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黄芩提取物抑制金黄色葡萄球菌α-溶血素溶血活性的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
α-溶血素(αHL)是金黄色葡萄球菌(S.aureus)重要的毒力因子,为研究黄芩醇提物对αHL溶血活性的抑制作用,本研究通过乙醇回流提取法获得黄芩醇提取物,测定其对S.aureus的最小抑菌浓度(MIC)、对αHL表达和生物学活性的影响以及对αHL介导的A549细胞损伤的保护性作用.试验结果显示,黄芩醇提取物对所测试的S.aureus的MIC均高于2048 μg/mL;黄芩醇提取物能够抑制S.aureus培养物上清中的αHL的溶血活性,并呈浓度依赖关系,但对αHL的表达并无抑制作用;而且黄芩醇提取物也能够呈剂量依赖关系缓解S.aureus αHL介导的对A549细胞损伤作用.该结果表明黄芩醇提取物能够以某种形式导致αHL丧失生物活性,并提示黄芩醇提取物是一种潜在的抗S.aureus感染的复合物. 相似文献
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金黄色葡萄球菌α-溶血素基因的克隆与序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
参考Gary S Gray和Michael Kehce在《传染与免疫》杂志上发表的关于金黄色葡萄球菌α溶血素蛋白的基因序列,设计合成1对引物,从分离自牛体的野生株金黄色葡萄球菌中提取细菌总DNA,对α溶血素蛋白基因进行PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳分析,呈现1条约960 bp的条带,回收纯化后,将其克隆至pMD18 T质粒载体中,进行核苷酸序列分析,然后与报道的α溶血素蛋白基因进行比较。结果表明:所鉴定的野生株金黄色葡萄球菌的α溶血素蛋白基因序列与报道的核苷酸的同源性高达99.99%以上,证实为金黄色葡萄球菌Wood 46株α溶血素蛋白基因。 相似文献
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亚抑菌浓度穿心莲提取物对减缓金黄色葡萄球菌α-溶血素介导的A549细胞损伤作用的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
金黄色葡萄球菌是一种广泛存在的重要致病菌,可引起人类和动物许多严重的感染。另外,α-溶血素是金黄色葡萄球菌最重要的毒力因子之一。本研究通过乙醇回流提取方法,获得中草药穿心莲提取物,然后通过最低抑制浓度(MIC)值测定、溶血活性测定、Western blotting、RT-PCR、LDH及Live/dead等方法研究分析穿心莲提取物对金黄色葡萄球菌α-溶血素分泌的影响及对A549细胞的保护作用。试验结果表明,穿心莲提取物对金黄色葡萄球菌的MIC值为2048 μg/mL,且呈剂量依赖性地抑制金黄色葡萄球菌α-溶血素分泌,并能有效减缓金黄色葡萄球菌菌液上清对A549细胞的损伤。提示,穿心莲提取物是一种潜在的抗金黄色葡萄球菌感染的药物。 相似文献
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本研究旨在分析土木香提取物对金黄色葡萄球菌主要毒力因子分泌的影响及机制研究,以耐药性金黄色葡萄球菌USA 300为研究对象,通过醇提法获取土木香提取物,根据主要毒力因子蛋白表型功能(溶血活性和TNF-α含量释放分析),利用蛋白免疫印迹和荧光定量PCR分析检测不同浓度土木香提取物对金黄色葡萄球菌主要毒力因子分泌的影响及机制。无抗菌活性的土木香提取物与金黄色葡萄球菌共培养后可显著抑制培养物上清溶血活性及其诱导小鼠脾淋巴细胞TNF-α释放活性,蛋白免疫印迹分析表明,土木香提取物处理可显著降低金黄色葡萄球菌α-溶血素、肠毒素A和中毒休克综合征毒素-1(TSST-1)的分泌,荧光定量PCR试验结果进一步表明土木香提取物与金黄色葡萄球菌共培养后降低金黄色葡萄球菌α-溶血素、肠毒素A和TSST-1编码基因的转录及金黄色葡萄球菌二元调控系统agr的转录。本研究结果表明,土木香提取物通过抑制agr二元调控系统转录及其毒力因子编码基因的转录而降低毒力因子的分泌,土木香提取物是一种潜在的新型抗金黄色葡萄球菌感染先导化合物。 相似文献
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《中国兽医学报》2016,(10)
为调查奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌溶血素基因型和表现型分布,并对两者之间的关系进行研究,采用PCR方法对从奶牛乳腺炎病例中分离的33株金黄色葡萄球菌的溶血素基因进行检测,并分别用牛血琼脂平板和绵羊血琼脂平板检测其溶血性。结果表明,各溶血素hla,hlb,hld,hlg,hlg2基因的检出率分别为90.91%,100%,93.94%,78.79%,66.67%;牛血平板检测表明β溶血占84.85%,绵羊血平板检测β溶血只有57.58%,金黄色葡萄球菌在牛血和绵羊血琼脂平板上均以β血为主,但牛血检测出的β溶血比例更高,表明牛红细胞对金黄色葡萄球菌β溶血素更为敏感。综上表明,金黄色葡萄球菌溶血素基因型和表现型之间无对应关系。 相似文献
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本文旨在探究黄酮类化合物槲皮素对金黄色葡萄球菌α-溶血素所引起的大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVECs)凋亡的影响。采用贴块法培养原代细胞后用磁极纯化法选获取纯化的RPMVECs,并通过CD31免疫荧光进行鉴定。通过WST-1检测α-溶血素对RPMVECs的细胞毒性,筛选作用浓度。将槲皮素与α-溶血素共同作用RPMVECs 24 h后,通过流式细胞术检测细胞凋亡率。结果表明采用磁极纯化法可得到CD31阳性率高的RPMVECs。2μg/mLα-溶血素对RPMVECs具有毒性,并可诱导RPMVECs凋亡。槲皮素可以抑制金黄色葡萄球菌α-溶血素所诱导的RPMVECs凋亡,对细胞具有一定保护作用。 相似文献
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以提取的奶牛乳腺炎源性金黄色葡萄球菌山东分离株(zfb)全基因组DNA为模板,PCR扩增β-溶血素基因(hlb),并与克隆栽体pMD18-T相连接.测序结果表明,扩增片段含有993 bp的ORF,可编码含330个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的金黄色葡萄球菌β-溶血素蛋白的氨基酸同源性为99.4%.构建原核表达载体pET32a+/hlb,SDS-PAGE分析蛋白表达水平,IPTG诱导后表达的融合蛋白的相对分子量质为57 000,表达量占菌体总蛋白的23.9%;表明原核表达质粒构建成功,并实现了有效表达. 相似文献
