山葡萄“双优”再生系统建立的研究

以山葡萄"双优"茎段、叶柄和叶片为材料,采用不同的激素浓度进行再生体系的建立。结果表明,以山葡萄茎段为外植体,MS为培养基,激素浓度2.0 mg/L的BA和0.02～0.05 mg/L的IBA再生,获得了山葡萄再生芽,分化率达到6.67%～8.36%,激素浓度为0.2mg/L的IBA进行生根培养,经过15～20 d培养,生根率可达100%,获得了山葡萄再生植株。     

庭院佳品山葡萄

山葡萄(Vitis amurensis Rupr.)也称东北山葡萄,原产中国、前苏联远东地区和朝鲜,是葡萄属中最抗寒的一个种。枝蔓能耐-40℃～-50℃低温,根系可耐-14℃～-16℃低温。我国山葡萄的天然分布区域主要在吉林长白山、黑龙江完达山、小兴安岭、辽宁北部的山区和半山区,内蒙古乌兰察布盟以东的大青山、蛮汉山亦有分布。它是酿造优质红葡萄酒的重要原料,也是葡萄抗寒育种的宝贵种质资源。     

山葡萄耐盐愈伤组织筛选及其抗氧化水平分析

以山葡萄叶片外植体诱导出的愈伤组织为试材,氯化钠(sodiumchloride,NaCl)为选择因子,筛选耐盐愈伤组织.通过比较不同浓度NaCl处理后愈伤组织相对生长率及生长情况,初步明确了山葡萄耐盐愈伤组织筛选的临界NaCl浓度为1.5％;且1.5％NaCl培养基上处理的愈伤组织白藜芦醇含量也最高,处理3周后含量高达...     

广东紫珠ISSR-PCR反应体系建立及引物筛选

为建立稳定性、重复性好的广东紫珠ISSR-PCR反应体系,以广东紫珠总DNA为试验材料,通过单因子结合正交试验对模板DNA浓度、dNTPs浓度、Mg²⁺浓度、引物浓度和Taq酶用量进行优化,确立了适用于广东紫珠的最佳ISSR-PCR反应体系：0.25 mmol/LdNTPs、1.00 U Taq DNA聚合酶、0.75μmol/L引物、2.0 mmol/L Mg²⁺、100 ng模板DNA,总反应体积为25μL。同时建立重复性和稳定性均较好的ISSR-PCR扩增程序：预变性94℃,5 min;变性94℃,30 s;退火温度与每个引物相对应,退火45 s;72℃延伸90 s;34个循环;后72℃延伸10 min;4℃保存,扩增结束。用来自不同居群4个个体,以100个ISSR引物进行PCR扩增,筛选出扩增效果较好的20个引物。     

辣木SCoT-PCR反应体系建立和引物筛选

SCoT-PCR是一种单引物扩增分子标记方法,具有丰富的多态性,低廉的成本和较好的引物通用性,已在多种植物上加以应用。本研究采用L16(45)正交试验设计,对SCoT-PCR的影响因素进行优化试验,建立了适用于辣木的最佳SCoT-PCR反应体系,并对40条SCoT引物进行筛选。结果表明,25μL最佳反应总体积包含2.0 mmol/L Mg~(2+),0.3 mmol/L d NTPs,1.5 U ExTaq,1.25μmol/L引物,50 ng DNA模板,其中,dNTPs对该体系的影响程度最大。此外,40条SCoT引物共筛选出15条多态性好且适合辣木扩增的引物。该体系的建立为今后利用SCoT分子标记分析辣木种质资源鉴定与多样性、构建指纹图谱和辅助选择育种提供新的技术手段。     

黄瓜cDNA-AFLP分析体系的建立

以黄瓜为研究材料,研究了影响cDNA-AFLP反应体系的几个关键因素,建立了适宜黄瓜的cDNA-AFLP分析体系,并得到了较为清晰可辨的cDNA-AFLP指纹图谱。结果表明,适用于黄瓜dscDNA的酶切组合为TaqI和VspI,dscDNA酶切用量为300 ng,用作预扩增模板的连接产物稀释倍数为1倍,作为选择性扩增模板的预扩增反应产物的适宜稀释倍数为30倍。     

