动物双歧杆菌耐氧航天诱变菌株MN-Gup的筛选

耐氧性能不足是双歧杆菌在酸奶产品中添加应用的一个重要问题。本试验对搭载神舟十一号返回式飞船的动物双歧杆菌菌株进行分离纯化并得到10株突变株。以耐氧系数为评价指标对菌株进行筛选,对野生株BB-11与突变株的遗传稳定性、生长曲线、不同氧浓度条件(氧气浓度为0、5%、10%、15%、21%)下菌株的活菌数等指标进行测定,并对菌株的菌落形态及微观形态进行观察。结果表明,10株突变株中有5株耐氧系数显著高于野生菌株(P0.05),其中有一株突变株耐氧MN-Gup遗传稳定且耐氧系数显著高于野生菌株;耐氧突变株的生长趋势与野生株相似,但是高于野生株。在5%氧气浓度下,耐氧突变株OD600达到1.110±0.02,活菌数最高达到8.46±0.13(log cfu/m L),均高于野生株;形态学观察发现突变株与野生株在表观形态上没有差异。动物双歧杆菌BB-11经过航天诱变后耐氧性能发生改变,突变株动物双歧杆菌MNGup耐氧性能良好且遗传稳定。对BB-11和MN-Gup在p H 2.5(盐酸调节p H)和0.3%的胆盐浓度下进行活菌数检测,结果表明两株菌均具有良好的胃酸和胆盐耐受性,并且两株菌之间无显著差异(P0.05);B1为坚强肠球菌,B2为海氏肠球菌,B3和B4均为屎肠球菌。本研究为防治犊牛腹泻提供了更多的候选菌种。     

大熊猫源双歧杆菌分离株的培养特性及药敏试验

双歧杆菌的培养特性和药敏试验是研究双歧杆菌微生态制剂的基础。从大熊猫新鲜粪便中分离的两株双歧杆菌进行细菌培养、药敏试验及耐温驯化等研究发现,改良肉汤培养基是双歧杆菌大熊猫分离株体外增殖理想的培养基;2个双歧杆菌大熊猫分离株均对红霉素、氯霉素等敏感,对青霉素等产生较高的耐药性;在较高温度下双歧杆菌大熊猫分离株能迅速地增殖,代谢能力大为提高,并与其他乳酸菌协同发酵,抑制致病菌的生长。双歧杆菌大熊猫分离株在体外生长良好,不是广谱的耐药菌株。     

一株嗜酸乳杆菌的分离鉴定及其生物学特性研究

为丰富猪源微生态制剂菌种,研究从健康猪肠道内容物中分离获得5株疑似乳杆菌菌株,通过生理生化和分子生物学鉴定方法,综合确定其中一株菌为嗜酸乳杆菌,命名为HEW-A701;对其耐酸性能、耐胆盐性能和对致病菌颉颃性能进行研究,表明菌株HEW-A701具有较强的耐酸性、耐胆盐性及对大肠杆菌、沙门菌和金黄色葡萄球菌有较强的颉颃性。     

纳豆芽孢杆菌的分离培养与鉴定

根据纳豆芽孢杆菌耐盐、耐温、耐pH的能力及C/H值大小,从豆豉中分离出几株淀粉水解能力较强的菌株,通过初筛、复筛选出一株最优菌株,通过革兰氏染色、细胞形态、菌落形态观察和生理生化反应及大豆发酵试验,确定该菌株为枯草芽孢杆菌的一个变种,即纳豆芽孢杆菌     

一株嗜酸乳杆菌的抑菌效果及相关特性分析

为研究一株嗜酸乳杆菌(编号为HLA)的基本特性,从而为该菌株的生产应用提供理论依据,通过药敏试验、耐酸耐胆盐试验以及抑菌试验,研究了HLA菌株对抗生素、胃酸和胆盐的耐受能力以及对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和副溶血弧菌的抑菌效果和抑菌机理。结果表明:嗜酸乳杆菌HLA具有较高的耐酸、耐胆盐能力,能够产生有机酸抑制副溶血弧菌的生长,产生蛋白类物质抑制沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的生长,在畜禽微生态制剂产品开发方面具有应用潜力。     

