狂犬病抗体试剂在汉研制成功

6月27日,湖北省疾病预防控制中心研制成功国内唯一的动物诊断用狂犬病抗体检测试剂盒,填补了国内这一领域的空白。我国是狂犬病的高发国家,95%的狂犬病都是由与人类密切接触的犬传播的。目前预防狂犬病发生的关键措施是对犬等动物接种狂犬病疫苗。但接种了狂犬病疫苗的犬等动物是否成功产生了抗体?此前国内尚无任何试剂能够检测出来。此次研制出的动物诊断用狂犬病抗体检测试剂盒,可以在2h内通过两种检测方法对包括犬在内的各种动物进行狂犬病抗体检测,确定其免疫效果,具有时间短、准确度高、经济实用等诸多优点。今后,人们一旦被宠物咬伤抓…     

浅谈狂犬病的诊断技术

狂犬病是一种由狂犬病病毒引起的人兽共患传染病。OIE将其列为B类疫病。我国的狂犬病发病人数仅次于印度,为世界第二。据国家卫生部统计表明,包括2003年发生的非典疫情在内,狂犬病的死亡人数在我国法定报告传染病中始终占据首位,因此如何利用有效的诊断方法对攻击咬伤人的动物以及隐形带毒动物进行狂犬病病毒快速、准确的诊断及如何对狂犬病疫苗免疫后的动物进     

应用斑点酶联免疫吸附法对狂犬病疫苗抗体水平监测的研究

应用斑点酶联免疫吸附(Dot-ELISA)法检测狂犬病疫苗免疫5只实验兔及12只实验犬的体内抗体水平。此种监测方法国内外未见报道,是我们首先建立的。本法在接到标本后2.5小时内完成试验,报告结果。以抗原制备的的快诊膜在室温下保存数月不失活,可通过信封邮递,还可以作为资料长期保存。     

伪狂犬病病毒感染抗体监测及伪狂犬病流行状况分析

在北京大兴和顺义区2个使用伪狂犬病病毒（porcine pseudorabies virus,PRV）Bartha株基因缺失疫苗的规模化猪场进行为期3年的猪伪狂犬病野毒感染抗体跟踪监测,并进行猪场的临床状况和组织样品的PCR检测,结果显示,北京市2011—2012年间在猪伪狂犬病基因缺失疫苗免疫猪场发生了猪伪狂犬病的流行。提示,应对该状况加以重视,对其发病原因需进行进一步的病毒分离和毒株分子遗传学分析。     

荧光抗体技术检测病毒活疫苗中衣原体的污染

本试验将新城疫（ＮＤ）疫苗与Ｂ１１００１株鹦鹉热衣原体混合，用ＮＤ阳性血清中和，每个接种剂量最终含ＮＤ疫苗１０羽份，衣原体浓度分别为１０~（－９）、１０~（－２）、１０~（－３）、１０~（－４），分组接种ＳＰＦ鸡胚进行测定，检测了９株１０~（－４）稀释的衣原体。并以Ｂ１１００１株衣原体试验性污染５批ＮＤ疫苗作检测。试验中取卵黄囊膜涂片，用中科院动物所提供的衣原体萤光抗体试剂盒进行检测，并辅以姬姆萨染色法检查，结果表明用荧光抗体染色可以检查到疫苗中衣原体或包涵体的存在，与姬姆萨染色法基本一致。     

我国部分城乡犬狂犬病中和抗体水平调查

以国际兽疫局(OIE)推荐的荧光抗体病毒中和试验(FAVN)对随机采自广东、河北、北京等地区的573份犬血清进行了狂犬病病毒中和抗体效价的测定,以确定犬群中狂犬病的免疫状况。结果显示,在不同地区或不同城市的动物防疫区域中,犬体内狂犬病病毒中和抗体平均水平存在着明显的差异,城市犬的中和抗体水平较高,有的中和抗体保护水平(0.5IU/mL)阳性率高达100%,少数则达不到保护水平,不同防疫区域狂犬病中和抗体水平为(0.08±0.03)~(4.39±1.45)IU/mL,平均保护水平阳性率为46.3%;乡村看家犬病毒中和抗体水平普遍较低,大部分犬体内无中和抗体,只有个别犬体内存在水平较低的中和抗体,平均保护水平阳性率为1.8%。     

三种ELISA方法与荧光抗体病毒中和试验检测狂犬病抗体的一致性分析

为筛选合适狂犬病抗体检测的试剂盒,该研究以荧光抗体病毒中和试验（fluorescent antibody virus neutralization FAVN）方法为参照,与3个ELISA试剂盒方法进行比对,进行一致性分析,并计算了三种试剂盒的敏感性和特异性。结果显示：三种不同的试剂盒中,试剂盒A与FAVN一致性最好,Kappa值为0.605,有较高的一致性,符合率为86%;试剂盒B次之,Kappa值为0.485,为中度一致,符合率为80%;试剂盒C与FAVN的一致性最差,Kappa值为0.310,符合率也最低,为74%。在敏感性和特异性方面,试剂盒A的敏感性最高,为92.1%,试剂盒B的特异性最高,为72.7%。本研究为临床上科学的筛选试剂盒提供了依据。     

