猪生殖——呼吸综合征病毒研究进展

对猪生殖与呼吸综合征病毒新的分类地位,基因结构特点,病毒蛋白的功能、病毒在细胞的增殖过程,增殖特点、毒株变异等新进展及病毒独特的生物学行性作了综述,提出了病毒变异和毒力差异的分子基础是需要进一步研究的问题。     

广东省猪生殖与呼吸综合征病毒主要结构蛋白基因的变异分析

根据GenBank中猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株(ATCCVR-2332)基因序列分别设计合成了针对PRRSV ORF3、ORF5和ORF6基因的引物，利用RT-PCR从广东省送检的5份病料中均分别扩增得到了大小约787、630和550bp的片段，将扩增的cDNA片段克隆入pMD18-T载体并测序。应用DNAStar软件分析，并与国内外已发表毒株和疫苗株(RespPRRS／Repro、RespPRRSMLV)、LV4．2．1株的序列进行比较。结果显示，这5个毒株与CH-la、HB-l(sh)、BJ-4、ATCC VR-2332、疫苗株等毒株ORF3、ORF5、ORF6的核苷酸同源性分别为87．2％～98．7％、85．4％～96．8％、91．8％～98．9%，推导的氨基酸同源性分别为84．6％～97．6％、84．5％～95．5％、94．8％～98．9％；而与LV4．2．1株的核苷酸同源性分别为56．1％～58．3％、54．4％～57．0％、62．2％～64．4％，推导的氨基酸同源性分别为53．9％～56．7%、54．0％～57．0％、78．0％～80．3％。基因系统发育树表明，广东省流行的PRRSV与HB-1(sh)株的亲缘关系比较近。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒新结构蛋白基因ORF5a分子特征

本研究采用RT-PCR方法从临床病料中扩增得到了5株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)山东流行株新结构蛋白ORF5a基因序列,并与国内外其他22株PRRSV ORF5a基因序列进行了比较和分析。结果表明,5株PRRSV山东株ORF5a基因CDS为141 bp,编码46个氨基酸,序列同源性为93.6%~100%(nt)和89.4%~100%(aa);5株山东株与其他Ⅱ型PRRSV同源性为83.0%-99.3%(nt)和72.3%~100%(aa)。在ORF5a蛋白上高度保守的R/Q基序区,LX13(3)株有3个氨基酸的变异,CY13株有1个氨基酸的变异。与2006年以前的毒株相比,我国2006年以后分离的毒株第8、12、28位和42位的氨基酸发生了变异。进化树分析表明,5株PRRSV山东株与高致病性PRRSV代表株JXA1株在同一个亚群。     

山东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒分子特征

为揭示2009～2010年山东地区流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的分子特征,通过RT-PCR扩增采自山东地区不同猪场病猪组织样本中PRRSV的Nsp2、ORF5、ORF6、ORF7序列,用DNAStar软件分析所测序列,并与北美洲型VR-2332株、欧洲型LV株及国内分离株进行核苷酸和推导的氨基酸同源性比较...     

浙江省猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的遗传变异分析

为了解2004-2009年猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) ORF5基因的变异情况,从浙江省各个地区采集了109份临床疑似病料,共检测到61份ORF5基因阳性,经序列测定得到可比序列11 7个.在核苷酸序列分析中,发现2004-2005年PRRSV ORF5序列之间同源性为83.6％～99.3％,2006年同源性最高达98.3～99.2％,2008-2009年同源性又有所降低.在氨基酸主要位点分析中,分离毒株的非中和表位27～～30位点与美洲株相比,2004-2006年大部分毒株的29 aa由A29-V29,而2007-2009年大部分毒株的29 aa又由V29-A29;在表位37～45 aa中,所有39位点处由L39”一I39;在表位80～197 aa中,从2004-2009年185 aa大部分都发生了变异,由V185-A185,第189位点由I189-L189.在蛋白生化特性分析中,发现与参考株VR2332 (AY150564)和CH la(AY032626)相比,浙江省PRRSV-GP5蛋白的第100～106位亲水性、表面可及性明显增加,抗原性指数也有所提高,而与参考毒株JX-06-2-EU480750相似.该试验结果说明随着时间的推移,PRRSV ORF5基因发生明显的变异.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白研究进展

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是引起猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的病原,该病毒自发现以来受到国内外学者的高度重视,对病毒结构蛋白的研究也正在逐步深入和完善.论文综述了近年来PRRSV结构蛋白的最新研究进展,特别对新发现的5a蛋白的结构与功能、决定病毒入侵的细胞受体及与其结合的病毒囊膜蛋白等问题进行深入分析,从而...     