几种商用益生芽孢杆菌特性的比较研究

为比较几种商用益生芽孢的菌株特性,为芽孢杆菌的选育提供理论基础,本试验收集整理了15种药用(Y1~Y6)和饲用益生芽孢杆菌(S7~S15)产品,对其芽孢杆菌进行分离鉴定,分别从产淀粉酶、纤维素酶和蛋白酶等酶活特性,抗菌活性,耐酸和耐0.3%胆盐稳定性,抗生素敏感性,耗氧及生长速率测试等方面对芽孢杆菌特性进行了比较研究。结果显示,分离的15株芽孢杆菌均能产蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶,但不同菌株产酶能力差异较大,S9菌株表现出较高的产蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶活力;所有分离的芽孢杆菌均能对金黄色葡萄球菌及藤黄微球菌产生显著抑制活性,但只有7株芽孢杆菌(Y2、Y6、S7、S9、S10、S11、S12)可对大肠杆菌产生抑制作用,尤其是S9菌株综合抗菌能力最强。S9、Y2和S8的营养体细胞具有较高的耐酸能力,S9、Y2菌株在0.3%胆盐环境中存活率超过90%。15株芽孢杆菌中有3株饲用来源菌株(S10、S12、S13)表现出对红霉素的耐受,S10菌株对四环素耐受。此外,S9菌株具有较快的耗氧速率和生长速率。上述结果表明,S9菌株(解淀粉芽孢杆菌)的益生特性更为优良,本试验结果可为芽孢杆菌益生菌的选育及活性评价提供参考依据。     

牛源抗氧化芽孢杆菌的分离鉴定及生物特性研究

【目的】从奶牛瘤胃中分离具有抗氧化能力且耐受性好的芽孢杆菌,为牛源益生菌作为抗氧化添加剂使用提供理论依据及参考。【方法】采集3头成年荷斯坦奶牛瘤胃内容物,通过细菌分离纯化、形态观察、生化检测及16S rDNA分子检测进行鉴定,同时检测筛选菌株的超氧自由基和羟自由基清除率、耐酸、耐胆盐能力及对抗生素的耐药性。【结果】从奶牛瘤胃液中共获得了12株菌,通过特异性培养基与革兰氏染色共筛选出5株芽孢杆菌(X-1～X-5)。对5株芽孢杆菌进行分子鉴定,确定X-1为热噬淀粉芽孢杆菌,X-2为短小芽孢杆菌,X-3为解蛋白芽孢杆菌,X-4为枯草芽孢杆菌,X-5为沙福芽孢杆菌。抗氧化能力检测结果显示,5株菌均具有一定的抗氧化能力,X-5菌株抗氧化能力最高,超氧自由基和羟自由基清除率分别达到73.81%和73.54%。当pH为2.5时,5株芽孢杆菌存活率均在25%以上;胆盐浓度为0.6%时,5株芽孢杆菌存活率均在60%以上,说明菌株具有良好的耐受性。药敏试验结果显示,试验分离出来的大多数菌株对氧氟沙星、呋喃妥因、红霉素等高度敏感;对头孢呋辛、头孢噻肟、链霉素等耐受;对卡那霉素、环丙沙星、氨苄西林等中度敏感。...     

