微生物法提取马齿苋和银杏叶黄酮及其抗氧化活性研究

采用乙醇和微生物的方法对马齿苋(Portulaca oleracea L.)和银杏(Ginkgo biloba L.)叶进行黄酮的提取,并测定粗提液对DPPH自由基的清除作用。结果表明,乙醇提取马齿苋和银杏叶黄酮的提取率分别为2.00%和4.37%,微生物提取马齿苋和银杏叶黄酮的提取率分别为2.07%和4.84%。马齿苋和银杏叶微生物提取液对DPPH自由基的清除作用在相同的稀释倍数下高于乙醇提取液,表明微生物提取植物中黄酮具有一定的可行性和优越性。     

32个银杏品种的RAPD遗传多态性及其分类

以32个银杏(Ginkgo bilobaL.)品种的鲜叶为材料,提取其总DNA,从56个随机引物中筛选出8个单引物和4对双引物进行RAPD扩增.以随机扩增多态性DNA(RAPD)标记方法进行遗传多样性分析,用NTSYS-pc2.10e软件计算样品间的Dice相似性系数,并按UPGMA法进行了聚类分析.结果表明,8个单引物和4对双引物扩增共得到85个位点,其中81个(95%)是多态性的,说明供试样品在DNA水平上有很高的遗传多样性.32个供试的样品可分为两大类,北京梅核、南雄上矽(雄)、华口大白果为一类,其它的为第二类.在四个泰兴品种中泰兴2号和泰兴3号的相似性系数为0.968,表明它们的遗传关系比较近.本研究在分子生物学方面为银杏的品种分类和遗传多样性提供了一些新依据.     

蔗糖及天然有机物对银杏愈伤组织合成黄酮的影响

研究了蔗糖和其它5种有机附加物对银杏愈伤组织生长及黄酮积累的影响。结果表明:供试浓度30 g/L蔗糖最有利于愈伤组织生长,60 g/L蔗糖加入培养基中黄酮含量最高;10 mL/L椰乳、1 mL/L芦荟汁、15 mL/L蜂蜜、50 mL/L银杏胚乳汁能促进愈伤组织生物量的提高,而银杏叶汁对愈伤组织生长作用不明显;200 mL/L椰乳、5 mL/L芦荟汁、1 mL/L蜂蜜、32.6 mL/L银杏叶汁能有效提高黄酮含量,但银杏胚乳汁的作用不明显。     

重庆市道路绿地银杏和紫薇的生长势评价

从重庆道路绿地和苗圃中选取10株银杏(Ginkgo biloba L.)和紫薇(Lagerstroemia indica L.)植株,测定其物候期、根系指标、生理指标和当年生枝条的生长量指标等,以综合评价银杏和紫薇在重庆市道路绿地中的生长势,以期为园林绿化养护评价和确定园林绿化苗木选取原则提供参考。     

银杏4-香豆酸辅酶A连接酶基因的克隆与序列分析

根据银杏(Ginkgo biloba L.)转录组中的基因序列设计引物,从银杏中克隆到了4-香豆酸辅酶A连接酶(4-coumarate:CoA ligase,4CL)的cDNA片段,命名为Gb4CL,GenBank登录号为KU820947。Gb4CL全长1736bp,含有1个1671bp的ORF,编码557个氨基酸。核苷酸和蛋白质序列多重比较结果显示,Gb4CL与其他植物的4CL基因的核苷酸与蛋白质序列均高度同源。Gb4CL编码的蛋白质与日本柳杉(Cryptomeria japonica)、白豆杉(Pseudotaxus chienii)、北美云杉(Picea sitchensis)的4CL氨基酸同源性分别为82%、83%、80%。4CL系统进化树显示,Gb4CL与裸子植物亲缘关系最近。该研究通过克隆Gb4CL基因,并进行相关的生物信息学分析,可为掌握银杏木质素生物合成中关键基因的调控机理提供参考。     

稀土元素对银杏悬浮培养细胞生长和次级代谢产物积累的影响

稀土元素对银杏悬浮培养细胞生长和次级代谢产物积累的影响试验结果表明，低浓度的硝酸铈铵对银杏细胞的生长影响不大，高浓度则抑制细胞生长，10.0mg/L的硝酸镧对促进细胞生长的效果最好；硝酸铈铵和硝酸镧对银杏黄酮积累的促进作用不明显，但能促进银杏萜内酯的积累，硝酸铈铵的添加浓度以1.0mg/L为好，硝酸镧的适宜添加浓度则培养当天为10.0mg/L、培养第10天为1.0mg/L。     

白果贮前热激处理与贮藏期间霉变的相关性研究

以银杏种子为研究对象,以50℃热水为处理介质,研究了不同热激处理时间(0.5、1、1.5、2、2.5 h)对常温贮藏期间银杏种子霉变的影响.对贮藏期间霉变率、多聚半乳醛酸酶(Polysalacturonase,PC)和果胶甲酯酶(Pectinesterase,PE)活性等指标进行了测定.结果表明,热激处理能有效地抑制银杏霉变,且在本实验处理时间范围内,抑制程度随热激处理时间延长而增加.     