浙江省猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的遗传变异分析

为了解2014-2016年浙江地区猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）ORF5基因变异情况,试验通过RT-PCR方法对从浙江省各地区采集的PRRSV阳性病料进行ORF5基因扩增,应用DNAStar和Mega 5.1软件对所测序列进行同源性和遗传变异分析。结果显示,54株2014-2016年浙江分离株ORF5序列之间核苷酸和氨基酸序列同源性分别为83.1%~100%和80.6%~100%,与经典株VR2332核苷酸和氨基酸序列同源性分别为83.8%~90.4%和81.6%~90.0%,与高致病PRRSV毒株JXA1核苷酸和氨基酸序列同源性分别为83.5%~99.5%和83.1%~99.0%。系统进化分析表明,54个毒株均为美洲型毒株,属于Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ 3个不同的基因亚型,其中基因亚型Ⅲ和Ⅳ毒株是浙江省近年来新出现的毒株。氨基酸序列分析结果显示,54个毒株在GP5蛋白的信号肽区域、非中和抗体表位的氨基酸序列变异较大,而在中和表位氨基酸序列变异较小。本研究结果表明,浙江地区PRRSV流行出现了新形势,多种基因亚型共同存在,其中以基因亚型Ⅰ毒株为主。     

猪生殖-呼吸道综合征国内分离毒株的病毒纯化及其结构蛋白分析

本研究主要对猪生殖呼吸道综合征（ Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ） 国内分离毒株（ Ｃ Ｈ Ｉａ） 进行了病毒纯化及其结构蛋白的分析。选用聚乙二醇（ Ｐ Ｅ Ｇ６０００） 沉淀和差速离心法粗提了经 Ｍａｒｃ１４５ 细胞系增殖的猪生殖呼吸道综合征病毒（ Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ） 。并采用非线性蔗糖密度梯度离心法纯化了 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ, 经免疫电镜观察纯化病毒, 发现有较多的胶体金颗粒吸附在直径为４２ ～７８ｎｍ 的病毒粒子周围。经 Ｄｏｔ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 测定纯化病毒的滴度可达１ １６００ 以上, 并利用 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 和 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ 两种方法对国内分离毒株（ Ｃ Ｈ Ｉａ） 与欧洲型（ Ｌｅｌｙｓｔａｄ） 、美洲型（ Ｖ Ｒ２３３２） 等参考毒株的病毒结构蛋白组成和部分抗原特性进行了初步的研究。测得国内分离毒株主要结构蛋白的分子量为１４５ Ｋ Ｄ,１９２ Ｋ Ｄ 和２６３ Ｋ Ｄ, 并均能被 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 的高免血清识别, 这与国外的同类报道很相似。     

检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体ELISA方法的建立

本试验通过差速离心法和非线性蔗糖密度梯度离心法纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）。经三氯－三氟乙烷处理后,作为ＥＬＩＳＡ试验的标准抗原,并建立了检测ＰＲＲＳＶ抗体ＥＬＩＳＡ方法。该方法与ＩＦＡ、ＩＰＭＡ和国外同类商品化试剂盒进行了对比试验,表明该方法具有敏感性高、特异性好的特点,是一种快速准确检测ＰＲＲＳＶ抗体的方法。间接ＥＬＩＳＡ方法在敏感性上要优于ＩＦＡ和ＩＰＭＡ》     

Research Progress on the Nonstructural Proteins of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus

Porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) is a highly contagious disease that spreads all over the world.It is caused by porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV).Once infected with PRRSV,NSPs (nonstructural proteins) were expressed firstly.At least 14 kinds of NSPs,including NSP1α,NSP1β,NSP2,NSP3,NSP4,NSP5,NSP6,NSP7a,NSP7b,NSP8,NSP9,NSP10,NSP11 and NSP12,were produced during PRRSV life,which plays an important role in virus proliferation,virus virulence,immunological characteristics and so on.In this paper,we make a brief overview in terms of the research progress on NSPs to make a basis for the prevention of PRRS.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白研究进展

猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS）是一种遍布于全世界的高度传染性疾病,其病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV）。感染PRRSV后,最先在机体内进行表达的是非结构蛋白（nonstructural proteins, NSPs）,PRRSV基因组编码区经翻译后至少产生14种NSPs（NSP1α、NSP1β、NSP2、NSP3、NSP4、NSP5、NSP6、NSP7a、NSP7b、NSP8、NSP9、NSP10、NSP11、NSP12）,这些NSPs在病毒增殖、病毒毒力、免疫学特性等方面都发挥着重要作用。作者就NSPs的研究进展进行简要概述,以期为PRRS疫苗研发及技术防控奠定基础。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离与鉴定