胆盐水解酶筛选及酶法提制鸡胆汁酸的研究

试验旨在从常见双歧杆菌筛选获得高活性胆盐水解酶的菌株并用于鸡胆汁酸的提制。从5种常见双歧杆菌菌株(两歧双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、青春双歧杆菌、乳双歧杆菌、长双歧杆菌)中，通过平板Ca²⁺沉淀法及茚三酮法对活性双歧杆菌进行酶活评价，将高活性菌株的粗酶用于鸡胆汁酸的提制，使用薄层色谱法和高效液相法对所制胆汁酸进行定性和定量检测。结果显示：4种双歧杆菌(两歧双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、青春双歧杆菌和乳双歧杆菌)对甘氨型和牛磺型鹅去氧胆酸均具有水解活性，婴儿双歧杆菌对甘氨鹅去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸比酶活均显著高于其他3种双歧杆菌(P<0.05)，比酶活分别为0.48 U/mg和0.27 U/mg。酶法工艺提制鸡胆汁酸的得率为5.34%，提取物中鹅去氧胆酸(CDCA)含量为70.7%。结果表明：婴儿双歧杆菌具有高活性胆盐水解酶，酶法工艺提制鸡胆汁酸反应条件温和，提取物纯度较高，较为节能环保。     

几种商用益生芽孢杆菌特性的比较研究

为比较几种商用益生芽孢的菌株特性，为芽孢杆菌的选育提供理论基础，本试验收集整理了15种药用（Y1~Y6）和饲用益生芽孢杆菌（S7~S15）产品，对其芽孢杆菌进行分离鉴定，分别从产淀粉酶、纤维素酶和蛋白酶等酶活特性，抗菌活性，耐酸和耐0.3%胆盐稳定性，抗生素敏感性，耗氧及生长速率测试等方面对芽孢杆菌特性进行了比较研究。结果显示，分离的15株芽孢杆菌均能产蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶，但不同菌株产酶能力差异较大，S9菌株表现出较高的产蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶活力；所有分离的芽孢杆菌均能对金黄色葡萄球菌及藤黄微球菌产生显著抑制活性，但只有7株芽孢杆菌（Y2、Y6、S7、S9、S10、S11、S12）可对大肠杆菌产生抑制作用，尤其是S9菌株综合抗菌能力最强。S9、Y2和S8的营养体细胞具有较高的耐酸能力，S9、Y2菌株在0.3%胆盐环境中存活率超过90%。15株芽孢杆菌中有3株饲用来源菌株（S10、S12、S13）表现出对红霉素的耐受，S10菌株对四环素耐受。此外，S9菌株具有较快的耗氧速率和生长速率。上述结果表明，S9菌株（解淀粉芽孢杆菌）的益生特性更为优良，本试验结果可为芽孢杆菌益生菌的选育及活性评价提供参考依据。     

5株凝结芽孢杆菌的鉴定及抗逆性分析

通过细菌形态学、生理生化特征分析,5株鉴定均为凝结芽孢杆菌。以总菌数、抑菌性、热稳定性、耐人工胃肠液、耐胆盐能力等为评价指标,比较5个凝结芽孢杆菌产品的抗逆性。结果表明,5株凝结芽孢杆菌经65℃处理30 min后,存活率均超过100%;A株抑菌性最好,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌率分别可达99.85%和101.4%,显著高于D株(P0.01)和E株(P0.01)。经过人工胃液和人工肠液处理后,菌株A和B在模拟胃液(pH 2.0)存活率较高,均在80%以上,同时这A株菌完全耐受模拟肠液(pH 7.6);A株和B株耐受胆盐浓度可达1%,其他三株的耐受胆盐浓度可达0.3%。A株较其他株凝结芽孢杆菌具有较好的益生特性,在饲料生产上具有重要的应用价值。     

乳双歧杆菌U9冷冻保护剂的优化研究

乳双歧杆菌U9是一株具有优良益生功能的乳杆菌。为了保证U9菌株活性,为工业化益生菌制剂生产提供稳定菌种,利用液氮深冷方式对U9菌株进行冷冻保藏。以冷冻存活率为评价指标,对冷冻保护剂种类进行筛选,并对保护剂配方进行正交试验优化。结果表明,甘油、海藻糖、脱脂乳粉及维生素C 4种保护剂能对乳双歧杆菌U9起到良好的保护作用;正交试验优化确定的保护剂配方为甘油2%、海藻糖7.5%、脱脂乳粉7.5%、维生素C 0.1%,菌体冷冻后存活率达到94%。     

