山东省白羽肉鸡中MDV、REV、CAV和ARV感染状况的病原学调查

为了解鸡马立克氏病病毒(MDV)、鸡传染性贫血病毒(CAV)、禽网状内皮增生病病毒(REV)和禽呼肠孤病毒(ARV)在山东省白羽肉用型鸡中的流行情况,试验采用地高辛标记的核酸探针-斑点杂交法对淘汰的商品肉鸡、病死商品肉鸡及淘汰肉种鸡进行了上述4种病毒病原的检测。结果表明:ARV主要以单一形式感染,在病死商品肉鸡中感染率最高(30.07%),在3种类型鸡中ARV感染率高于MDV,REV,CAV。MDV在淘汰肉种鸡中感染率(12.82%)高于其他2种鸡群,而REV,CAV,ARV感染率在病死商品肉鸡中最高。混合感染亦相当普遍,以淘汰肉种鸡最高(混合感染率达10.25%),高于任一病毒单独感染率,其次为病死商品肉鸡。     

我国鸡群免疫抑制病感染现状与防控

一、鸡群免疫抑制病的感染现状 1．经对鸡群中禽网状内皮增生病病毒、鸡传染性贫血病毒、禽呼肠孤病毒3种病毒感染的血清学调查发现,绝大多数鸡场中鸡传染性贫血病毒、禽呼肠孤病毒的母源抗体阳性率都非常高,在经过1～3周母源抗体消失后不久,从5周龄开始出现自然感染引发的抗体阳性率逐渐升高;到20周龄时,不论什么遗传品系和地理分布,绝大数鸡群中鸡传染性贫血病毒、禽呼肠孤病毒的抗体阳性率可达到95％～100％。     

用斑点杂交法同时检测鸡群中的CAV MDV和REV

为研究鸡传染性贫血病毒(CAV)在鸡群中的感染状况以及马立克氏病病毒(MDV)和网状内皮细胞增生病病毒(REV)在鸡群中的发病率，用斑点杂交法对山东省4个肉鸡场和2个肉种鸡场进行CAV、MDV和REV的检测，结果表明除一个肉种鸡场没有检测出REV以外，其他鸡场均同时检测出CAV、MDV和REV，并且发现直接从病科中检测CAV的阳性率(20％)远远低于将病科接种SPF鸡胚后的检出率(80％)。     

商品肉鸡群中MDV、REV、CAV和ARV多重感染的检测

从山东省东营、日照、潍坊、聊城等地区自然发病和临床健康AA商品肉鸡群中分别采集脏器样品,用特异性核酸探针对样品进行马立克氏病病毒（Marek’s disease virus,MDV）、网状内皮组织增生症病毒（Reticuloendotheliosis virus,REV）、鸡传染性贫血病病毒（Chicken anemia virus,CAV）和禽呼肠孤病毒（Avian reoviruses,ARV）检测。结果显示,自然发病AA商品肉鸡群中MDV、REV、CAV和ARV的检出率均较高,分别为69．30％、57．46％、63．60％和67．11％;临床健康AA商品肉鸡群中MDV、REV、CAV的检出率分别为36．96％、43．48％和30．42％,且自然发病和健康鸡群中均存在不同病毒组合的多重感染,感染率分别为85．96％和43．46％。用x2检验进行分析发现,自然发病商品肉鸡群与临床健康商品肉鸡群中MDV、CAV、MDV＋REV、REV＋CAV的检出率和未检出的比例差异极显著（P〈0．01）;REV、MDV＋CAV检出率差异显著（P〈0．05）。对自然发病商品肉鸡的肝脏、脾脏、法氏囊中4种病毒检出率进行X2检验分析发现,MDV在脾脏中检出率显著高于肝脏和法氏囊;REV在法氏囊中检出率显著高于肝脏和脾脏,而CAV和ARV分别在脾脏和肝脏中检出率较高。结果表明,多种免疫抑制性病毒的共感染已普遍存在,是目前AA商品肉鸡易发病且生长缓慢的重要流行病学因素之一。     

