鸡毒支原体PCR试剂盒对人工感染SPF鸡的检测

鸡毒支原体(MG)是鸡及其他禽类呼吸道疾病的主要病原体，感染鸡群常出现呼吸罗音、咳嗽、流鼻液等。本病在世界各国广泛存在，在鸡群中的感染率很高。我们在广西不同地区鸡场调查中发现，鸡群MG平均感染率达56．9％。感染本病的鸡群由于产蛋下降、生产性能低下和肉鸡胴体品质下降等，给养     

用PCR对鸡毒支原体感染的检测

应用已建立的检测 MG和 MS的 PCR方法 ,对人工接种鸡毒支原体后 2～ 2 0 d的 SPF鸡气管棉拭样品和气管、肺、肝、脾、胸肌、腿肌等器官和组织进行了检测 ;对现场采集的样品同样作 PCR检测。结果表明 ,上述人工样品均检测到病原 ,以气管棉拭样品检出最多 ;现场样品PCR的阳性检出率为 1 0 .2 8% ,分离培养的阳性率为 2 .8% ,敏感性前者高于后者。     

鸡毒支原体PCR检测方法的建立

目前临床上常见的支原体主要为鸡毒支原体（MG）和鸡滑液囊支原体（MS）。由于MG和MS经常发生混合感染,给临床诊断和治疗带来极大的困难。为了快速诊断MG,特别是致病性鸡毒支原体,本研究针对MG的pvpA基因设计特异性引物,通过优化反应条件,进行灵敏性试验、特异性试验和重复性试验,建立快速高效检测MG的PCR方法。结果表明,该检测技术具有较好的灵敏性、特异性强且CV<3%,具有很好的符合性。     

应用多重套式PCR检测鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体

根据已发表的鸡毒和鸡滑液支原体血凝素基因序列pMGA和vlhA各设计两对引物,建立鉴别诊断两种支原体的多重套式PCR方法,对其进行温度条件、Ⅱ步模板浓度优化及特异性、敏感性实验。该方法在两步PCR后能特异性地扩增出MG(408 bp)和MS(688 bp)两个目的片段。应用于临床样品检测,与支原体分离、SPA检测比较结果PCR灵敏度高于病原分离。     

鸡毒支原体与滑液囊支原体双重PCR检测方法的建立与应用

为建立鸡毒支原体(MG)与滑液囊支原体(MS)双重PCR检测方法,一次反应即可诊断鸡毒支原体与滑液囊支原体感染情况.根据GenBank公开的MG和MS基因序列,设计了2对质粒构建引物和2对检测引物,优化检测反应体系与条件,进行灵敏性试验、特异性试验和临床检测应用.结果显示,该方法对MG和MS阳性质粒的最低检测限为10拷...     

鸡毒支原体与鸡滑液囊支原体双重PCR检测方法的建立

为建立能同时检测鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum, MG)和鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)的双重PCR诊断方法,该研究根据GenBank中登录的MG gapA基因序列和MS heat shock ATP-dependent protease基因序列,设计2对特异性引物,通过对PCR扩增条件的优化,建立了能够同时检测MG和MS的双重PCR诊断方法。特异性检测结果显示,该方法能够扩增出729 bp的MG和309 bp的MS特异性片段,对禽巴氏杆菌、大肠杆菌、鸡白痢沙门菌、副鸡禽杆菌核酸扩增均为阴性;敏感性检测结果显示,对MG和MS DNA的最低检出量均为5×10^-2 ng/μL;临床样品的检测结果显示,所建立的双重PCR方法可同时有效地检测出MG、MS混合感染和单独感染。该研究建立的鸡毒支原体与鸡滑液囊支原体双重PCR方法具有良好的特异性、敏感性、重复性,为快速、高效检测MG和MS提供了技术支持。     

鸡毒支原体PCR检测方法的建立

根据已发表的鸡毒支原体种特异性序列fMG-2设计1对引物,建立检测鸡毒支原体的PCR方法.该法对鸡毒支原体能特异性扩增726 bp的目的片段,而对其他禽病原DNA模板的扩增结果为阴性.建立的PCR方法对鸡毒支原体的最少检出量为3 Pg.用建立的PCR方法对临床采集的样品进行检测,同时对相应的样品进行细菌分离,结果临床样品PCR的阳性检出率为20.5%,细菌分离培养的阳性率为0.9%,表明PCR的敏感性高于细菌分离鉴定.     

应用聚合酶链反应技术检测沙门氏菌

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测沙门氏菌,使用了２对引物ＨＩ和ｐｈｏＰ。ＨＩ引物对各长２０ＮＴ,根据鞭毛Ｉ相抗原基因自行设计,扩增序列长２６９ｂｐ;ｐｈｏＰ引物对各长２１ＮＴ,根据ｐｈｏＰ／ｐｈｏＱ基因设计,扩增片段长２９９ｂｐ。ＰＣＲ采用５０μＬ反应体系。ｄＮＴＰＳ各１００μｍｏｌ／Ｌ,引物各１μｍｏｌ／Ｌ,Ｍｇ２＋２．５ｍｍｏｌ／Ｌ,酶２Ｕ。三温段ＰＣＲ循环条件为：９７℃预变性７ｍｉｎ;９４℃变性６０ｓ、５５℃复性４０ｓ、７２℃延伸６０ｓ,３５个循环;７２℃延伸７ｍｉｎ。检测８株标准阳性菌,结果都出现了ＨＩ引物和ｐｈｏＰ引物特异带,标准阴性菌３株只出现ｐｈｏＰ特异带,说明ＨＩ引物特异性很强。     