鸡源耐镉乳酸菌株的分离与鉴定

本试验旨在从鸡肠道中分离筛选出耐镉(Cd)的乳酸菌,为将其开发应用于防控家禽饲料重金属Cd污染提供理论基础。取鸡肠道内容物的样品进行乳酸菌分离,以耐受100 mg/L的Cd为标准筛选乳酸菌,采用分子生物学方法鉴定菌株。对筛选出的乳酸菌株进行生长性能、耐Cd性能及Cd吸附性能等测定。结果表明：本试验共筛选出5株耐Cd乳酸菌,分别为1株约氏乳杆菌Cd3-1和4株卷曲乳杆菌Cd1-1、Cd5-2、Cd4-5和Cd8-2。其中Cd3-1、Cd5-2和Cd8-2菌株最高可耐受1 000 mg/L的Cd,而Cd1-1和Cd4-5菌株最高可耐受400 mg/L的Cd。各菌株对50 mg/L Cd的吸附率随溶液pH的升高而增加,在pH为6.0和7.0时Cd的吸附率均显著高于pH为2.6时Cd的吸附率(P<0.05)。5株乳酸菌均可耐受0.3%的胆盐,且可抑制金黄色葡萄球菌的生长。综合上述结果,本试验从鸡肠道中分离筛选鉴定出5株耐Cd乳酸菌,包括1株约氏乳杆菌和4株卷曲乳杆菌,在pH接近中性的条件下,对Cd的吸附率可达30%。     

猪源粪肠球菌的分离、鉴定及应用

通过培养特征、形态观察、生理生化鉴定、16SrDNA序列分析和种特异性片段扩增等方法,从健康猪直肠内容物中分离到3株粪肠球菌,其中菌株NA14对常见病原微生物具有较强的拮抗能力;进一步研究表明该菌株具有较强的耐受人工胃液和耐胆汁的能力,能够耐受60℃、30min;动物试验表明饲料中添加该粪肠球菌能够降低仔猪腹泻,改善仔猪生产性能,增强猪瘟疫苗的免疫效果;因此该菌株作为动物益生菌具有好的应用前景。     

HPLC和SOS显色反应检测不同微生物脱除4-NQO基因毒性能力

应用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)和SOS显色反应测定36株益生菌脱除4-硝基喹啉-1-氧化物(4-NQO)基因毒性的能力,同时用HPLC对它们的图谱进行比较分析。研究发现,基因毒性清除率高的菌株有1株植物乳杆菌、5株双歧杆菌、干酪乳杆菌代田株、3株芽孢杆菌、2株酵母菌、7株唾液乳杆菌和一株保加利亚乳杆菌。同属于一个菌属的各个菌株基因毒性清除率之间差异不显著。图谱分析发现,只有唾液乳杆菌才产生P1,即益生菌脱除4-NQO基因毒性具有菌株特异性。研究还发现益生菌转化4-NQO为4-HAQO的能力是决定益生菌脱除4-NQO基因毒性能力大小的关键。     

