东北林蛙皮肤抗菌肽基因在毕赤酵母中表达条件的优化

目的:确定毕赤酵母表达东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST基因的最佳诱导表达条件。方法:本研究将PCR合成的dybowskin-1ST基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建pPIC9K-dybowskin-1ST诱导型表达载体。表达载体经线性化后转化巴斯德毕赤酵母GS115,应用BMMY培养基诱导表达。采用单一变量法及正交试验法,对甲醇诱导的浓度、时间和温度进行了优化,通过SDS-PAGE电泳分析和体外抑菌试验检测目的肽表达丰度。结果:最佳诱导条件:甲醇终浓度为0.5%、诱导时间为72 h、诱导温度为28℃,在此条件下表达产物SDS-PAGE电泳条带灰度值为117,抑菌环直径为28.16mm,可为规模化的抗菌肽表达提供参考数据。     

家蚕抗菌肽基因研究进展

抗菌肽是昆虫先天性免疫系统中十分重要的效应因子,近年来一直是昆虫免疫学研究的热点。家蚕作为鳞翅目昆虫的代表,其抗菌肽研究取得了长足进展。根据已经研究获得的抗菌肽基因序列在家蚕基因组中进行同源搜寻,共获得了40个家蚕抗菌肽基因。这些基因编码的多肽在大小、氨基酸组成和性质上差异很大,但基于结构性质可以分成3类:(1)具有α-螺旋结构并且缺乏半胱氨酸(cysteine,Cys)的线性抗菌肽;(2)富含脯氨酸或甘氨酸的组成性抗菌肽;(3)富含半胱氨酸的环形抗菌肽。以这3类结构作为主线,综述了家蚕抗菌肽近年来的研究进展。     

抗菌肽酵母表达系统的研究进展

抗菌肽是生物体内一类具生物活性的小分子多肽,由于从天然资源中提取成本高,得率低且化学合成价格昂贵,利用基因工程技术生产抗菌肽具有重要意义.酵母表达系统具有表达量高,利于产物分离纯化等优点,利用酵母表达抗菌肽具有很好的前景.本文综述了毕赤酵母表达系统表达抗菌肽的最新进展.     

抗菌肽对肉鸭雏鸭期肠道主要微生物菌落的影响

按肉鸭每吨日粮3、2、1L的水平添加蚕抗菌肽-AD制剂,与添加金霉素及基础日粮的2个对照组进行对比,结果表明:抗菌肽对肉鸭盲肠大肠杆菌有显著抑制作用(P<0.05),金霉素没有显著抑制作用(P>0.05);抗菌肽与金霉素均对乳酸杆菌有显著抑制作用(P<0.05)。     

抗菌肽Abaecin的表达及生物活性的研究

在枯草芽孢杆菌中表达抗菌肽Abaecin,并鉴定表达产物的生物学活性,以判定其能否开发为口服药物和饲料添加剂。通过Western blot方法检测目的基因表达情况;采用琼脂扩散法检测表达产物的生物活性。结果表明:抗菌肽Abaecin在枯草芽孢杆菌中成功表达,并有效地分泌至细胞外。体外抑菌实验结果表明,表达产物Abaecin对革兰氏阴性菌有抑菌活性,并且在不同温度37～100℃、pH2～9和酶(胃蛋白酶、胰蛋白酶和蛋白酶K)的条件下,仍能保持抗菌活性,证实表达产物可以抵抗动物消化系统的降解。枯草芽孢杆菌简便快捷地表达了抗菌肽Abaecin,并且表达产物有开发为口服药物和饲料添加剂的前景。     

牛津杯法测定抗菌肽对四种有害微生物的抑制效果

试验采用牛津杯法测定抗菌肽对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)有害菌的抑菌效果。结果表明:抗菌肽对四种有害菌均有一定的抑菌效果,对金黄色葡萄球菌(3×1016CFU/ml)的抑菌效果最好,其次是副溶血弧菌(1.6×10~(14)CFU/ml)、溶藻弧菌(7.5×10~5CFU/ml),对嗜水气单胞菌(8.5×10~5CFU/ml)的抑菌效果最弱。抗菌肽对四种有害菌的最低抑菌质量浓度(MIC)分别是0.8、0.8、1.6、3.2 mg/ml。     

