shared 100% nucleotide identity with CEV-H504. All the results indicated that this disease was carp edema virus disease, caused by a kind of pox virus, CEV. This was the first report on the CEV of cultured koi in China.     

养殖锦鲤鲤鱼浮肿病的检测与鉴定

北京房山某锦鲤养殖场锦鲤发生大量死亡,患病锦鲤呈烂鳃、肾脏糜烂、身体浮肿;症状类似锦鲤疱疹病毒（koi herpes virus,KHV）感染,但经PCR检测排除了KHV感染。为进一步确定病原,对发病鱼进行了临床症状观察、病毒分离、细菌分离培养、病鱼组织超薄切片电镜观察和PCR扩增等检测。通过病鱼组织超薄切片电镜观察,在肾脏内可见200 nm×400 nm的痘病毒样颗粒。抽提病毒核酸后,用已知的鲤鱼浮肿病毒（carp edema virus,CEV）的保守序列设计2对引物进行PCR扩增,扩增出548和180 bp片段,测序结果和GenBank公布的CEV H504株序列完全一致。根据发病鱼临床症状和实验室检测结果,最终确定该病为CEV引起的鲤鱼浮肿病。这是在中国首次发现的鲤鱼浮肿病。     

猪伪狂犬病毒传入猪场的风险评估模型研究

为评估未来3年内猪伪狂犬病毒(PRV)变异株传入某阴性种猪场的风险,通过文献分析,结合国家定点监测分析结果和专家经验,建立了PRV传入猪场的风险路径。以该风险路径为依据,采集和整理与风险路径中各风险因素相关的数据,开展了定性分析评估。结果发现,PRV通过未经野毒抗体检测的种猪、外购精液,以及气溶胶和带毒老鼠传入的风险极高。     

鲑甲病毒的传入风险评估

目前我国尚未有发现鲑甲病毒(SAV)感染的相关报道。如果SAV随进口贸易的鱼类进入我国,会给我国的水产养殖业造成很大的损失。为了保障我国水产养殖业的健康发展,针对进境水生动物种类开展了SAV跨境传播的风险评估,并提出了科学的风险管理措施。综合风险分析认为,我国传入SAV的主要威胁是来自疫区的活的大西洋鲑、褐鳟鱼和虹鳟,其次是冰冻和冰鲜的大西洋鲑、褐鳟鱼和虹鳟。建议对活的、冰冻和冰鲜的易感鱼类以及用做鲜活饵料的鱼类,禁止从疫区进口;鱼肉、加工后的制品以及其它非易感鱼类是低风险的,可以自由贸易;对运输活鱼的水、包装等要进行强制常规消毒,无需检测。     

罗非鱼湖病毒病传入风险分析

为评估罗非鱼湖病毒（tilapia lake virus,TiLV）跨境传入风险,按照OIE传入风险评估框架,从危害识别、风险评估及风险管理3个方面,开展了TiLV跨境传入风险分析,并提出了相应的风险控制措施。分析认为：活的敏感鱼类（包括亲鱼、鱼卵和鱼苗）,用做鲜活饵料的鱼类（野杂鱼）及冰冻和冰鲜的敏感鱼类（包括去除内脏的鱼肉）TiLV传入风险较高,而敏感鱼加工类产品、非敏感鱼类（包括活的和其他形式的产品）及运输活鱼的水、包装、运输工具和用具等传入风险较低。建议不从疫区进口高风险产品,对于低风险产品可以自由贸易,而对运输活鱼的水、包装、运输工具和用具等要进行强制常规消毒。     

施马伦贝格病自然传入中国的风险分析

为有效防范施马伦贝格病的传入,了解其流行趋势.以2011年-2012年的世界动物卫生组织(OIE)官方疫情数据为基础,采用地理信息系统,对疫病传播的时空数据进行初步分析.经过评估表明,该病在每年7月～9月传播速度最快,虫媒传播是其主要传播方式;自然传入中国的风险较高,自然条件下通过虫媒传播的速度约800 km/年,经反刍动物通道传入中国约需2年～3年时间.中国应密切关注施马伦贝格病疫情的发展态势,积极开展防控技术研究,并加强重点区域的监测工作.     

湖北省某公牛站经引种发生口蹄疫的定性风险评估

根据湖北省某公牛站的引种流程和生产管理规范建立风险评估模型,定性评估该站2017年经引种发生口蹄疫的风险。结果显示,经引种发生口蹄疫的风险为"非常低",不确定性为"中"。根据评估结果,建议公牛站在引种过程中增加对引进种公牛的强化免疫,增加非结构蛋白抗体检测和病原学检测,严格按照产地检疫规程申报检疫,按照规范程序引种,严格落实消毒措施,以确保引进种公牛健康。同时,建议定期开展全群监测,尤其是加强对供精牛群隐性带毒感染的监测,以确保精液的质量和安全。     

单纯疱疹病毒脑炎模型的研究

对单纯疱疹病毒(HSV)感染小鼠致病特点进行了观察,小鼠感染HSV第3天后开始发病,感染后第2天脑内可检测出病毒核酸,第3天脑内可分离出病毒,第4天病毒滴度达到高峰,发病2天内死亡。电镜观察感染鼠脑内组织出现超微结构改变,并可找到病毒颗粒。结果说明所建立的HSV脑炎模型可用于评价抗HSV药物。