桑树SSR-PCR反应体系的优化

为了建立经济稳定的桑树简单重复序列(SSR)-PCR反应体系,为SSR分子标记在桑树研究中更广泛地应用提供试验基础,采用L_(16)(4~5)正交试验设计和单因素试验,对桑树SSR-PCR反应体系中的模板DNA浓度、引物浓度、Mg~(2+)浓度、dNTPs浓度和rTaq酶用量5个因素的4个水平进行优化分析,并比较这5个因素的不同浓度对扩增效果的影响。结果表明,各因素水平变化对反应体系的影响大小依次为Mg~(2+)、dNTPs引物模板DNArTaq酶。研究最终确立了最佳反应体系,即在10μL反应体系中,含有1.5μL 10～20 ng/μL DNA模板、0.4μL 25 mmol/L Mg~(2+)、0.5μL 2 mmol/L dNTPs、各0.15μL 20μmol/L正反向引物、0.1μL 5 U/μL rTaq酶和1μL 10×loading buffer。通过稳定性检测,表明该体系能够用于桑树的SSR分析。     

金铁锁SSR-PCR反应体系的建立与优化

【目的】建立和优化金铁锁SSR-PCR反应体系。【方法】以金铁锁嫩叶为试验材料,采用Ezup柱式植物基因组DNA抽提试剂盒、SDS法和CTAB法提取金铁锁DNA,并对提取结果进行比较。利用初筛并合成的20对金铁锁EST-SSR引物,对影响SSR-PCR体系的模板DNA、引物、Taq DNA聚合酶和dNTP用量这4个因素进行L16(44)正交实验,从而建立较为稳定的金铁锁SSR-PCR反应体系。【结果】试剂盒法提取得到的金铁锁DNA质量最好且符合SSR分子标记试验;在20对金铁锁EST-SSR引物中,有2对可用于SSR多态性分析;各因素对PCR扩增效果的影响程度为引物Taq DNA聚合酶模板DNAdNTP。试验最终确定的金铁锁SSR-PCR最佳反应体系(20μL):1.0 mL模板DNA(40 ng/μL)、1.5μL引物(10μmol/L)、0.3μL dNTP(10 mmol/L)、0.3μL Taq DNA聚合酶(5U/μL)以及2.0μL 10×PCR Buffer(含Mg2+15 mmol/L),用ddH2O补足至总体积20μL。【结论】所建立的金铁锁SSR反应体系可为金铁锁不同种群的遗传变异研究及杂交育种时亲缘关系的分子鉴定提供前期研究基础。     

葡萄SSR-PCR体系优化及其诱变单株遗传多样性分析

利用正交试验设计L16(45)筛选适合葡萄SSR标记的PCR反应体系,对52份葡萄种质进行SSR标记,采用UPGMA聚类法分析葡萄诱变群体和亲本的遗传关系.优化的葡萄SSR-PCR反应体系为:Mg2+1.5 mmol·L~(-1),d NTP 0.2 mmol·L~(-1),Taq酶1.0U,引物0.4μmol·L~(-1),模板DNA 50 ng,总体积20μL.48对引物共扩增出270条带,其中多态性条带249条,多态性百分率为92.2%,有31对引物的多态性百分率达到了100%.每对引物可扩增3~10个等位基因,平均为5.6个.52个葡萄样品的遗传相似系数为0.681~0.889,各诱变单株与‘醉金香’母本的遗传相似系数为0.730~0.859.利用SSR分子标记能将供试验的52份葡萄样品相互区分.在遗传相似系数0.756处将所有葡萄样品分为5个类群,大部分诱变单株与原始母本聚在一起.构建的SSR分子标记体系适用于葡萄种质资源的遗传多样性分析,SSR标记也适合葡萄诱变群体的分子鉴定.     

SSR在鸭茅种质资源遗传多样性研究中的应用初探

本文以鸭茅基因组DNA为模板,利用小麦SSR引物对鸭茅SSR反应体系中的一些重要参数进行摸索和优化实验,建立了一套鸭茅SSR分子标记的最优化反应体系,在15μl体系中,最终浓度或量:Mg2 为2.5 mm/L、dNTP为400μmol/L、Taq酶为1.0U、引物浓度为2.0~2.5μpmol/L、模板NDA量为60~80 ng。同时成功的筛选出20对能较好的应用于鸭茅种质资源遗传多样性研究的SSR引物,可用于鸭茅SSR标记的进一步研究。     