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A total of 262 strains of Staphylococcus aureus isolated from the mammary gland of dairy cows were examined for the production of alpha-hemolysin. Strains were cultured in a liquid medium of casein hydrolysate and yeast extract in an atmosphere of 7% (v/v) CO2 in air. The assay consisted of a dot immunoblotting technique employing bacterial culture supernatants and a mouse monoclonal antibody specific for alpha-hemolysin. Ninety-four percent (247) of 262 strains were positive for alpha-hemolysin by this method, when cultured in the laboratory. This figure is compared with those obtained in previous studies which typically based their results on the hemolytic patterns of isolates on blood agar plates. 相似文献
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Staphylococci are important opportunistic pathogens in most animal species. Among the most relevant species are the coagulase positive species Staphylococcus aureus and Staphylococcus pseudintermedius. Methicillin resistance has emerged as an important problem in both of these organisms, with significant concerns about animal and public health. The relative importance of these staphylococci on different animal species varies, as do the concerns about zoonotic transmission, yet it is clear that both present a challenge to veterinary medicine. 相似文献
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Antiphagocytic activity of Staphylococcus aureus antigens 总被引:1,自引:0,他引:1
C M Cameron 《The Onderstepoort journal of veterinary research》1969,36(2):199-206
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探讨金黄色葡萄球菌对氟喹诺酮类的耐药与gyrA基因突变的关系及中药耐药抑制剂对gyrA基因是否具有回复突变作用,以便从分子水平初步探讨复方中药耐药抑制剂的耐药抑制分子机理。用诺氟沙星逐步诱导金黄色葡萄球菌敏感株ATCC29213,建立了MIC值为64μg/mL、128μg/mL和256μg/mL的耐药突变株;PCR扩增标准株、耐药株和中药处理的耐药株gyrA基因,产物回收纯化后送测序公司测序。gyrA基因测序结果用DNAsis软件分析表明,细菌的耐药性程度越高,碱基突变率增加;gyrA基因氨基酸序列突变分析表明,84位亲水性丝氨酸被疏水性缬氨酸取代,与细菌的高水平耐药性密切相关。中药耐药抑制剂对84位和99位氨基酸突变具有回复突变的作用。结论:中药耐药抑制剂对耐药金黄色葡萄球菌gyrA基因具有回复突变作用。 相似文献
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《中国兽医学报》2015,(12):1997-2001
采用(K-B)药敏纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的药物敏感性,并用二倍稀释法分别测定10种中药提取物对MRSA的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),选取抑菌效果最好的中药提取物(黄芩)通过棋盘法测定其与5种常用抗生素的联合抑菌效果。观察黄芩不同亚抑菌浓度作用下对MRSA耐药性的逆转效果,并通过荧光实时定量PCR法检测耐药基因mec A在mRNA表达水平上的变化。结果表明,MRSA具有多重耐药性,10种中药提取物里黄芩的抑菌和杀菌效果最为显著,MIC和MBC均为156 mg/L,但其与5种抗生素没有显著的联合抗菌作用,在黄芩亚抑菌浓度130 mg/L作用20 h后,MRSA主要耐药基因mec A的表达量下调并恢复了对药物的相对敏感性。 相似文献
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采用聚合酶链式反应(PCR)扩增金黄色葡萄球菌耐药基因femA;通过耐药基因失活试验,研究了中药复方“连黄”对金黄色葡萄球菌耐药基因femA的影响,探讨了中药“连黄”降低金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类药物耐药性的作用机理。结果显示,中药“连黄”作用前后金黄色葡萄球菌的耐药基因femA在23~72碱基区发生较大改变,对应的氨基酸序列也发生改变,从而导致femA基因失活。 相似文献