免疫过氧化物酶法快速检测牛病毒性腹泻—粘膜病病毒抗原

用间接免疫过氧化物酶法（ＩＩＰ），对非细胞致病性牛病毒性腹泻－粘膜病（ＢＶＤ－ＭＤ）病毒持续感染的４２头牛血清经牛胎儿肌细胞培养检出了ＢＶＤ－ＭＤ病毒抗原，１００头外观健康牛的血清，经牛胎儿肌细胞培养未检出ＢＶＤ－ＭＤ病毒抗原，该结果与用干扰法获得的结果一致。而且用ＩＩＰ在血沉标黄层涂片中也检出了ＢＶＤ－ＭＤ病毒抗原，用亲和系－生物素过氧化物酶复合物方法在福尔马林固定的组织切片中也检出了ＢＶＤ－Ｍ     

牦牛病毒性腹泻／粘膜病防制中间试验

从１９９１￣１９９３年，应用牛病毒性腹泻／粘膜病（ＢＶＤ／ＭＤ）Ｏ系弱毒冻干苗６０万头份对我省青南地区玉树、称多、泽库三个ＢＶＤ／ＭＤ发病严重的县进行了大面积的预防注射，调者被注射牛７６７９７头；同时在该地区应用猪瘟弱毒苗预防注射牛２０万头份，调查被注射牛４８０００头。试验结果：应用ＢＶＤ／ＭＤ Ｏ系弱毒冻干苗使牦牛ＢＶＤ／ＭＤ死亡率由６．６１％降至０．２４％，应用猪瘟弱毒苗亦对该病有较好的防制效     

用琼脂扩散试验检测牛血清BVD／MD抗体

用琼脂扩散试验检测牛血清ＢＶＤ／ＭＤ抗体陈茂盛，寇改霞（西安动植物检疫局，陕西７１００６８）牛病毒性腹泻一粘膜病（ＢＶＤ／ＭＤ）是世界各养牛发达国家中危害养牛业的主要传染病。利用中和试验检测血清抗体是进行牛群ＢＶＤ／ＭＤ流行病学调查的公认手段。琼脂扩...     

牛病毒性腹泻病毒现地分离株与疫苗株的抗原差异

用单克隆抗体（ＭＡｂ）作酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、免疫荧光试验（ＩＦＡ）、病毒中和（ＶＮ）试验及兔疫沉淀试验证明了牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）致细胞病变株８７－２５５２（现地分离）与ＮＡＤＬ和Ｓｉｎｇｅｒ（原型株）之间的抗原差异。两个抗ＢＶＤＶ８７－２５５２株的ＭＡｂ（Ｄ１１和Ｂ７）能强烈中和现地分离株，并对该病毒的４８－ＫＤａ糖蛋白呈特异性。这两个ＭＡｂ有不同的亚型，Ｄ１１为免疫球蛋白Ｇ１     

安徽、江苏、广西部分地区水牛牛病毒性腹泻/粘膜病血清学监测

用微量细胞中和试验,对安徽、江苏和广西的１２个县部分水牛群血清样品（ｎ＝３４３）牛病毒性腹泻／粘膜病（ＢＶＤ／ＭＤ）中和抗体进行检测。结果从１０个县的血清中检出了ＢＶＤ／ＭＤ抗体,其中安徽水牛血清（ｎ＝１５０）ＢＶＤ／ＭＤ抗体平均阳性检出率为２４．２％（范围１０％～４６．７％）,江苏（ｎ＝１４３）ＢＶＤ／ＭＤ平均阳性检出率为８．４％（０％～１１．１％）,广西（ｎ＝５０）ＢＶＤ／ＭＤ平均阳性检出率为１０．０％（０％～１５．４％）。本调查说明我国水牛群中ＢＶＤ／ＭＤ流行在扩大。     

