根癌农杆菌介导的悬铃木叶片遗传转化体系研究

以葡糖醛酸糖苷酶(GUS)基因瞬时表达率为指标,研究了不同因子对根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的悬铃木叶片遗传转化系统的影响.结果表明,预培养9 d的悬铃木叶片在OD600值为0.7的根癌农杆菌菌液中浸染10 min后,再在含有100μmol.L-1的乙酰丁香酮的共培养培养基上黑暗条件下共培养3 d叶片的遗传转化效率最高.该体系为进行农杆菌介导目的基因培养悬铃木新品种奠定了基础.     

根癌农杆菌介导外源基因转化烟草体系的优化

[目的]为了建立优化的根癌农杆菌介导的烟草外源基因转化体系,提高烟草外源基因转化率。[方法]以无菌烟草苗叶盘预培养时间和农杆菌与烟草叶盘的共培养条件为试验要素,筛选适宜的预培养时间和共培养条件范围,其余操作按常规步骤进行。[结果]烟草叶盘的预培养适宜时间为27℃下35～40h;农杆菌与烟草叶盘共培养的适宜条件为22～24℃下共培养30～45h,其中23℃下共培养45h效果最佳;之后转入选择培养基内培养。[结论]该研究可为烟草外源基因的转化提供理论依据。     

根癌农杆菌介导的玉米萌动胚NPR1基因遗传转化

以玉米萌动胚为外植体,研究了影响根癌农杆菌介导的玉米NPR1基因遗传转化的若干因素。结果表明,在感染液和共培养基中分别都加入100μmol/L乙酰丁香酮,根癌农杆菌LBA4404的菌液,浸染时间12 h,40 mg/L潮霉素进行转化苗筛选,为转化的适宜条件。对转化苗进行PCR检测,证明外源目的基因已整合到玉米基因组中。     

超声波辅助农杆菌介导的长春花（Catharanthus roseus）遗传转化

研究以根癌农杆菌介导结合超声波处理和乙酰丁香酮诱导,通过对GUS基因瞬时表达来研究影响长春花转化效率的因素.对转化方法包括超声波处理的功率和时间、乙酰丁香酮(3,5-methoxy-4-hydroxyacetophenone,AS)的浓度、共培养时间进行了系统优化.结果表明:在添加AS 100 p,mol·L-1的1/2 MS培养液中,超声波处理功率80 W,处理时间10 rain,共培养2 d,根癌农杆菌介导的长春花下胚轴遗传转化能获得最佳的GUS基因瞬间表达率.本研究为进一步开展根癌农杆菌介导稳定转化长春花奠定了基础.     

农杆菌介导的海岛棉茎尖再生体系及其遗传转化影响因子的研究

采用根癌农杆菌LBA4404和EHA105介导,对海岛棉的茎尖再生体系及其转化影响因子进行了研究。茎尖培养与棉花体细胞胚胎发生相比,不同基因型的茎尖再生频率差异不明显;在9种不同的激素组合中,以6-BA0.5 mg/L NAA0.1 mg/L与1/2MSB5 IBA 0.1 mg/L对茎尖的再生效果较好;获得较高转化频率的海岛棉培养条件为:海岛苗茎尖在OD600值为0.6~0.8农杆菌菌液中感染20~30 min,共培养3 d后进行转接,在含有不同激素和抗生素的各类培养基中进行抑菌和筛选继代培养,选择压以50~150 mg/L梯度进行;农杆菌以EHA105菌株的转化效果较好;抗性苗用SDS-CTAB法提取其总DNA,进行PCR扩增检测,有7株PCR检测呈阳性反应。由此,初步证明外源抗虫基因已经进入到再生植株的细胞核中。     