微生物对抗菌肽耐受性的研究进展

抗菌素耐药性的日趋严重,使有望作为其替代品的新型抗菌药物——抗菌肽受到越来越广泛的关注,研究人员在其分类、作用机制、生物活性、应用前景等方面进行了深入而又卓有成效的研究。但随着越来越多的对抗菌肽不敏感菌株的出现,微生物对抗菌肽的耐受性成了抗菌肽研究过程中不可忽视的环节。国内有关微生物对抗菌肽的耐受性报道较少,本文就近几年国內外的研究进展作一综述。     

抗菌肽的制备

<正>饲料添加剂是保障畜禽饲料安全的关键因子,也是影响猪肉品质和出口创汇的直接因素。开发动物内源性抗菌肽产品用于畜牧业,保障饲料安全性,提高猪肉品质,是国家重大科技专项"食品安全关键技术"的一个重要领域。随着现代畜禽饲养业集约化提高,病原传播和入侵及各种应激作用日益强化,使得肠道表达量有限的抗菌肽难以对畜禽自身的保健起很大作用。     

抗菌肽对断奶仔猪生长性能、养分消化率、肠道微生物含量及绒毛结构的影响

文章旨在研究日粮添加不同水平抗菌肽替代抗生素对断奶仔猪生长性能、养分消化率、肠道微生物含量及绒毛结构的影响。试验选择平均体重为(5.76±0.02)kg的21 d断奶的杜×长×大仔猪672头,根据个体大小随机分为4组,每组4个重复,每个重复42头。试验分为1～14 d和15～28 d两个阶段,对照组饲喂基础日粮+60 mg/kg盐霉素,抗菌肽组饲喂基础日粮+0、50或100 mg/kg抗菌肽。试验进行28 d。对照组较抗菌肽组显著提高了断奶仔猪28 d体重(P <0.05),1～14 d和1～28 d日增重(P <0.05),1～14 d、15～28 d、1～28 d采食量,显著降低了1～28 d料重比(P <0.05)。随着日粮抗菌肽添加水平的升高,28 d体重、1～14 d、15～28 d及1～28 d日增重显著升高(P <0.05)。对照组较抗菌肽组显著提高了断奶仔猪14和28 d干物质、14 d粗蛋白质表观消化系数(P <0.05)。对照组较抗菌肽组显著降低了14和28 d粪中大肠杆菌含量(P <0.05),且总厌氧菌、梭菌和大肠杆菌含量随抗菌肽添加水平的升高而显著降低(P <0.05);与抗菌肽组相比,对照组显著降低了回肠总厌氧菌含量(P <0.05)。饲喂对照组日粮的断奶仔猪较抗菌肽组显著降低了空肠隐窝深度(P <0.05),显著提高了空肠绒毛高度与隐窝深度的比值(P <0.05)。根据试验结果推断,日粮添加抗菌肽可以作为抗生素替代品,具有提高断奶仔猪生长性能、干物质和粗蛋白质的表观消化率、绒毛形态及降低粪中有害菌含量的作用。     

抗菌肽对鲤鱼生长性能的影响

试验选用3.2万尾体质量相近的健康鲤鱼,分为2个处理组,对照组为基础日粮,试验组在基础日粮中添加150 mg/kg的抗菌肽,试验期为42 d。试验结果表明:对照组和试验组的鲤鱼成活率分别为99.2%和99.5%;鲤鱼相对增重率分别为87.05%和100.96%;饵料系数分别为2.01和1.75。可见添加抗菌肽可以提高鲤鱼的生长性能。     

嗜驼璃眼蜱抗菌肽的电泳分析及抗菌活性研究

为探讨嗜驼璃眼蜱血淋巴中抗菌肽的电泳分析方法及其抗菌作用,从半饱血的嗜驼璃眼蜱雌蜱体内抽取血淋巴,用50mL／L的乙酸抽提,经AU—PAGE分析嗜驼璃眼蜱血淋巴中阳离子多肽成分,用电泳凝胶琼脂糖弥散法对各多肽进行抗菌活性的筛选。结果表明,嗜驼璃眼蜱血淋巴中阳离子多肽成分对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌均有很强的抗菌作用。AU—PAGE发现一电泳迁徙率明显高于溶菌酶的阳离子抗菌多肽。提示在嗜驼璃眼蜱的血淋巴中,存在与溶菌酶不同的抗菌多肽,可能是嗜驼璃眼蜱抵御感染的重要分子。AU—PAGE是一种较简单、快速、经济的分离纯化抗菌肽的方法。     