猪瘟免疫球蛋白提取及荧光抗体制备

本试验采用两种操作程序，对常规提取ＩｇＧ制备荧光抗体的操作程序进行了修改和简化，缩短了每个环节所用的时间，用饱和硫酸铵盐析出的蛋白，采用透析过夜后一次过葡聚糖Ｇ２５凝胶柱，即达将盐除尽纯化之目的；用３３％饱和硫酸铵盐析分离ＩｇＧ和已除盐的蛋白液过ＤＥＡＥ纤维素柱（ＤＥ５２）分离提取ＩｇＧ异曲同功，用本动物制取高免血清提取ＩｇＧ并采用过葡聚糖Ｇ２５凝胶柱纯化，在标记荧光后省略了加入脏粉这一常规环节，     

桐乡市犬狂犬病疫苗免疫后的抗体水平监测分析

比较狂犬病国产疫苗(SAD株)与进口疫苗(G52株)对犬只免疫后不同阶段抗体水平的研究,结果表明：犬只在狂犬病疫苗免疫的第21天后抗体水平整体较高,150～180 d依然保持较高水平;330 d后进口疫苗(G52株)免疫的抗体水平有所下降,国产疫苗(SAD株)免疫的抗体水平合格率仍保持在90%以上。本试验为今后犬类免疫中狂犬病疫苗的选择提供参考。     

表达绿色荧光蛋白重组狂犬病病毒Flury-LEP的构建及其用于中和抗体检测的研究

为确定狂犬病病毒(RV)Flury-LEP株外源基因的插入位点及其中和抗体快速检测方法,本研究在建立了RVFlury-LEP株反向遗传操作系统的基础上,构建了表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的重组LEP基因组cDNA克隆pCI-LEP-EGFP,并成功拯救出重组病毒(rLEP-EGFP)。rLEP-EGFP的生物学特性和野生型LEP(wtLEP)在NA细胞和BHK-21细胞中的生长动力学及对小鼠的致病性没有显著差异。rLEP-EGFP在BHK-21细胞中连续传代9次,各代次重组病毒均稳定表达EGFP。重组表达的EGFP可用于中和抗体检测,rLEP-EGFP免疫犬血清经间接免疫荧光(IFA)或荧光下直接观察检测RV中和抗体滴度,两种检测结果显示较好的相似性(p0.05)。本研究为研制以Flury-LEP株活载体多价疫苗奠定了基础,并为病毒中和抗体的检测提供了更为快捷的新方法。     

Dot-PPA-ELISA检测猪血清伪狂犬病抗体的研究

本研究建立了Dot-PPA-ELISA检测猪伪狂犬病抗体的方法.制备的诊断膜片PRV点样抗原含量为0.5μg,可以检测的最低猪IgG含量为1.398×10-8g,灵敏性高.不与猪瘟、猪细小病毒病、猪衣原体病、布氏杆菌病、日本乙型脑炎、口蹄疫阳性血清发生交叉反应,特异性好.研究初步确定检测猪伪狂犬病抗体的阳性标准为血清效价1:64以上.试验结果表明:该法具有操作方便、快速,结果客观,易于判读等优点,可应用于猪场伪狂犬病的诊断和抗体检测.     

犬瘟热荧光抗体技术的应用研究

用硫酸铵盐析法和蔗糖梯度离心法，从犬瘟热病毒人工感染犬的肝，脾中浓度提纯犬瘟热病毒，以其免疫家兔，制备兔抗犬瘟热病毒免疫血清，再经硫酸铵沉淀与ＱＡＥ－葡聚糖凝胶Ａ５０层析提取ＩｇＧ，于４℃低速搅拌标记异硫氰酸荧光素，制成兔抗犬瘟热病毒抗原荧光抗体。用上述荧光抗体检测２１只犬瘟热病毒人工感染犬和３５只自然感染犬的１１６份白细胞，抗原阳性１０９份，而健康犬，传染性肝炎犬，犬细小病毒肠炎犬的３７份血液白     

ELISA与FAVN方法检测犬狂犬病抗体的比较

比较酶联免疫吸附试验(ELISA)与细胞培养病毒中和试验(FAVN)检测狂犬病疫苗免疫后血清抗体.将40只犬免疫兽用狂犬病疫苗后,第14 d静脉采血分离血清,分别采用ELISA法和国际贸易指定试验FAVN法检测血清样品,试验犬免疫第21 d攻击狂犬病毒BD06株.结果表明,两种方法检测结果差异不显著(p≥0.05,p=0.19),FAVN、ELISA法检测狂犬病抗体与攻毒试验结果的阳性符合率均为100%.     

东莞地区犬接种狂犬病疫苗后抗体水平的检测

应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对东莞市采集的809份犬血清进行检测,采用SYNBIOTICS软件进行分析.结果表明,抗体阳性数265份,抗体阳性率32.76%,其中检测免疫狂犬病多联苗的血清493份,抗体阳性数55份,抗体阳性率11.16%,检测免疫狂犬病单价疫苗的血清316份,抗体阳性数210份,抗体阳性率66.46%.     

应用ELISA检测犬狂犬病抗体水平的探讨

为了解应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测犬狂犬病抗体水平的效果,对东莞市采集的54份犬血清应用ELISA进行检测,采用Synbiotics软件进行分析,同时将该批血清送至军事医学科学院军事兽医研究所作荧光抗体病毒中和试验(FAVN)比较.ELISA检出阳性数35份,阳性率为64.82%,与军事医学科学院军事兽医研究所的测定结果差异不显著,符合率为85.19%.证明应用ELISA检测犬狂犬病抗体水平定性检测具有较高的准确率,适合在短时间内监测大批量的血清样品.