银杏组培繁殖及黄酮糖苷的产生

以银杏(Ginkgobiloba)腋芽为外植体进行组织培养,筛选出了适宜银杏芽萌发、增殖和生根的培养基配方和培养条件,其根、芽诱导率都在89%以上,增殖倍数达8.1.在固体培养基上诱导银杏芽产生愈伤组织,将黄绿色、蓬松状、生长快的愈伤组织转入液体培养基中建立悬浮细胞培养系,在液体继代培养基中添加5ml·1-1蜂蜜可明显促进细胞分裂、生长及黄酮糖苷的累积,提高细胞产量.经过10次液体继代培养,悬浮细胞中黄酮糖苷含量接近成熟叶片含量水平,相对含量为叶片的92.4%.     

银杏内生真菌的分离纯化及抑菌性的鉴定

采用组织分离法从银杏(Ginkgo biloba)健康组织中分离得到25株内生真菌,根据菌株在PDA培养基上的培养特征,5株被鉴定为链孢霉菌属、4株为酵母属、4株为曲霉属,3株为毛霉属、3株为青霉属,2株为根霉属,1株为简梗孢霉属,3株分离菌株不产孢子。测定25株内生真菌对3种受试指示菌的抑制作用,共筛选得到11株至少对一种指示菌的生长有抑制作用的菌株,对抑菌活性较强的菌株进行形态学和显微分析鉴定。     

甘草悬浮细胞培养生产甘草总黄酮的研究

探讨了胀果甘草和光果甘草愈伤组织诱导培养的条件,并建立了甘草的悬浮细胞系,同时还分析了甘草细胞中总黄酮的含量.结果表明,用浓硫酸处理40min后,甘草种子的萌发率最高.在甘草愈伤组织诱导形成时,采用MS 2,4-D(1.0 mg·L-1) 6-BA(1.0 mg·L-1) NAA(1.0 mg·L-1)培养基并以下胚轴为外植体的诱导率最高,达到90%,而且在继代培养基MS NAA(0.5 mg·L-1) 2,4-D(0.5 mg·L-1) 6-BA(0.5mg·L-1)中愈伤组织生长速度较快、状态最好.此外,在建立的甘草悬浮细胞系中,胀果甘草细胞株B12、B4和光果甘草细胞株G2的甘草总黄酮含量分别为干重的1.8%、1.2%和0.66%.     

超声法提取银杏叶黄酮类化合物的工艺研究

研究了银杏叶黄酮类化合物的超声波法提取工艺(用水作为溶剂).超声波法提取的最佳工艺条件为:超声波频率为40KHz,超声波处理时间55 min,温度35℃,静置3 h,提取率达到81.9%.在此条件下,测其总黄酮含量为1.07%.定性试验和紫外光谱分析结果表明,银杏叶中的黄酮化合物主要为黄酮醇类.     

碱溶酸沉法提取银杏叶总黄酮

[目的]研究银杏叶总黄酮的碱溶酸沉法提取。[方法]采用碱溶酸沉法,对影响银杏叶总黄酮提取的pH值、固液比、提取温度和提取时间等因素进行系统研究。[结果]银杏叶总黄酮碱溶酸沉法的最佳提取工艺条件为:95℃时用40倍量pH值为10.0的NaOH溶液处理60 m in,酸沉pH值3.5,提取2次。[结论]在最佳提取工艺条件下,银杏叶总黄酮的提取率达到86.4%。     

银杏叶黄酮的酶法提取及生物转化研究

研究了银杏叶黄酮的酶法提取及生物转化工艺。结果证明,酶法提取能够显著提高银杏叶黄酮提取率,生物转化能够显著提高银杏叶黄酮中苷元黄酮的含量。     

减压内部沸腾法提取银杏总黄酮的工艺研究

[目的]研究银杏叶中银杏总黄酮的提取方法。[方法]采用减压内部沸腾法,对银杏叶粉末进行解吸和提取,考察了解吸和提取中各因素对提取率的影响,优选出最佳解吸和提取条件,并与传统提取方法进行比较。[结果]优选的最佳解吸条件为:解吸剂为浓度80%乙醇,解吸时间20 min,解吸剂用量15 ml;最佳提取工艺为:提取压力为0.067 MPa,提取温度为60℃,提取剂为浓度30%乙醇,提取2次,每次5 min;在此条件下,银杏总黄酮的提取提取率为2.55%。与传统的乙醇提取方法比较,温度降低了20℃,提取速度快了11倍,乙醇用量减少了2倍,提取液色素、杂质含量少,并可以直接上柱,银杏总黄酮的纯度达29.8%,具有明显的优势。[结论]该方法节约、快速、有效,可用于银杏叶中银杏总黄酮的提取。     

