猪细小病毒基因组结构及检测技术研究进展

猪细小病毒是引起母猪繁殖障碍性疾病的主要病原体之一,对猪细小病毒的基因组、转录、编码的结构蛋白和非结构蛋白、转录的调控及血清学诊断、分子生物学检测技术方面的研究进展予以综述,以期对其进一步研究有参考价值。     

猪细小病毒结构蛋白VP2及其疫苗的研究进展

猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)是引起母猪繁殖障碍性疾病的主要病原之一,该病毒在世界范围内广泛存在并呈地方性流行, 给生猪的繁殖、发展带来了巨大的经济损失,故防制猪细小病毒病非常重要。PPV VP2蛋白是病毒粒子的主要衣壳蛋白,在体外能自我装配成病毒样颗粒,并能刺激机体产生抗PPV中和抗体,且可作为抗原转运载体,所以研究VP2对PPV新型疫苗研制至关重要。文章综述了猪细小病毒结构蛋白VP2及其疫苗的研究进展。     

鹅细小病毒分子生物学研究进展

本文根据国内外鹅细小病毒的研究结果，对国小病毒在分类学地位，基因组结构，基因组的转录和调节，基因编码蛋白，与番鸭细小病毒的关系等方面进行综述，为鹅细小病毒的进一步研究提供参考。     

芹菜素与犬细小病毒衣壳蛋白相互作用研究

通过荧光光谱分析，研究了芹菜素与犬细小病毒衣壳蛋白之间的相互作用研究结果表明，芹菜素对犬细小病毒衣壳蛋白的荧光强度具有明显的猝灭作用获取了在293K、298K和303K下的猝灭常数，证明了二者之间的作用类型为静态猝灭机制，且二者的结合位点数为1.通过求得热力学参数，证实了二者之间的作用力形式为疏水作用由荧光响应能量转移技术求得二者之间的结合距离，并运用同步荧光光谱分析和紫外吸收光谱分析探讨了芹菜素对犬细小病毒衣壳蛋白构象的影响。     

细小病毒非结构蛋白NS1作用机制的研究进展

细小病毒编码的非结构蛋白NS1(non-structural protein 1)是一种多功能蛋白,该蛋白质与病毒DNA的复制、基因转录调控、诱导细胞病理变化等密切相关。本文对细小病毒NS1蛋白的基因转录激活功能、磷酸化修饰以及与胞内蛋白的相互作用等研究进展进行综述,为研究家蚕双义病毒(BmBDV)的NS1蛋白作用机制提供参考。     

鹅细小病毒非结构蛋白和结构蛋白B细胞线性抗原表位的鉴定

鹅细小病毒是小鹅瘟的病原体,其基因组含有2个主要开放阅读框（ORF）,分别编码非结构蛋白（NS）和结构蛋白（VP）。为了对这2种蛋白进行抗原表位作图,设计了34个覆盖非结构蛋白NS和结构蛋白VP的50-60个氨基酸残基的重叠短肽,并进行了融合表达。用攻毒10周龄鹅血清对这34个融合蛋白进行蛋白质印迹分析,结果鉴定出NS蛋白线性抗原表位位于C末端的453-627氨基酸区域;VP蛋白线性抗原表位位于35—198、423—491、531—595、616—669和678—732氨基酸区域。     

番鸭细小病毒非结构蛋白B细胞线性抗原表位的鉴定

为了分析番鸭细小病毒(muscovy duck parvovirus,MDPV)YL08株NS1蛋白(氨基酸序列全长627 aa)抗原表位,本研究设计了一套覆盖整个NS1蛋白的短肽,短肽长为30个氨基酸左右,有10个氨基酸重叠。为了表达这些短肽,共设计合成了31对互补的寡核苷酸片段。每对寡核苷酸片段5'端磷酸化。上述寡核苷酸片段退火后,插入至原核表达载体p ET-32a(+)中,经IPTG诱导获得了相应重组蛋白的表达。利用切胶纯化的方法对表达蛋白进行了纯化。应用MDPV YL08株人工感染番鸭血清对表达的31个重组蛋白的抗原性进行了检测,Western blot结果表明,表达的7个融合蛋白NS(481-510)、NS(501-530)、NS(521-550)、NS(541-570)、NS(561-590)、NS(581-610)和NS(601-627)能被MDPV感染血清所识别,而其他融合蛋白不能被MDPV感染血清所识别。同时,上述7个表达的融合蛋白不与灭活MDPV免疫番鸭血清反应。综合上述试验结果,MDPV YL08株NS1蛋白的B细胞线性抗原表位区位于NS1蛋白的羧基末端481 aa~627 aa。Dot-ELISA试验表明,重组蛋白NS(501-530)的抗原性相对更强。本研究为建立基于抗原表位的MDPV自然感染和人工免疫番鸭的鉴别诊断方法提供了理论依据。     

细小病毒衣壳蛋白功能研究进展

细小病毒是目前为止发现的最小的单股DNA病毒,在自然界分布极广并与多种疾病相关。该病毒衣壳中主要包含三种蛋白:VP1、VP2、VP3,这些衣壳蛋白参与了病毒感染的整个过程。VP1通过核定位信号(NLS)介导病毒感染性,协助病毒完成核内定位。VP2经"反受体"与细胞受体相互作用促进病毒进一步内化,与此同时VP1与VP2 N’末端共同作用完成核转运。裂解蛋白VP3仅存在于细小病毒科少数成员中,其功能未被完全确定,猜测可能是衣壳蛋白骨架。该病毒对外界理化因素有极强的抵抗力,如酸或热处理,甚至能逃避模式识别受体(PRRS)识别。通过对细小病毒感染过程中衣壳蛋白的作用及其在疾病治疗中的应用进行系统的总结及讨论,以期为相关科研工作者提供参考。     

水貂细小病毒NS1与VP2蛋白的原核表达及免疫原性分析

为了比较VP2和NS1两种蛋白的免疫原性,选择免疫原性较好的蛋白进行亚单位疫苗制备。本试验分别扩增了水貂细小病毒(mink enteritis virus,MEV)NS1与VP2基因,连接pET-32a表达载体并进行表达,对表达产物进行SDS-PAGE及Western blotting分析。以His-Bind亲和层析柱纯化目的蛋白,将纯化后的蛋白免疫小鼠,分析目的蛋白的免疫原性。经SDS-PAGE与Western blotting鉴定,表明NS1与VP2蛋白大小分别为83 和67 ku,且均具有生物学活性;免疫小鼠后,目的蛋白NS1和VP2均可诱导小鼠产生抗MEV特异性抗体,且VP2蛋白诱导小鼠产生的抗体滴度要高于NS1蛋白。与NS1蛋白比较,VP2蛋白更适合亚单位疫苗的制备。     

7株鹅细小病毒的克隆序列分析与分子特性

参照GenBank中收录的鹅细小病毒(GPV)B株基因序列设计并合成了扩增GPV分离株的3对引物,利用PCR技术扩增7株小鹅瘟病毒的非结构蛋白基因和结构蛋白基因.然后将其克隆到pMD18-T载体上,筛选重组质粒并进行了序列测定及分析,测序结果表明,GPV分离株非结构蛋白基因由1 884个核苷酸组成,编码627个氨基酸;结构蛋白由2 199个核苷酸组成,编码732个氨基酸.拼接非结构蛋白和结构蛋白的全序列,不同毒株的同源性分别为94.3%~99.2%和92.6%~98.5%.表明目前国内的鹅细小病毒的同源性比较高,但是强弱毒株也存在一定的差别.