籼稻品种Kasalath遗传转化条件的研究

[目的]探索籼稻品种Kasalath的遗传转化条件,为该品种进一步的分子生物学研究奠定基础。[方法]以籼稻品种Kasalath的愈伤组织为转化受体,应用根癌农杆菌介导法进行遗传转化;从共培养方式、共培养时间、共培养后处理方法等方面优化遗传转化体系。[结果]当愈伤组织与农杆菌共培养时间为2d时的转化效果最好,抗性愈伤组织获得率达84.1%,转化菌的转化率达到73%,且共培养时愈伤组织是否直接接触培养基对转化无明显影响。[结论]遗传转化成功地将外源基因OsMAPK2整合到水稻基因组中。     

根癌农杆菌介导的玉米幼胚遗传转化体系

为建立以潮霉素为选择标记的农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的玉米高效遗传转化体系,本研究利用携带p MDC141-CYP79A1(含GUS基因)质粒的农杆菌浸染玉米A188幼胚,共培养7d后通过GUS基因瞬时表达率,研究农杆菌的菌液浓度、热激时间和浸染时间等因素对玉米幼胚遗传转化效率的影响。研究结果表明:随着农杆菌的菌液浓度的增加、热激时间和浸染时间的延长,GUS表达效率均呈现先增后减的趋势;当农杆菌菌液的OD_(600)为0.8、热激预处理时间3min和浸染时间5min时,其GUS瞬时表达率均最高,分别为46.8%、46.4%和51.7%。并在最佳条件下将GUS基因转入到玉米幼胚,以潮霉素为选择标记,进行3次选择培养,将重新分化的抗性愈伤组织进一步分化成苗,获得56株潮霉素抗性植株,经PCR分子鉴定,获得22株阳性植株,初步建立根癌农杆菌介导的高效玉米幼胚遗传转化体系,为以抗潮霉素基因作为筛选标记的玉米遗传转化和基因功能验证提供技术基础,获得的抗潮霉素转化植株为玉米育种提供新材料。     

农杆菌介导海岛棉遗传转化影响因子的研究

农杆菌介导转化法是转基因技术中常用方法之一,但其在介导海岛棉遗传转化方面仍存在转化率较低的主要问题。故本文对农杆菌介导海岛棉遗传转化效率的多因素进行了概述,分别从菌液浓度、侵染时间、预培养时间、共培养等多方面进行探讨。同时,对国内农杆菌介导海岛棉领域的研究现状提出了新问题及建议,以期为海岛棉遗传转化体系进一步完善提供参考。     

农杆菌介导的多裂叶荆芥转化体系建立

为了建立根癌农杆菌介导的多裂叶荆芥转化体系,以携带pBI121-gfp质粒的根癌农杆菌LBA4404菌株介导,荆芥试管苗带叶腋茎段为转化受体材料,探究了预培养时间、菌液浓度、侵染时间、共培养时间4个因素对荆芥转化效果的影响。每个因素设置4个水平,以L16(45)正交实验进行,筛选的卡那霉素抗性芽进行GFP荧光检测和PCR检测。结果表明,gfp基因成功导入转化植株,预培养5d、菌液浓度OD600为0.7、侵染15min、共培养3d为多裂叶荆芥的最优转化条件。转化率为20%,每个外植体再生抗性不定芽数平均为5个。荆芥转化体系的建立为利用植物基因工程改良其遗传性状奠定基础。     

根癌农杆菌介导的丝状真菌简青霉遗传转化的研究

利用根癌农杆菌LBA4404介导,建立了丝状真菌简青霉（Penicillium simplicissimum）H5的遗传转化系统.潮霉素抗性筛选、PCR和Southern blot分子鉴定等结果表明：筛选获得的转化子能够稳定遗传,外源的TDNA以单拷贝随机整合到简青霉的基因组中.实验初步研究了农杆菌浓度、乙酰丁香酮浓度和共培养时间等因素对转化效率的影响,经过优化后转化体系的效率可达50个转化子/105个孢子.农杆菌介导的遗传转化方法在简青霉上的运用,将为研究该菌的基因工程改造提供强有力的工具.     