甜瓜cDNA-AFLP分析体系的建立

选用新疆甜瓜伽师和皇后为试材,研究了影响cDNA-AFLP反应体系的几个关键因素,建立了适合于甜瓜的cDNAAFLP反应体系.结果表明:适用于甜瓜cDNA-AFLP分析的RNA可以用Trizol试剂提取的总RNA,双链cDNA合成应用置换法,双链酶切用Vsp Ⅰ、Taq Ⅰ和EcoR 、Mse Ⅰ,效果均能达到目标.相比较而言,Vsp Ⅰ、Taq Ⅰ酶切组合更为理想.酶切cDNA用量、连接产物、预扩增产物稀释倍数参照常规AFLP技术中的常用即可满足要求.检测采用8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染显色,操作较文献介绍的变性胶方法简单、方便.实验得到了较为理想的甜瓜mRNA指纹图谱,建立的反应体系可以应用于甜瓜差异基因表达分析等方面的研究.     

葡萄简化组织培养外植体系的建立

为了在简化组培条件下获得葡萄高效外植体系,对抑菌剂的使用浓度、浸泡时间和培养浓度进行了大量比较试验。试验结果表明：抑菌剂浸泡浓度为4%,浸泡时间为6h,培养浓度为0.2%时,葡萄外植体的成功率能够达到95%以上,所获外植体分化正常。     

冬瓜SSR-PCR体系优化及引物筛选

本研究利用L16(54)正交试验设计研究了影响冬瓜SSR-PCR的五个因子(10×Buffer(含Mg2+),d NTP,DNA,引物,r Taq),研究结果表明Buffer(含Mg2+)和r Taq对PCR影响最明显,最终筛选出最佳反应体系:10×Buffer 2.0μL(1×Buffer),d NTP 2.0μL(200μmol/μL),DNA 0.6μL(6 ng/μL),引物0.4μL(0.2μmol/L)。体系体积为20μL,循环数为35。引物筛选程序为:94℃预变性3 min,94℃变性45 s,58℃~68℃复性30 s,5个循环,每个循环退火温度降2℃,72℃延伸1 min,94℃变性30 s,50℃~58℃复性1 min,8个循环,每个循环退火温度降低1℃,72℃延伸1 min,94℃变性30 s,50℃复性30 s,72℃延伸1 min,共30个循环,72℃延伸7 min。本研究建立了适合冬瓜的SSR反应体系和引物多态性筛选程序。     

"种"出来的葡萄美酒--记山西青徐葡萄庄园有限公司

中国的葡萄种植和葡萄酒业从汉武帝建元年间张赛从西域引进欧亚种葡萄开始,经历了一个漫长的发展过程,葡萄酒作为中国“土酒”,在清徐的历史已有两千多年。唐代晋阳籍诗人王翰著有“葡萄美酒夜光杯,欲饮琵琶马上催”的不朽诗篇。意大利著名旅行家马可·波罗在中国游记中这样描写:“出太原府,过桥三十里(公里)有大片的葡萄园,还有很多酒……”这里就是清徐县,全国四大葡萄名产地之一。清徐县地处太原盆地,地下水源充足,多有涌泉,土地平坦肥沃,气候温凉,土壤为砂壤土,灌溉条件好。平川种植的葡萄糖分高,出汁率好;山区种植的葡萄着色极深,酿出…     

大白菜cDNA-AFLP分析体系的优化

本研究以高感、高抗大白菜小黑点病的大白菜叶柄为试材,对影响cDNA-AFLP分析体系的几个关键因素进行分析,建立了适宜大白菜的cDNA-AFLP分析体系,并得到了较为清晰可辨的cDNA-AFLP图谱。结果表明:试剂盒法提取的NA较完整,纯度较高;400ng的cDNA利用FastDigest EcoRⅠ和Fast-Digest MseⅠ进行快速双酶切50min,酶切充分;在20μL的体系中,连接产物取原液作为预扩增反应的模板,并且预扩增反应的循环数为35,预扩增产物稀释20倍作为选择性扩增的模板,扩增结果最佳;MBI2×PC Master Mixture反应体系满足扩增反应的需要,不需要另外摸索反应条件,节省了试验成本;选用64对AFLP引物进行扩增,筛选出具有多态性条带丰富的AFLP引物45对。本研究为利用cDNA-AFLP分析大白菜小黑点病的的发病机理奠定了基础。     

苜蓿cDNA-AFLP反应体系的建立和优化

以改良的苜蓿雄性不育系叶片为材料,通过RNA提取、反转录、酶切、链接、PCR扩增、凝胶电泳等系列程序的摸索和优化,建立了适宜苜蓿cDNA-AFLP的反应体系,并得到了清晰可辨的cDNA-AFLP指纹图谱.结果如下:cDNA经EcoR Ⅰ和Mse Ⅰ完全酶切后,16℃连接15 h;20μl预扩增体系中加入连接产物2.0μl较适宜,预扩增产物稀释20倍后进行选择性扩增效果最佳.     