多黏类芽孢杆菌抗菌肽的分离纯化及特性研究

试验旨在分离纯化多黏类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）BLCC1-0402代谢产物中的抗菌肽,为抗菌肽制备及其制品检测提供参考。采用离心、不同分子质量卷式膜超滤浓缩、Superdex peptide 10/300GL凝胶过滤层析对多黏类芽孢杆菌发酵上清液进行逐级分离纯化,对不同时段的收集液做抑菌试验,以大肠杆菌O78标准菌株为指示菌,采用打孔法进行抑菌活性检测,比较评价分步层析效果,以Tricine-SDS-PAGE进行分子质量检测。结果显示,通过5和3 ku卷式膜超滤获得的3~5 ku组分蛋白质样品抗菌活性较强;对于3~5 ku组分经凝胶过滤层析分离纯化,纯化后的抗菌肽A3抑菌活性最强,经Tricine-SDS-PAGE小分子多肽电泳检测,已达到电泳纯,分子质量为4 ku;抑菌活性检测结果显示,该抗菌肽A3对大肠杆菌O78标准菌株具有较强的抑菌作用。同时,抗菌肽A3表现出较好的耐热性,90~100 ℃处理15 min,抑菌活性可保持在96%左右;具有较好的酸碱稳定性,在pH 2.0~9.0下,抑菌活性保持在90%以上;经胃蛋白酶作用后抗菌肽A3抑菌活性降低20%,胰蛋白酶作用后抗菌肽A3抑菌活性降低18%,蛋白酶K对抗菌肽A3的抑菌活性几乎无影响。本研究结果表明,分离得到的抗菌肽A3是一种对大肠杆菌O78具有抑菌活性的新型抗菌肽,具有一定的开发潜力,可为下一步抗菌肽的结构分析、理化特性分析等深入研究提供一定参考依据。     

日本鳗鲡脾脏抗菌肽抗菌活性检测方法的比较

本试验旨在建立一种在日本鳗鲡脾脏抗菌肽分离纯化过程中简便、灵敏的检测其抗菌活性的方法。试验以日本鳗鲡脾脏分子质量小于10 ku的蛋白质为抗菌肽样品,选择琼脂板孔穴扩散法和微孔液体培养法2种传统方法及微量液体培养法为检测方法,比较这3种方法在抗菌肽对3种鳗鲡常见致病菌株(迟钝爱德华菌、气单胞菌、嗜水气单胞菌)抗菌活性检测中的灵敏度和优缺点。结果表明:与琼脂板孔穴扩散法及微孔液体培养法相比,微量液体培养法简便、易于观察结果,具有最高的灵敏度且样品用量最少,适合在鳗鲡脾脏抗菌肽分离纯化过程中跟踪检测抗菌活性,尤其适合分离纯化后期获得微量单一样品抗菌活性的检测。由此得出,微量液体培养法适用于检测日本鳗鲡脾脏抗菌肽的抗菌活性。     

伴大豆球蛋白酶解肽抑菌活性研究

建立伴大豆球蛋白酶解产生抑菌肽的最适条件,对酶解产物进行分离纯化后进一步测定其抑菌活性。采用复合风味蛋白酶水解伴大豆球蛋白,测定不同时间的酶解液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活性。结果显示:2 h水解产生的酶解肽具有抑菌活性,其对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度分别是2.6和3.2 mg/mL。2 h水解液经Sephadex-G15分离纯化,采用平板计数法鉴定各组分。结果显示:CP2组分对大肠杆菌具有显著的抑制作用(P<0.05)。本研究证明伴大豆球蛋白的复合风味蛋白酶酶解肽具有一定的抑菌活性。     