鹿感染牛病毒性腹泻－粘膜病病毒的调查

应用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ对吉林省某地区育成梅花鹿、育成马鹿及马鹿感染牛病毒性腹泻－粘膜病病毒（ＢＶＤ－ＭＤＶ）进行了调查．结果育成梅花鹿的带毒率为３４．１％（２８／８２）；育成马鹿的带毒率为１９，６％（１８／９２）；马鹿带毒率为４４．４％（８／１８）。应用电子显微镜对部分ＥＬＩＳＡ阳性及阴性样品进行负染观察、结果ＥＬＩＳＡ阳性样品中均见有ＢＶＤ－ＭＤＶ粒子．ＥＬＩＳＡ阴性样品中均未观察到ＳＶＤ－ＭＤＶ粒子．本试验结果表明，鹿也可感染ＢＶＤ－ＭＤＶ，其在流行病学中的意义有待于进一步研究。     

马立克氏病病毒糖蛋白B基因克隆及其在家蚕细胞中的表达

将马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＧＡ株基因文库中的ＢａｍＨＩＩ３和Ｋ３克隆质粒分别用双酶切消化，获得２．８ｋｂ的ＢａｍＨＩ－ＳａｌⅠ片段和１．１ｋｂ的ＢａｍＨＩ－ＥｃｏＲＩ片段，然后将这２个片段定向克隆于载体ｐＵＲ２２２中，构建了含ＭＤＶ糖蛋白Ｂ（ｇＢ）基因的重组质粒。为了基因操作方便和高效表达，设计了１对带有酶切位点的引物，用ＰＣＲ扩增了ＭＤＶｇＢ基因部分片段，并按正确方向插入去磷酸化的载体质粒中，得到起始密码子前带有ＥｃｏＲＩ酶切位点的ＭＤＶｇＢ基因克隆，再将该基因插入去磷酸化的家蚕核型多角体病毒（ＢｍＮＰＶ）转移载体ｐＢＦ１４中，ＤＮＡ序列分析确证了克隆基因及阅读柜架的正确性。以重组转移载体与野生型ＢｍＮＰＶ共转染家蚕细胞，用有限稀释法点杂交结合空斑技术纯化重组病毒。用荧光抗体试验检查重组病毒感染的家蚕细胞，可见感染细胞的胞浆及胞膜出现强荧光反应     

多价荧光抗体监测外源病毒污染的研究

用猪瘟病毒（ＨＣＶ）、猪细小病毒（ＰＰＶ），牛病毒性腹泻／粘膜病病毒（ＢＶＤ／ＭＤＶ），伪狂犬病病毒（ＰｒＶ），兰舌病病毒（ＢｔＶ），羊口疮病毒（ＯＶ）等六种病毒，多次同时或先后强化免疫猪，制取六价高免血清；用狂犬病病毒（ＲＶ）免疫兔，制取ＲＶ单价高免血清，分别用异硫氰酸荧光素（ＦＩＴＣ）标记制成荧光抗体（ＦＡ），并按二者最佳染色价配制成七价（多价）ＦＡ。由于各病毒在其宿主细胞中复制部位和与宿主细     

牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体：野外分离株和猪瘟病毒株…

用牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）单克隆抗体检查了大量北美ＢＶＤＶ分离株和血清学相关的瘟病毒属中的猪瘟病毒（ＨＣＶ）。结果，没有一种ＢＶＤＶ单克隆抗体能与所有ＢＶＤＶ分离株发生反应，交叉反应性最强的单克隆抗体为抗Ｐ８０／Ｐ１２５抗体，这种抗体与１７５／１８０株北美分离株发生阳性反应（９６％）、抗ｇｐ５３单克隆抗体与少数分离株的交叉反应性也较高（９４％）。７株单克隆抗体中至少有１株能与所有ＢＶＤＶ分离株     

双抗体夹心ELISA检测牛病毒性腹泻病毒的研究

建立了从粪便中检测牛病毒性腹泻（ＢＶＤ）病毒抗原的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ。试验方法的最佳工作条件为，抗体包被量为１００μｇ／孔，酶标抗体的浓度为１：４００。对不同地区牛、羊、鹿粪样检测结果，牛的ＢＶＤＶ感染率为１６．５％￣８９．０％，羊为１４．６％￣８３．３％，鹿为１９．６％￣４４．４％，并且从许多地区的牛、羊同时检测到ＢＶＤＶ，表明本病在国内某些地区存在着严重的感染。     