主捕长鳍金枪鱼延绳钓钓具的最适浸泡时间

根据2012年9月21日-11月15日库克群岛海域金枪鱼延绳钓海上调查数据,建立了钓钩深度计算模型,分两种起绳方式建立了作业中每一根支绳的浸泡时间计算模型。将钓钩深度以40 m为一层,共分为6个水层(40~80 m、80~120 m、120~160 m、160~200 m、200~240 m和240~280 m),统计每个水层和整个水体内的钓钩数量和长鳍金枪鱼(Thunnus alalunga)的渔获尾数。计算每个水层和整个水体内的钓具浸泡时间,并以1 h为间隔分别统计每个区间的支绳数量及渔获尾数,计算其渔获率。结果表明:(1)二次曲线可拟合浸泡时间与长鳍金枪鱼渔获率的关系,其渔获率随浸泡时间的增加呈现先增后减的趋势;(2)长鳍金枪鱼在40~280 m整个水体、6个水层中渔获率最高的浸泡时间为11.0~11.4 h。建议:(1)主捕长鳍金枪鱼时,尽可能把支绳的浸泡时间设定在10.0~12.0 h左右,以提高捕捞效率;(2)对于漂流延绳钓,整个水体的最佳浸泡时间可代表各个水层的最佳浸泡时间;(3)目标鱼种不同,钓具的最佳浸泡时间也不同;(4)浸泡时间可作为延绳钓钓具有效捕捞努力量。研究结果可用于提高长鳍金枪鱼捕捞效率,为渔业生产和CPUE的标准化提供参考。     

超声微波协同萃取葛根中葛根素工艺的研究

[目的]探究利用超声微波协同萃取葛根中葛根素的提取工艺,以期为葛根素的工业化生产提供新思路。[方法]采用单因素试验和正交试验,以葛根素得率为指标,分别考察微波功率、提取时间、乙醇浓度、料液比及浸泡时间对葛根素提取的影响。[结果]在超声微波协同作用下,葛根素的最佳提取工艺为：微波功率为250W,提取时间为25s,乙醇浓度为50%,料液比为1：20,浸泡时间为30min。在此条件下,葛根素得率为0.6376%。[结论]超声微波协同萃取葛根素具有萃取效率高、节省时间、节省溶剂、节能、污染小等优点。     

高原地区冷浸田治理技术研究*

 冷浸田是中国南方低产田中的一个主要类型，地形和水文条件是引起田块冷浸的主要原因，长期受冷水浸渍，终年水土低温或兼有土层稀烂。以陇川县南宛河右岸土地开发整理项目为例，介绍土工织物加筋土技术在冷浸田治理中的应用，为其它地区冷浸田的治理提供了较好的参考。     

即食红小豆粉的研制

笔者对即食红小豆粉的两种生产工艺进行了研究,着重分析了浸泡条件、水煮时间、增稠剂用量等几个影响产品质量的因素,并确定了即食红小豆粉的工艺流程和配方。即食红小豆粉的最佳配方为:红豆沙80g,糯米汁35g,白砂糖45g     

微波压力浸提法测定干果中的总酸度研究

介绍了一种微波浸提干果、快速测定其总酸度的新方法.讨论了微波功率、微波时间、浸提液体积等因素对测定结果的影响.结果表明,以中高档功率微波浸提4 min,基本可以浸提完全,用100 ml的容量瓶浸提试样,浸提液体积为40～60 ml时,结果较为理想.4分钟内可一次性完成20个样品的浸提工作.与国家标准方法相对照,测定速度提高了数十倍,,没有显著性差异.该方法操作简便、省时、省事、节约能源、结果准确可靠、测定速度快,测定效率高,宜于批量样品的测定.     