利用聚合酶链反应技术检测牛结核杆菌病的研究

应用聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ） 技术检测牛结核分枝杆菌纯化 Ｄ Ｎ Ａ, 其敏感性为２５０ｆｇ 。所用引物序列对９种抗酸分枝杆菌 Ｄ Ｎ Ａ 进行扩增, 经琼脂糖凝胶电泳证实, 只有人型结核分枝杆菌、牛型结核分枝杆菌产生了３１７ｂｐ 的特异性扩增带。将 Ｐ Ｃ Ｒ 法与皮内变态反应试验（ Ｐ Ｐ Ｄ） 检测方法比较; ５４ 份血样标本中 Ｐ Ｃ Ｒ 的阳性率为１ ％ , Ｐ Ｐ Ｄ 试验的阳性率为０ 。同时对奶样标本的检测与血样结果一致。结果表明, Ｐ Ｃ Ｒ 在直接检测患牛血样、奶样标本中显示出快速、敏感、特异的优点。为今后牛结核病的检测工作提供了一条新的途径。     

PCR检测犬腺病毒方法的建立

利用人工合成的两条引物,对病犬肝脏和细胞培养物冻融上清中的1、2型犬腺病毒DNA进行多聚酶链式反应（PCR）检测;再将扩增产物进行同位素标记,与纯化病毒DNA进行打点杂交。扩增产物经电泳分析结果表明,其大小与设计的引物间的序列大小基本一致;扩增产物经标记后只与犬腺病毒DNA发生杂交反应,表明其为犬腺病毒特异性核酸片段。     

应用PCR检测禽腺病毒

根据禽腺病毒 CELO株的基因序列 ,设计合成了 1对引物 :上游引物为 5′-CCCTCCCACCGC-TAACCA-3′,下游引物为 5′-CACGTTGCCCTTATCTTGC-3′。用这对引物对 群禽腺病毒中 1 2个血清型病毒和 1 9个分离野毒株、 群 4个血清型病毒、 群禽腺病毒株的核酸模板进行了 PCR扩增 ,结果均特异性地扩增出了与设计片段大小相一致的 4 2 1 bp片段 ,而对其他 5种禽病病原体和哺乳动物腺病毒血清 2型核酸模板的扩增均为阴性。该 PCR能检出 1 fg禽腺病毒 DNA模板     

应用聚合酶链反应检测鸡传染性贫血病毒

根据鸡传染性贫血病毒（CAV）Cux－1株的基因序列,设计了一对引物,用这对引物对三株CAV的核酸模板进行PCR扩增,结果均能特异性地扩增出420bp的片段,但对其它5种禽病病原体核酸模板的扩增,结果均为阴性,该PCR能检出10fg鸡传染性贫血病毒DNA模板。     

应用聚合酶链反应检测鉴别火鸡支原体方法的建立

根据基因库中火鸡支原体（ＭＭ）１６Ｓ ｒＲＮＡ基因序列（Ｇｅｎｅｂａｎｋ Ｕ０４６４９）,设计了一对跨幅为８５０ｂｐ的引物,用这对引物对４禽侏火鸡支原体标准菌株和６种其它禽病病原体进行ＰＣＲ扩增,结果４禽株鸡支原体菌株均得到片段大小与预期设计相一致的８５０ｂｐ的ＰＣＲ扩增产物,而其它６种禽病病原体（包括ＭＧ、ＭＳ和ＭＩ）的扩增结果则均为阴性,该ＰＣＲ能检出１００ｆｇ的火鸡支原体的ＤＮＡ模板。     

应用聚合酶链反应检测鉴别禽衣阿华支原体的研究

根据基因库中衣阿华支原体（ＭＩ）１６ＳｒＲＮＡ基因序列,设计了一对跨幅为２９９ｂｐ的引物,用这对引物对４禽株衣阿华支原体标准菌株和６种其它禽病病原体进行ＰＣＲ扩增,结果４禽株衣阿华支原体菌株均得到３片段大小与预期设计相一致的２９９ｂｐ的ＰＣ白话 增产物,而其它６种禽病病原体的扩增结果则均生,该ＰＣＲ能检出１ｐｇ的衣阿华支原体的ＤＮＡ模板。     

动物性食品中奇异变形杆菌PCR检测方法的研究

研究制定动物源性食品中奇异变形杆菌的PCR检测方法,为日常食品卫生监测提供快速检验的依据。根据奇异变形杆菌抗亚碲酸盐基因的保守序列设计Q248F/R,确定PCR条件,利用标准菌株检验方法的特异性和敏感度。引物Q248对奇异变形杆菌检测具有良好的特异性,对人工布菌样品的检测敏感度达1.2×102cfu/100g。通过对扩增目的片段的核酸序列测定,目的片段大小为248bp。该方法用于奇异变形杆菌检测具有特异性强、敏感、快速的特点,适用于动物性食品中奇异变形杆菌检测的快速筛选检验。