牛病毒性腹泻/粘膜病的研究进展

牛病毒性腹泻／粘膜病（Ｂｏｖｉｎｅｖｉｒａｌ　ｄｉａｒｒｈｅａ／ｍｕｃｏｓａｌ　ｄｉｓｅａｓｅ，ＢＶＤ／ＭＤ），简称牛病毒性腹泻（ＢＶＤ）或牛粘膜病（ＢＭ），是由牛病毒性腹泻／粘膜病病毒（ＢＶＤ／ＭＤＶ）感染牛引起的以发热、粘膜糜烂溃疡、白血胞减少、腹泻、咳嗽及怀孕母牛流产或产出畸形胎儿为主要特征的一种传染病。１９４６年Ｏｌａｆｓｏｎ等首次报道病毒性腹泻病。１９５３年Ｒａｍｓｅｙ和Ｃｈｉｖｅｒ发现粘膜病。１９６１年Ｇｉｌｌｅｓｐｉｅ等研究证明，这两种病毒是有共同抗原性的同种病毒，１９７１年由美国…     

犊牛睾丸细胞用于犊牛血清BVD/MD抗体检测的可行性探讨

用犊牛睾丸细胞和牛肾细胞,ＢＴ细胞,通过中和试验分别做犊牛血清牛病毒性腹泻／粘膜病（ＢＶＤ／ＭＤ）抗体的检测,检测了４１批犊牛血清样品,结果一致性较好,用犊牛睾丸细胞血清（ＢＶＤ／ＭＤ）抗体检测是可行的。     

用单克隆抗体识别出一种与马立克病肿瘤细胞相关的淋巴细胞表面…

从经马立克病病毒（ＭＤＶ）诱发的种瘤细胞系ＭＳＢ－１细胞免疫的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合中，筛选到一株杂交瘤细胞１４Ｂ３６７。在酶标抗体和荧光抗体反应中，单抗１４Ｂ３６７对ＭＳＢ－１细胞及ＭＤＶ诱发的另二株肿瘤细胞系ＲＰ４和ＲＰ１细胞表现明显的阳性反应，但与鸡白血病病毒及网状内皮增生病病毒诱发的肿瘤细胞系ＲＰ９和ＲＰ１３，以及ＳＰＦ鸡的脾、胸腺、腔上囊细胞仅产生微弱的交叉反应。免疫转印试验和免疫沉     

微量PCR检测鸡马立克氏病病毒早期感染

为了建立一种监测鸡群马立克氏病病毒（ＭＤＶ）早期感染的微量ＰＣＲ方法,根据血清Ⅰ型马立克氏病病毒（ＭＤＶ１）基因组ＢａｍＨＩ－Ｌ片段的核酸序列设计了１对寡核苷酸引物,用含０．３ＵＴａｑ酶的１０μＬ反应体系分别扩增了ＭＤＶ１型（京－１株、ＭＤ１１／７５ｃ株）、ＭＤＶ２型（ＳＢ－１株）和ＨＶＴ（ＦＣ－１２６株）的核酸,并用京－１株感染细胞ＤＮＡ作了敏感性试验。结果显示,该引物对ＭＤＶ１型病毒特异,京－１株和ＭＤ１１／７５ｃ株都扩增到４２５ｂｐ的核酸条带,而ＳＢ－１株、ＦＣ－１２６株和正常ＣＥＦ细胞的ＤＮＡ都没有得到任何条带;敏感性试验结果表明,微量ＰＣＲ能够检测到０．１ｐｇ的京－１株感染细胞ＤＮＡ;对京－１株感染鸡,在接种后第５天就能在血液细胞中检测到ＭＤＶＤＮＡ。微量ＰＣＲ可望成为监测鸡群ＭＤＶ早期感染的一种快速、有效的方法。     