小豆SSR-PCR反应体系优化及引物筛选

为探索适宜小豆SSR-PCR反应的最佳条件以筛选具有多态性的SSR引物,采用L16(45)正交设计优化影响小豆SSR-PCR反应的5个因素(Mg~(2+)浓度、dNTPs浓度、Taq用量、引物浓度、模板DNA用量),利用优化后的SSR-PCR体系,以10份小豆种质为模板,对80对小豆(50对)和绿豆(30对)的SSR引物进行多态性筛选,得出小豆SSR-PCR的最佳反应体系(20μL):Mg~(2+)浓度2.5 mmol/L,dNTPs浓度1.0 mmol/L,Taq活性1.5 U,引物浓度0.6μmol/L,模板DNA用量30 ng。利用优化后的体系在小豆和绿豆引物中筛选出31对条带清晰、多态性丰富、重复性好的SSR引物,有效扩增率为38.75%。小豆SSR-PCR优化体系的建立及多态性引物的筛选为进一步开展小豆遗传育种研究奠定了基础,为小豆遗传多样性分析和遗传图谱库构建等研究提供了技术参数和理论依据。     

稻瘟病菌SSR反应体系的优化

稻瘟病菌SSR检测是分子标记辅助育种的一项重要技术。为优化SSR反应体系,以稻瘟病菌菌株504为供试材料,采用单因素筛选法及L9(34)正交试验设计,研究了稻瘟病菌SSR分析中PCR反应体系的主要成分对扩增结果的影响。结果表明:在总体积为20μl的PCR反应中,TaqDNA聚合酶的最适用量为1.0U;Mg~(2 )、dNTP和引物的最适终浓度分别为1.0mmol/L、100μmol/L和0.4μmol/L。利用该体系进行扩增,所得谱带清晰、稳定、非特异性带少。     

蜡梅SSR反应体系建立及引物筛选

以素心蜡梅为材料,分别通过对影响蜡梅SSR扩增效果的模板DNA,dNTP,引物浓度,Taq酶和退火温度等因素的筛选,建立了其适宜的蜡梅SSR分子标记反应体系,同时筛选了适宜蜡梅SSR扩增引物.结果表明,蜡梅SSR扩增的适宜退火温度为55 ℃,在20μL反应体系中,蜡梅模板DNA质量浓度、dNTP引物浓度分别为5mg·L...     

广西莪术SSR-PCR反应体系优化和引物筛选研究

以广西莪术(Curcuma kwangsiensis S.G.Lee et C.F.Liang)嫩叶为材料,采用单因素和正交试验设计建立和优化SSR-PCR反应体系和反应程序,对最适宜退火温度(Tm)进行筛选优化,对17对已公布的姜黄属通用性引物进行扩增试验,筛选出多态性好、条带清晰的引物。结果表明,建立了适合广西莪术SSR分析的反应体系和扩增程序,即在15μL体系中,DNA模板为30 ng/μL,3μL,Mix(包含DNTP、Mg2+、1×buffer、Taq酶)为5μL,dd H2O为6μL,引物为各0.5μL时,分析效果较好,扩增程序为94℃预变性5min;94℃变性30 s,根据不同引物的退火温度复性30 s,72℃延伸1.5 min,共35个循环;最后72℃延伸5 min;反应结束后,4℃保存。同时筛选出在试验材料中能产生较清晰主带的引物共12对,初步验证了应用SSR分子标记分析在广西莪术遗传多样性的可行性。     

山核桃SSR反应体系优化

优化SSR反应体系是山核桃SSR遗传图谱构建的基础.通过对PCR反应中Taq聚合酶用量、dNTP浓度、引物浓度、Mg2 浓度和模板DNA量的组合试验,确定了山核桃SSR的最佳反应体系,即在30μL反应体系中,含600 ng模板DNA,1×PCR Buffer,2.0UTaq聚合酶,0.22mmol/L dNTP,1.0 mmol/L Mg2 ,0.13μmol/L引物.     

糯玉米SSR-PCR反应体系优化及多态性引物筛选

用L25(56)正交设计建立和优化糯玉米SSR-PCR反应体系;利用370对SSR引物对糯玉米两亲本及F1进行扩增,筛选抗丝黑穗病的相关引物。结果表明:20μL糯玉米SSR-PCR最优反应体系为1.5 U DNA聚合酶,1.0 nmol/μL镁离子,80 ng模板DNA,0.1 pmol/μL引物,0.15μmol/μL d NTPs,1倍扩增缓冲液;370对SSR引物对两亲本及F1进行扩增的条带显示,有差异且条带清晰的引物为87对。确立了糯玉米SSR-PCR最优反应体系,筛选并得到了87对多态性引物。     

人工杉木林采伐年龄确定研究

根据安远县杉木人工林调查材料,对杉木人工林的采伐年龄进行了研究。研究认为:以工艺成热为基础,经济成熟为主,结合数量成熟,综合确定采伐年龄为18～26年,好的立地培育大径材,需30～35年。     