ARV、REV与ALV三重RT-PCR检测方法的建立

根椐GenBank中已发表的禽呼肠孤病毒（ARV）、禽网状内皮增生病病毒（REV）、禽白血病病毒（ALV）等3种病毒基因组序列,设计了3对分别与ARV、REV和ALV某段基因序列互补的引物。在建立各病毒单项RT-PCR技术的基础上,优化三重RT-PCR反应条件,建立了3种病毒的三重RT-PCR技术。结果表明,用这3对引物对同一样品中的ARV、REV、ALV核酸模板进行三重RT-PCR扩增,可同时扩增ARV的247bp,ALV的675bp,REV的467bp的特异性片段,而对其他6种禽病病原的PCR扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明,该三重RT-PCR技术能检出10pg的ALV、1pg的ARV和10pg的REV模板。用42份临床病料对本研究多重RT-PCR技术和单项RT-PCR技术进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为92%以上。表明建立的多重RT-PCR检测方法,具有特异、快速、准确的特点,可用于对这3种病毒的同时检测和鉴别诊断。     

我国部分地区蛋鸡群ALV-J及与REV、MDV、CAV混合感染检测

为了解J亚群禽白血病病毒(ALV-J)及其与禽网状内皮细胞增生症病毒(REV)、马立克氏病病毒(MDV)和鸡传染性贫血病病毒(CAV)的混合感染现象,本研究从宁夏、湖北、广东、山东、辽宁、吉林、黑龙江7个省的39个蛋鸡群收集临床表现和剖检病理变化疑似禽白血病的病料样品184份,采用PCR、病毒分离和IFA检测样品中ALV-J、REV、MDV和CAV。结果表明,7个省蛋鸡场均存在ALV-J感染,病料样品阳性率为60.9%,检测鸡群阳性率为82.1%,与REV、MDV、CAV的混合感染率分别为13.6%、24.5%、22.8%,其中存在较为严重的双重感染(29.0%)和3重感染(18.8%),甚至4重感染(1.7%)。研究结果表明,我国蛋鸡群中普遍存在ALV-J感染,而且与REV、MDV、CAV混合感染严重;提示ALV-J已经可以引起蛋鸡群发病,在临床诊断和致病性研究中,应考虑到多重感染的影响。     

CAV与REV共感染SPF鸡对疫苗免疫反应的抑制作用

用1日龄SPF鸡人工感染鸡贫血病毒(CAV)和禽网状内皮增生病病毒(REV),探讨病毒感染对鸡体疫苗免疫反应的影响。结果表明,在用禽流感病毒(AIV,H5和H9)疫苗免疫后,CAV与REV单独感染均显著抑制了鸡体对H5和H9亚型禽流感病毒灭活疫苗的HI抗体反应,在CAV与REV共感染后,这种抑制作用更为明显。CAV单独感染后鸡体对新城疫病毒(NDV)和传染性法氏囊病病毒(IBDV)疫苗的免疫反应受到抑制,但与对照组在统计学上的差异不显著,然而,CAV可以显著加重REV感染对鸡体在NDV和IBDV疫苗免疫后抗体反应的抑制作用。从而证实CAV与REV共感染在疫苗免疫抑制上有协同作用。     

核酸探针检测山东省鸡群中马立克病毒、传染性贫血病毒、网状内皮增生病病毒和呼肠孤病毒的流行状况

为对山东家禽业免疫抑制病的流行情况进行调查,从烟台、滨州、临沂、泰安、聊城、青岛大型养殖场共随机收集600只病死鸡的肝脏和脾脏病例组织样品,用斑点杂交的方法检测样品中鸡马立克病毒（Marek’s disease virus, MDV）、传染性贫血病毒（chicken anemia virus,CAV）、网状内皮增生病病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)和呼肠孤病毒（reovirus,REOV）的感染情况。结果发现,MDV、CAV、REV、REOV的感染率分别为5.17%、8.17%、1.17%、2.5%,检出率较以前的研究报道有降低趋势,有多种双重感染和三重感染,表明山东家禽业在免疫抑制病方面总体控制较好,但不同的养殖场发病情况差异极显著,管理水平参差不齐,个别地区发病情况严重,检出率超过其他地区的总和。     

浙江省宁波市部分鸡场鸡免疫抑制性疫病血清学调查

为了解禽白血病、禽网状内皮组织增生症和鸡传染性贫血在本地鸡群的感染情况,对宁波市7个区、县的15个鸡群进行了3种疫病4种抗体的血清学检测。结果显示:362份被检血清中,AB亚群禽白血病病毒(ALV-AB)抗体阳性率为55.0%,J亚群禽白血病病毒(ALV-J)抗体阳性率为21.5%,禽网状内皮组织增生症病毒(REV)抗体阳性率为32.0%,鸡传染性贫血病毒(CAV)抗体阳性率为66.8%;15个鸡场AB亚群禽白血病和鸡传染性贫血共感染率为100.0%;12个鸡场共感染了3种免疫抑制性疫病,混合感染率高达80.0%。调查结果表明免疫抑制病在宁波市鸡群中非常普遍。     