高纯度银杏黄酮的制备

[目的]制备高纯度的银杏黄酮,探索一条规模化制备高纯度银杏总黄酮的工艺路线。[方法]用固相填料为ODS的色谱柱纯化银杏黄酮,考察梯度洗脱、浓缩温度、干燥温度对银杏黄酮含量的影响。[结果]甲醇∶0.5%磷酸=5∶5和7∶3（V∶V）的馏分为目标馏分,最佳浓缩温度和干燥温度为45℃,在最佳条件下,银杏黄酮质量百分含量≥90%,收率为78.3%。[结论]该试验获得了高纯度银杏黄酮,为高纯度的银杏总黄酮制备提供了一种高效的方法。     

银杏壳中类黄酮的提取工艺研究

[目的]研究银杏壳中类黄酮的提取工艺条件。[方法]采用乙醇水溶液作提取溶剂来提取银杏壳中的类黄酮,通过单因素试验考察提取时间、乙醇浓度、料液比和提取温度等主要因素对银杏类黄酮提取的影响,并采用正交试验确定传统醇提取法和微波协同萃取法提取银杏壳中类黄酮的最佳工艺条件。[结果]传统醇提取法的最佳条件为:提取温度为60℃,乙醇浓度为75%,料液比为1∶45(W/V,g/ml,下同),提取时间为2 h;在此条件下,类黄酮的得率为0.503 4%。微波法提取银杏壳中类黄酮的最佳条件为:微波温度为60℃,乙醇浓度45%,料液比1∶30,微波提取时间480 s;在此条件下,类黄酮得率为0.815%。[结论]微波提取法操作极为简便迅速,是一种快速、高效、节能的新型提取工艺,与传统醇提法比较,有一定的优越性。     

白木香细胞悬浮培养的研究

[目的]为建立白木香（Aquilariasinensis）细胞悬浮培养的结构化动力学模型和次生代谢产物的生产提供参考资料。[方法]以白木香愈伤组织为材料,应用正交设计对植物生长调节剂种类、浓度以及水解酪蛋白的含量进行了筛选,并对影响其生长的不同因子进行了考察。[结果]适合白木香细胞悬浮培养的培养基为：MS＋1．0mg／L6-BA＋1．0mg／LNAA＋1．0mg／LKT＋500．0mg／L水解酪蛋白,蔗糖含量为40g／L,pH值为5．3～5．8,初始接种量为6m1种子液/20ml,肌醇含量为0．25g／L。[结论]初步建立了一个细胞生长迅速且分散性较好的白木香细胞悬浮系。     

银杏嫁接技术研究

6a试验和生产实践证明，长块削芽接和贴枝接是银杏最好的2种嫁接方法，操作方便，接穗利用率高，嫁接时间长，接苗生长好，嫁接成活率达90％以上。普通枝接1年生砧木基径要0.50cm以上，而削芽接和贴枝接只需0.35cm以上。接穗位置效应明显，以结实树树冠外周1年生延长枝为宜，内膛枝，徒长枝和纤细枝不宜作接穗。翌年4－6月科学施肥，延迟接苗顶芽形成，是培养壮苗的关键。1年生砧木当年嫁接，以8月下旬至10月中旬为好，8月中旬前嫁接，接芽发育不良，抽梢差。接后不能立即断砧，否则接苗因饥饿死亡。用大树根蘖枝，幼树和幼苗枝嫁接的假苗，可从苗木长势，抽梢整齐度，削度，有无雌蕊和结实识别。表4参3。     

叶用芥菜细胞悬浮培养的研究

以叶用芥菜的子叶为外植体,对愈伤组织诱导和细胞悬浮培养的技术体系进行了研究.结果表明,愈伤组织诱导的最适培养基为MS+0.3 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L 2,4-D,愈伤组织最佳增殖培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D.悬浮培养过程中细胞生长曲线呈S型,培养2～10 d达对数生长期.将小细胞团接种于Ms+1.0 mg/L NAA+3.0 mg/L 6-BA分化培养基上,继代两次后,分化出芽,分化芽在培养基MS+0.1 mg/L NAA上诱导生根,形成小植株.     

Study on Cell Suspension Culture of Floribunda Rose

Friable callus was induced when immature seeds of floribunda rose were inoculated on MS medium supplemented with 2,4-D 3.0 mg.L^-1. When transfered onto subculture media, friable callus developed into embryogenic callus, which was used to establish cell suspension lines. Cell suspensions had to be subcultured at a interval of 4-5 days at the first several culture cycles. The best subculturing cycle for the stable cell suspensions was 8-10 days. The best inoculum quantity was 1 mL PCV（Packed Cell Volume） per 40 mL culture fluid.