人工长白落叶松林采伐年龄的确定

根据吉林省汪清林业局的材料,对人工长白落叶松林的采伐年龄进行了研究。结果如下:根据平均生长量最大值确定的数量成熟龄为38a(年)。根据木材用途,中、小径材的工艺成熟龄分别定为25a和20a。根据收入和成本计算的各种经济成熟龄定为25～35a之间。最后根据经营目的等因素,将人工长白落叶松林的采伐年龄确定为26～30a。     

人工兴安落叶松用材林主伐年龄的研究

兴安落叶松是黑龙江省的主要造林树种,其人工林的林龄已达20～30年,一些地区林龄可达35年以上。为合理确定人工兴安落叶松林的主代年龄,对人工兴安落叶松的生长进行了调查研究,结果如下:1.人工兴安落叶松林的数量成熟龄为31～40年。2.人工兴安落叶松林小径材的工艺成熟龄为25年。3.根据人工兴安落叶松林生长的立地,进行定向培育。对Ⅲ以上地位指数林分,培育中径材,主伐年龄为31～40年;对Ⅳ以下地位指数林分,培育松木杆材,主伐年龄为25年。4.为合理经营人工兴安落叶松林,制止乱砍滥伐,应将人工林的木材生产纳入国家计划,实行伐区拔交、验收管理。     

葡萄产期调节的研究进展

葡萄栽培的目标是实现种植效益的最大化。利用栽培手段对葡萄的生产周期进行适当的调节，达到反季节上市，可有效提高葡萄生产的效益。文章综述了葡萄产期调节的理论研究和实践探索的发展过程及现状，并针对目前生产中存在的问题及未来研究和生产的发展方向提出了相应的解决思路。     

不间伐栽培模式杉木人工林成熟规律研究

以福建中心产区杉木人工林改进的全林整体生长模型为基础的收获模型和现行经济参数，研究在不间伐栽培模式下不同地位指数级杉木人工林的数量成熟和经济成熟规律．结果表明，数量成熟龄随着地位指数和初植密度的增加而提前；初植密度对林分数量成熟时的平均材积生长量影响不大；内部收益率成熟龄随着地位指数的增加而提前；较稀初值密度（1500株／hm2）的林分具有最大的经济效益．     

蓝莓品种及提取方法对蓝莓叶生物活性的影响

以V3和V5 2种蓝莓为研究对象,测定了蓝莓叶提取物中的总酚含量、清除自由基(DPPH法)能力和还原力的大小,分析了不同品种、成熟度及提取方法对蓝莓叶提取物生物活性的差异性影响。结果表明,蓝莓成熟度和提取方法不同,所得提取物中的总酚含量、清除自由基能力和总还原力均有显著差异,相与95%乙醇振荡提取和酸碱提取所得提取物比,50%乙醇的振荡提取物具有更强的生物活性。实验结果将对深化具有天然生物活性的蓝莓叶的开发利用具有一定指导意义。     

杉木人工林主伐年龄的研究

根据开化县杉木人工林调查材料,研究了杉木人工林不同地位指数的主伐年龄。依据工艺成熟龄和经济成熟龄的计算结果,确定了如下主伐年龄;10,12指数级为20～22a;14指数级为23～25a;16指数级为24～26a;18指数级为25～30a。     

玉米种子活力与成熟度的关系

经1988、1989、1990三年直接和间接的多种方法(室内发芽法、田间直接法、逆境法及电导率、TTC还原测定法)的测试(有些测试有二年重复)看出玉米种子的发育从35天左右进入高峰,达到成熟,并可收获作生产用种.     

不同熟性小麦品种的干物质积累和分配规律

以早、中、晚不同熟期小麦品种为试材,研究干物质积累和分配特点。结果表明:各品种干物质的积累均按logistic曲线变化,呈现出"慢—快—慢"的增长规律,但生长发育过程中不同熟性小麦品种各器官的分配量及分配比例存在较大差异。早熟品种K35平均干物质积累速率、最大积累速率比较低,达到最大积累速度的时间较晚,在灌浆期有显著的生育优势。晚熟品种干物质积累平均速率、最大积累速率均较高,具有较强的生产潜势。     

猪粪堆肥腐熟指标的研究

摘要:通过2次室外中型堆肥试验,研究了在相同水分条件(68.8%),不同调理剂、不同碳氮比(C/N)、不同通气方式和不同添加剂对猪粪堆肥进程的影响,及各种指标在堆肥进程中的变化趋势,并提出了猪粪堆肥的腐熟指标。研究表明,固相C/N、NH+4-N含量、种子发芽率是较好地反映猪粪堆肥腐熟进程的生化指标,当固相C/N降至20∶1以下、NH+4-N含量小于20mg·kg-1、种子发芽率>70%时,可判定堆肥已腐熟。依据上述指标,并结合粪便无害化指标,可判定本研究中除第一次堆肥第一组、第二次堆肥第七组外,其余各组在第30～35d时已腐熟。