蝇蛆抗菌肽的诱导及其抗菌性能研究

为了探究灭活沙门氏菌对蝇蛆抗菌肽的诱导效果,试验用灭活沙门氏菌和沙门氏菌培养蝇蛆,粗提蝇蛆抗菌肽,分时间点测定其浓度及抗菌性能,同时对蝇蛆体内细菌含量进行计数。结果显示,诱导组抗菌肽浓度均高于未诱导组(P<0.05),且在24 h时浓度最高;诱导组对沙门氏菌的抑菌圈直径显著大于未诱导组(P<0.05),显著小于抗生素组(P<0.05),最低抑菌浓度(MIC)值为0.5 mg/mL;蝇蛆体内细菌含量为1.6×10⁵ CFU/g,低于国家规定标准饲料中细菌总数最低值2×10⁶ CFU/g。提示,用灭活沙门氏菌诱导蝇蛆能提高抗菌肽的表达量,且具有较强的抗菌性能及安全性。     

发酵乳中生物活性肽的研究进展

发酵乳经乳酸菌发酵水解后含有丰富的多肽类物质,发酵乳源生物活性肽不仅具有丰富的营养价值,还具有抗氧化、降血压、抗菌等多种生物功能.本文综述发酵乳中多种功能生物活性肽,阐明乳酸菌蛋白酶导致的生物活性肽多样性,解析抗氧化肽、抗高血压肽、抗菌肽和其他功能活性肽的作用机制、多肽序列及构效关系,最后介绍了生物活性肽的序列鉴定与功...     

抗菌肽的作用机制与应用前景

各种感染性疾病日益严重地威胁着人类的健康,虽然新的抗生素不断被发现,但是随之而来的细菌耐药性也日益增强,新型抗感染药物的开发日趋显得重要。抗菌肽是在诱导条件下,由动植物产生的一类分子质量在4 ku左右的免疫多肽。它具有较小的分子质量,良好的耐热性和较小的抗原性,且具有广泛的抗菌活性。某些抗菌肽还具有抗病毒、抗真菌及抑制癌细胞生长的作用。因此,抗菌肽有望发展成为一种新型抗菌药和抗肿瘤药物,对人类健康将产生深远的影响。     

昆虫抗菌肽的抗菌效应及在畜牧生产中的应用前景

 昆虫抗菌肽是一类具有免疫效应的小分子多肽,它具有热稳定、抗菌谱广、无免疫原性、作用机制独特等特性,是昆虫能够抵御自然界中有害微生物侵染的重要因素。论文针对畜牧业生产,从昆虫抗菌肽分类、生物活性及作用机理等几个方面综述了昆虫抗菌肽的研究现状及其应用前景。     

抗菌肽的基因克隆表达及其在畜牧业中的应用前景

抗菌肽是具有抗菌活性的一类短肽,具有分子量低、热稳定、广谱的抗菌、抗病毒及抑制肿瘤的生物活性,是动物防御体系的一个重要组成部分,在机体抵抗病原的入侵方面起着重要的作用。本文主要综述了抗菌肽基因的克隆与表达的研究进展并展望了抗菌肽在畜牧业生产中的应用前景。     

抗菌肽和抗生素对断奶仔猪生长性能的影响

本试验旨在研究日粮中添加抗菌肽和抗生素对断奶仔猪生长性能的影响。选用144头平均体重为(7.32±0.45)kg的杜×长×大三元杂交断奶仔猪,采用4×2析因设计,研究了日粮中添加4个抗菌肽水平(0、1、3、5 g/kg)和2个抗生素(恩拉霉素+抗敌素)水平(0、20 mg/kg + 20 mg/kg)对断奶仔猪生长性能的影响。试验设8个处理组,每组3个重复,每个重复6头猪。试验期为28 d,分为前期(1~14 d)和后期(15~28 d)2个阶段。试验结果表明,抗菌肽和抗生素显著影响断奶仔猪的前期、后期和全期的平均日增重和腹泻率(P<0.05);其中联合添加3 g/kg抗菌肽和20 mg/kg恩拉霉素、20 mg/kg抗敌素,显著提高了断奶仔猪的平均日增重,降低了料重比和腹泻率(P<0.05)。由此可知,抗菌肽和抗生素可一定程度上改善断奶仔猪生长性能,且两者有互作效应。