我国鸡群中肿瘤病的发生现状及防治措施

鸡群中可引起肿瘤的病毒有三种，即马立克氏病病毒(MDV)、鸡白血病病毒(ALV)和禽网状内皮增生病病毒(REV)。长期以来，在鸡群中只要一出现肿瘤，许多人就怀疑甚至断言是马立克氏病，而忽视了其他二种病毒的致病性。ALV的A、B、C、D亚型可在蛋用鸡中诱发肿瘤，而ALV的J亚型则主要在肉用型种鸡中诱发肿瘤。REV在蛋用型和肉用型鸡中均可诱发肿瘤。根据临床病理变化和流行病学特点，虽然可以区别一些典型的马立克氏病或白血病，但近几年来我国鸡群中实际发生的肿瘤的表现在逐渐变化，已很难仅仅根据病变来鉴别诊断究竟哪一种病毒引发的肿瘤。特别是，在同一鸡群中及同一病鸡中，二种不同病毒共感染的现象非常普遍．这更给鉴别诊断带来了难度。为了有效预防控制肿瘤的发生．首先要综合利用常规病理学、经典病毒学、分子病毒学的免疫学技术完成对肿瘤病因的科学的实验室鉴别诊断。     

肉种禽网状内皮增生症、鸡传染性贫血和禽白血病血清学调查

对不同种鸡场不同周龄肉种鸡进行REV、CAV和ALV（A、B亚群）抗体检测。在572份血清样品中，除了一个8．1周龄和15周龄鸡群CAV抗体阳性率分别为13．3％和75％外，其它鸡群无论是否进行CAV疫苗免疫，抗体阳性率均为100％。在212份血清样品中，REV抗体阳性率在16．7％～62．5％之间；ALV（A、B亚群）抗体阳性率在0％～75％之间。本研究结果表明，所检测种鸡群中存在3种免疫抑制性病毒的感染或混合感染。     

一株鸡传染性贫血病毒对不同日龄SPF鸡的致病性研究

为评价鸡传染性贫血病毒AV1550株的致病性,取1日龄、7日龄和14日龄SPF鸡分别经胸部肌肉注射不同病毒含量的病毒液,同时设置正常对照,隔离饲养观察21日。感染后14日采血测定红细胞压积,21日统计死亡率、体重变化以及胸腺、骨髓、法氏囊病变情况并测定1日龄SPF鸡感染后不同组织中的病毒载量。结果表明,1日龄SPF鸡感染AV1550株后,表现出精神沉郁、增重减缓、贫血等明显的临床症状,死亡率为53.9%;死亡鸡或观察期结束时存活鸡剖检,可见胸腺萎缩,骨髓变成淡黄色;不同剂量感染后14日,均能引起红细胞压积显著下降;21日时,胸腺病毒载量最高,可达106.7copies/mg 。7日龄SPF鸡感染后,出现增重减缓,高感染剂量（100000EID50）出现贫血,部分鸡出现胸腺萎缩和骨髓病变,但病变率低于30%。14日龄SPF鸡感染后,不引起明显临床症状。研究证实,CAV对SPF鸡的致病性具有明显的日龄依赖性,红细胞压积降低、骨髓病变、胸腺萎缩以及胸腺病毒载量测定可作为评价CAV致病的指标。     

发酵床连续养殖对白羽肉鸡病毒感染状态影响的分析

发酵床连续养殖是环保,节能的养殖技术,但它是否对疫病控制有不良影响,则是需关注的另一方向。采集同一地区不同养殖方式的白羽肉鸡样品,采用斑点杂交技术和抗体检测技术检测,试验结果表明,两种养殖方式在马立克氏病病毒(MDV)、网状内皮细胞增生病病毒(REV)检测结果上没有差别;在禽贫血病病毒(CAV)检测上抗体差异明显:发酵床养殖阳性率为28%,普通网上养殖阳性率为86%;NDV HI抗体滴度差异极显著(P<0.01)。综合评价发酵床连续养殖可有效控制疫病的感染。     