板栗花序与叶的cDNA-AFLP的差异表达分析

为给板栗的分子遗传育种工作提供重要的分子数据参考,作者通过cDNA-AFLP的方法,以同株板栗幼年花序和叶片为实验材料,在转录水平上进行差示分析。结果显示：64对引物组合共产生了2131条PCR产物,对其中的110条克隆测序,发现有28条基因与已知功能基因相关,其中包括参与植物转运﹑代谢﹑能量产生相关的蛋白,从而证明这些基因在板栗生长发育中的重要作用。     

cDNA-AFLP技术及其在植物基因表达分析中的应用

cDNA-AFLP是一种新的mRNA指纹图谱技术,具有重现性高、准确、可靠的特点,可对生物体转录组进行全面分析,广泛应用于基因表达特性研究、植物遗传标记分析和分离植物基因等方面.近年来随着该技术的不断发展和应用,在研究中取得了很多成果.本研究就cDNA-AFLP技术的原理和特点,在植物基因表达研究中的应用现状和发展前景进行了综述.     

低钾胁迫下烟草根系差异表达基因的cDNA-AFLP分析

烟叶含钾量是评价优质烟叶重要品质指标,大量研究认为钾元素的吸收和积累是由植物基因型所控制,而在烟草转录水平上的低钾胁迫的应答机制方面,尚未见报道.本实验为鉴定烟草低钾胁迫响应基因,应用,cDNA-AFLP技术,对低钾胁迫下烟草NC89根系基因表达进行了mRNA指纹分析,通过240对引物组合的筛选,共得到324个差异表达转录衍生片段.对其中9个TDF进行了克隆、测序和序列分析.结果表明:其中7个TDF涉及逆境响应,氨基酸的转运与代谢,转录调控及钾吸收,2个TDF为功能未知.     

2个MADS-box基因在山葡萄雌花和雄花中的表达分析

为了探明MADS-box基因在山葡萄性别分化中的作用,笔者利用实时荧光定量PCR技术对Vv MADS5和Vv MADS8 2个基因在山葡萄雌、雄花发育过程的表达情况进行分析。结果表明,2个基因在山葡萄雌花和雄花中都有表达,Vv MADS8在雌花和雄花中的表达趋势以及表达量基本相同。Vv MADS5在雌花和雄花中的表达类型相同,而其在雌花中的表达量显著高于雄花。Vv MADS8在花芽膨大期(4月30日)表达量最高,而Vv MADS5在花序展露期(5月14日)表达量最高。Vv MADS8、Vv MADS5参与山葡萄性别分化,但不是控制性别分化的关键基因。     

茶树cDNA-AFLP银染技术体系的建立

为了挖掘安白茶白化期相关的差异基因,建立并优化了茶树叶片cDNA-AFLP扩增反应体系,进行cDNA-AFLP分析。在安吉白茶叶片cDNA-AFLP的试验中,分别对20 μL预扩增和选择性扩增反应体系中的4种反应条件影响因子进行不同梯度优化的研究,包括引物、Mg2+、dNTP及Taq DNA聚合酶的用量。PCR预扩增20 μL反应体系中,引物75 ng/20 μL,Mg2+ 2.0 mM,dNTP 0.2 mM,Taq DNA聚合酶1 U时预扩增效果较好;PCR选择性扩增20 μL反应体系中,引物75 ng/20 μL,Mg2+ 2.5 mM,dNTP 0.2 mM,Taq DNA聚合酶1.5 U时选择性扩增效果较好。通过试验,获得较为理想的预扩增和选择性扩增体系。     

cDNA-AFLP技术及在差异表达基因克隆上的应用

cDNA-AFLP技术是在AFLP技术基础上发展起来的主要用于研究基因差异的技术，具有高效可靠的优点，受到研究者的青睐，被广泛应用于包括植物在内的各类生物的基因表达的研究中。简要阐述了cDNA-AFLP技术的原理，重点讨论了操作过程中可能出现的问题和技术关键，并就该技术与其他差异表达技术进行了比较，以说明其在克隆差异表达基因上的优势，还简要列举了一些在抗病育种等领域的应用实例。