5种花茶清除亚硝酸钠和抑制亚硝胺合成的效果分析

以康乃馨、月季、迷迭香、玫瑰、红巧梅5种市售花茶为原料,在体外模拟胃液(pH 3.0,37℃)条件下,测定5种花茶20 mg/mL的浸泡液清除亚硝酸钠及抑制亚硝胺合成的能力,并与维生素C进行比较.结果显示,月季和玫瑰花茶浸泡液的亚硝酸钠清除和亚硝胺合成抑制效果强于其他几种花茶,其最大亚硝酸钠清除率分别为94.00％和92.71％,最大亚硝胺合成抑制率分别为83.81％和87.89％,红巧梅浸泡液的亚硝酸钠清除和亚硝胺合成抑制效果在5种花茶中最差.10 mL 20 mg/mL月季或玫瑰花茶浸泡液对亚硝酸钠的清除效果相当于12.0 mg维生素C,6.0 mL 20 mg/mL月季花茶浸泡液或10.0 mL 20 mg/mL玫瑰花茶浸泡液对亚硝胺合成的抑制效果相当于12.0 mg维生素C.     

利用活性炭的选择吸附性分离与提纯玉米浸泡水中的脂多糖

利用活性炭的选择吸附性,以活性炭为吸附剂提取玉米浸泡水中的脂多糖。研究了活性炭用量以及浸泡水的pH值对脂多糖提取率的影响,结果表明:活性炭用量为原料重的2%,溶液pH值为6.5最有利于脂多糖的提取;脂多糖从玉米浸泡水中提取出来后,采用活性炭色谱法和离子交换色谱法分离提纯。活性炭色谱法提纯脂多糖的回收率为82.34%,初步产品中还含有较多的蛋白质和普通多糖,在冷冻干燥后再通过离子交换色谱法进一步分离提纯,然后冷冻干燥并脱盐,最终脂多糖产品纯度达到了97.4%。     

新型生长调节剂Topflor对盆栽小苍兰生长和开花的影响

以盆栽小苍兰为研究对象,将不同浓度的Topflor水溶液通过浸球、浸湿基质以及叶面喷施的方式进行处理。结果表明,Topflor能明显抑制小苍兰营养生长,3种处理方式均对小苍兰株高有明显抑制效果,但高于50mg/L的浸球处理会使叶片表现出激素伤害症状。用10~75mg/L的浸球处理和0.5~2.0mg/盆的浸湿基质处理中,对增加叶宽有显著影响,而叶面喷施则无明显影响。Topflor浸球和浸湿基质处理明显增加了小苍兰叶片的厚度,但所有处理对盆栽小苍兰的分蘖均没有促进作用。Topflor对开花性状的影响主要表现在对开花株数、花径以及小花数等指标上,对花色及花型没有不利影响。整体来看,10~25mg/L浸球处理,25~50mg/L叶面喷施处理,以及1mg/盆的浸湿基质处理有利于小苍兰的盆栽生产。     

观赏石榴扦插技术研究

采用IBA(吲哚丁酸)和NAA(萘乙酸)2种植物生长调节剂的不同浓度、不同配比和不同浸泡时间对4种观赏石榴的插穗进行处理,以探讨促进石榴生根的最佳处理措施。结果表明,以IBA和NAA2种激素的混合配方100 mg.L-1 IBA+100 mg.L-1 NAA、浸泡时间0.5 h的处理插穗生根率最高,可高达91.23%。     

正交试验法优化甲醇提取艾蒿中槲皮素工艺条件

以艾蒿为原料,槲皮素含量为指标,在单因素试验基础上,采用正交试验设计法优化甲醇提取艾蒿中槲皮素的工艺。结果表明,甲醇提取艾蒿中槲皮素最佳提取工艺为料液比1∶16(g/m L),甲醇体积分数100%,浸泡时间2 h,超声时间30 min。按优选工艺条件下槲皮素含量为0.698 mg/g,验证试验证明结果稳定,具有生产应用价值。