应用PCR法检测禽源生物制品中禽网状内皮组织增生症病毒

为了快速、准确检测禽源生物制品中的禽网状内皮组织增生症病毒,根据GenBank中登录的REV参考毒株LTR基因序列,利用Primer Premier 5.0软件设计合成了1对特异性引物,其扩增产物长度为314 bp,建立了PCR法,其特异性和敏感性较好。经与间接免疫荧光法进行同步比较试验,发现结果吻合性较高,且PCR法的结果更为直观,易于判断,样品保存方便,重检也方便,当日即可完成,显示出了较好的可行性。     

禽网状内皮组织增生病病毒感染性引起的鸡群免疫抑制

1999年8月，江苏省泰安州市某AA肉用型鸡父母代种鸡群呈现生长缓慢，鸡新城疫疫苗免疫注射后HI效价不高及多发性腹膜炎，心包炎等免疫抑制性症状，55日龄时，随机从4只患鸡采集血浆样品接种鸡胚成纤维细胞，7d后在间接荧光抗体反应中均对网状内皮增生病病毒（REV）的单克隆抗体11A25呈强阳性反应，结果表明，该鸡各的免疫抑制状态主要由REV的早期感染及其持续发现毒血症所引起。     

蛋鸡中发现J亚群白血病与网状内皮增生症自然混合感染

发病蛋鸡经组织学、免疫组化检测确诊为J亚群白血病与网状内皮增生症混合感染。与人工接种病例不同的是，在肿瘤组织内还发现一种特殊的细胞——淋巴-巨噬细胞；在骨髓和肿瘤组织中检测到部分髓细胞胞浆内有ALV—J抗原表达。从发病情况、各器官病变程度及免疫组化结果来看，2种病原存在明显的相互协同作用，脾可能是网状内皮增生症的原发器官。但其发病的时间可能不如J亚群白血病早。此次在蛋种鸡发现此混合感染提示，病毒在环境选择压及免疫选择压的作用下，其生物特性、致病作用以及宿主范围均可发生改变。应警惕J亚群白血病和网状内皮增生症混合感染在蛋鸡中的大面积暴发。     

从J亚群禽白血病肿瘤中检测出禽网状内皮组织增生症病毒

将表现为典型 J亚群禽白血病肿瘤的病料分别接种于鸡胚成纤维细胞和 DF1细胞 ,采用间接荧光抗体试验(IFA)和 PCR方法 ,从这些肿瘤病料中分离和鉴定出 8株 J亚群禽白血病病毒 (AL V- J)。对证明感染了 AL V- J的细胞继续培养 ,并用禽网状内皮组织增生症病毒 (REV)的特异性单抗及引物做 IFA和 PCR,在 8株 AL V- J中 ,有 3株AL V- J的感染细胞中同时有 REV感染。由此表明 ,发生肿瘤的肉鸡中 ,AL V- J和 REV的共感染已相当普遍。将这 3株 REV- SD0 0 0 3、SD0 0 0 4和 SD0 10 2的 3′- L TR用 PCR扩增、克隆和序列比较 ,发现分离的 SD0 0 0 3、SD0 0 0 4和SD0 10 2与国内的另外 2株 REV- SD990 1和 HA990 1的同源性为 96 .7%和 96 .1% ;而与另 1株 REV参考株鸭脾坏死性病毒 (SNV)的同源性高达 99%。     

禽网状内皮组织增生症病毒感染肉鸡中鸡白细胞介素18的定量检测

建立并利用鸡白细胞介素18(Chicken interleukin-18,ChIL-18)荧光定量RT-PCR方法,对禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)感染肉鸡后主要免疫器官的IL-18 mRNA转录水平进行了初步研究.结果表明,与对照组相比,处理组脾脏、胸腺和法氏囊中IL 18的分泌水平在感染后7和14 d均显著升高(P＜0.05),在感染21、28、35和42d表达差异均有显著变化(P＜0.05).本研究为探讨REV感染的免疫抑制机理奠定了一定基础.     

免疫抑制鸡群鸡传染性贫血病毒和网状内皮增生症病毒共感染检测

分别用digoxigenin标记的鸡传染性贫血病毒（CAV)和禽网状内皮增生症病毒（REV）核酸探针以及PCR技术对某种鸡场进行检测，检测结果表明，在20个样品中，CAV和REV感染的阳性率分别为10％和5％，这一结果显示，CAV和REV感染是导致该鸡场发生免疫抑制的主要病因之一。