蜜蜂消化道内含物乳酸菌群落组成的分析

从健康意大利蜜蜂肠道内经分离、纯化、培养,获得3株乳酸菌,对3株菌株进行菌落形态、革兰氏染色、生理生化特征研究,确定了3株乳酸菌中2株为乳杆菌;1株为双歧杆菌。     

弯曲杆菌中具有高抑菌活性乳酸菌的筛选

使用微生态制剂来替代抗生素用于动物疫病防制是未来的发展趋势,而乳酸菌是目前微生态制剂最主要的成分。试验旨在筛选弯曲杆菌中具有高抑菌活性并耐受动物胃肠道环境的乳酸菌。从广东不同地区采集家禽粪便样品,对分离的乳酸菌进行生化鉴定、PCR鉴定及16S rDNA测序。同时,对分离菌株进行鸡源空肠弯曲杆菌、鸭源空肠弯曲杆菌和鹅源结肠弯曲杆菌的抑菌试验,以及模拟胃肠道环境的耐酸、耐胆盐和耐胰蛋白酶试验。结果表明,唾液乳杆菌R3对不同禽源的弯曲杆菌都具有高抑菌活性和耐受能力。因此,唾液乳杆菌R3为开发防控家禽弯曲杆菌疾病的微生态制剂提供了候选株。     

主动外排系统介导的乳中双歧杆菌耐药性的确证

了解双歧杆菌对环丙沙星的耐药关系,确证其耐药机制——外排系统的存在。对双歧杆菌标准菌株和从酸奶中分离的4株双歧杆菌菌株进行环丙沙星的耐药性试验,从中筛选出耐药菌株,再用质子泵抑制剂2,4-二硝基酚结合荧光分光光度法检测了耐药菌株和标准菌株对环丙沙星的摄取情况。通过对比2,4-二硝基酚存在与否菌体对环丙沙星的摄取量变化,从而确证了双歧杆菌外排系统的存在。实验表明：双歧杆菌有外排系统作用介导的对环丙沙星耐药的机制。     

猪源枯草芽孢杆菌的分离鉴定及其生物特性研究

为研究和开发动物新型微生态制剂,改变抗生素滥用、药物残留等现状。通过热处理从健康猪肠道内容物、粪便、土壤中分离芽孢杆菌,结合形态特征、生理生化特性及16S rRNA序列分析进行鉴定;对菌株耐胆盐性、酸性耐受性及产酶情况等特性进行研究。结果表明,分离到11株芽孢杆菌,经细菌形态学、生理生化特征和16S rRNA序列分析的结果显示,3株为枯草芽孢杆菌;特性研究结果证实菌株SR-096具有较好的耐胆盐性、酸性耐受性和产脂肪酶、淀粉酶、蛋白酶和纤维素酶的能力。说明枯草芽孢杆菌SR-096具有较强的抗逆性和潜在的益生性能,为研制微生态制剂提供了优良的菌种参考。     

鸡粪堆肥脱氨氮菌株的分离筛选与鉴定

为筛选具有较好脱除鸡粪堆肥所产生氨气效果的菌株,采集鸡粪及鸡粪堆肥样品,将样品驯化后通过富集、分离、纯化获得一定数量的氨氮降解菌,检测不同菌株的氨氮降解率,筛选降解氨氮能力强的菌株进行鉴定及复配试用于鸡粪堆肥。研究最终获得三株具有较强氨氮降解能力的细菌,包括两株嗜温菌株和一株嗜热菌株,通过形态学观察和16 S rDNA序列同源性分析,确定3个菌株分别为成团泛菌、努比卤地无氧芽孢杆菌和产气肠杆菌,三株细菌72h降解氨氮的能力分别为46.1%、32.2%和44.7%。由三株细菌复配制备的复合菌剂能够降低鸡粪堆肥氨气释放量。获得的菌株不但可用于堆肥过程氨气的脱除,也可以应用于除臭滤塔、除臭室,具有潜在的应用价值。     

一株布氏乳杆菌的分离鉴定

研究从发酵秸秆中分离获得1株抑菌性能较强的乳酸菌(BS6),并通过形态学、生理生化和分子鉴定对该菌株进行鉴定,最终确定菌株BS6为布氏乳杆菌,并对布氏乳杆菌BS6的生长曲线、产酸曲线及耐酸性能进行研究,结果表明,菌株BS6生长速率快、产酸性能强且能够耐受pH环境,为青贮饲料接种剂提供有力的理论依据。