BVD—MDV细胞毒的快速粗提

采用聚乙二醇（ＰＥＧ２００００）沉淀法提取了２批牛病毒性腹泻－粘膜病病毒（ＢＶＤ－ＭＤＶ）细胞毒，经毒价及ＯＤ值测定，浓缩病毒较之浓缩毒力明显增强，病毒含量及纯度均有较大提高，将其作为检测抗原及免疫抗原，应用以ＢＶＤ－ＭＤＶ单克隆抗体的研制中，效果均较理想，试验证明，该方法具有简便，省时，费用低，实用等优点，适合基层推广应用。     

不同细胞系上牛病毒性腹泻病毒受体的鉴定

抗独特型抗体（ａ－ｉｄｓ）已被成功用于鉴定不同细胞系上牛病毒性腹泻病毒受体，ａ－ｉｄｓ能特异结合培养细胞并鉴定出一种分子量为５０ｋＤａ的细胞膜蛋白，这可能就是ＢＶＤＶ的特异受体，在本实验中，流式细胞术中分析表明ａ－ｉｄｓ能特异地与ＭＤＢＫ，ＥＢＫ，ＢＴ，ＲＫ１５，ＭＡ１０４和Ｖｅｒｏ等不同的细胞结合。病毒吸附和复制试验表明，除猴肾细胞ＭＡ１０４和Ｖｅｒｏ外，ＢＶＤＶ都能吸会并复制，噬斑减少试验结果     

牛病毒性腹泻病毒的基因分型

根据病毒基因组５＇端非翻译区（ＵＴＲ）的序列比较将牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）分成两组。种系发生分析说明ＢＶＤＶ－１和ＢＶＤＶ－Ⅱ组互有不同，根据５＇端非翻译区和编码ｐ＾１２６多肽的基因区，设计了用ＰＣＲ鉴别ＢＶＤＶ－Ｉ和ＢＶＤＶ－Ⅱ。用该试验，１４０株ＢＶＤＶ毒株中有７６株被鉴定为ＢＶＤＶ－Ⅱ，并注意到ＢＶＤＶ－Ｉ和ＢＶＤＶ－Ⅱ之间的抗原性和病原性差别，ＢＶＤＶ－Ｉ普遍用于疫苗生产、诊断试验和研     

我国规模化肉牛场牛病毒性腹泻—粘膜病流行状况监测

从山东,河南和河北省的６个规模化的肉牛场随机采肉牛血清８９份,直肠粪拭子１６５份,分别用微量细胞中和试验和双抗体夹心ＥＬＩＳＡ试剂盒检测牛病毒性腹泻－粘膜病的抗体和抗原。诊断结果;ＢＶＤ－ＭＤ中和抗体阳性率为４６．２％－６５．０％;ＢＶＤ－ＭＤ病毒抗原阳性检出率为５．１％－７７．２％。从而证实我国中原地区肉牛群中存在有ＢＶＤ－ＭＤ。     

新城疫弱毒疫苗蛋内接种对鸡的免疫效果

新城疫Ｂ１（ＮＤＶ－Ｂ１）对刚出鸡无致病性，但却可致死１８日龄的鸡胚。经甲基硫酸乙酯（ＥＭＳ）处理的ＮＤＶ－Ｂ１，却可显著降低对１８日龄鸡胚的致病性。经这种弱毒（ＮＤＶ－Ｂ１－ＥＭＳ）接种的蛋，其１日龄雏鸡的肺和脾都可分离出病毒，出壳的雏鸡产生抗体；到４周龄时能抵抗ＮＤＶ ＧＢ－１Ｔｅｘａｓ强毒的攻击。母源抗体的存在并不影响其保护能力。以这种弱毒接种４周龄雏鸡也可诱发保护性免疫。经推算母源抗体阳性     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立

将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ，病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单隆抗体的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭＣＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ２ａ，后２株属于ＩｇＧ１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均