从辽宁某猪场采取病料,经处理后接种Marc-145细胞进行PRRSV分离,结果有2份病料在该细胞上盲传后可见典型的CPE,经测定其毒价为10^-6.5TCID₅₀/mL。间接免疫荧光试验可见黄色荧光,用电镜对纯化的病毒进行观察,可见有囊膜包裹的圆形病毒粒子,直径约为50~70 nm。该病毒对氯仿、紫外线、酸碱度变化和热敏感。对有CPE的细胞培养物进行RT-PCR,结果为阳性。接种试验动物出现典型的PRRS临床症状和死亡。结果表明,成功分离到一株PRRSV。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒实验室诊断方法的研究

猪繁殖与呼吸综征（PRRS）自1987年首次在美国发现以来，已给世界养猪业造成了巨大的损失。快速精确的诊断是有效防制该病的前提。随着分子生物学技术的不断发展，已建立了许多敏感性高、特异性强、易于操作的诊断及检测PRRS抗体和抗原的方法。作者就PRRSV实验室检测方法的研究进展进行了概述，为进一步检测和控制该病提供参考。     

一株猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株的分离与鉴定

试验旨在分离并鉴定从发病猪场分离的一株疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株。从某疫情猪场病猪体内分离到一株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株,经细胞传代培育成功增殖性能稳定的新毒株,命名为PRRSV-CHD。该毒株接种细胞后能够产生细胞病变(CPE),病毒滴度达10^-6 TCID50/0.1 mL,在Vero与BHK-21细胞上不出现细胞病变。采用间接免疫荧光法(IFA)检测病毒抗原分布在细胞浆中。与VR2332、CH-1a、HUN4序列比对及系统进化树分析结果表明,该分离株属于美洲型PRRSV;与PRRSV VR2332、CH-1a等比对,Nsp2基因序列在2780—2782 nt有3个核苷酸小缺失和2933—3019 nt的87个核苷酸大缺失,属PRRSV变异株。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒的危害及免疫策略

Porcine reproductive and respiratory syndrome is a serious disease, causing significantly economical impacts on the swine industry worldwide. Because of the mechanism of virus infection, the characteristics of antibody-dependent enhancement and a high degree of variability, the commercial vaccines currently exist defects that can’t completely prevent the respiratory system and placental transmission of porcine reproductive and respiratory syndrome virus （PRRSV）. Therefore, according to the pathogenic characteristics, PRRSV immune characteristics and biological characteristics, the new vaccines are designed which have important significances to the prevention of the disease.     

猪生殖-呼吸道综合征病毒CH-1_株N基因的原核表达

将ＰＲＲＳＶＣＨ１ａ株Ｎ基因用ＥｃｏＲＩ和ＰｓｔＩ双酶切从重组质粒ｐＵＣ１８ＯＲＦ７切下后,插入到原核表达载体ｐＢＶ２２０的ＰＲ、ＰＬ启动子下游,得到重组表达质粒ｐＢＶ２２０ＯＲＦ７。转化了ｐＢＶ２２０ＯＲＦ７的大肠杆菌ＪＭ８３经诱导培养后,用ＳＤＳＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表达产物。结果表明ＰＲＲＳＶＣＨ１ａ株的Ｎ基因在原核载体上得到高效表达,表达产物占菌体总蛋白的１５３％。表达蛋白可望成为有价值的ＰＲＲＳ诊断抗原。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒安徽株的分离与鉴定

从安徽地区的发病猪场的病料中,分离到3株致Marc-145细胞病变的病毒（命名为AH1、AH2、AH3）,负染电镜观察结果可见直径约50 nm的有囊膜的球形病毒粒子,细胞超薄切片可见病毒粒子分散在细胞浆内,直径为40～80 nm。理化特性研究结果表明,3株分离毒均对氯仿、乙醚、甲醛、温度(56 ℃)敏感;间接免疫荧光试验结果显示,分离株与美洲型PRRS阳性血清反应,发出强特异性荧光;对分离毒株Nsp2基因序列分析发现：安徽分离毒株Nsp2基因存在两处共90个碱基缺失现象,与JXA1 PRRSV变异株亲缘性最近。初步鉴定该分离株为高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒。     

猪繁殖与呼吸综合征疫苗研制的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征是一种引起母猪繁殖障碍和新生仔猪呼吸道症状及高死亡率的传染病,在全世界蔓延流行,2006年在中国又变异为高致病性猪繁殖与呼吸综合征并造成严重经济损失。自20世纪80年代末首次在美国发现该病至今已有20余年,该病尚未有特效的治疗药物,疫苗免疫是防控该病的重要措施之一,国内外学者高度重视其疫苗的研究,并取得了较大的进展。笔者着重阐述近些年来猪繁殖与呼吸综合征活疫苗、灭活疫苗及基因工程疫苗的研究进展。