产气荚膜梭菌主要毒力因子的分子生物学研究进展

产气荚膜梭菌(Clostridium aerogenes capsulatus)又名镶边梭菌(C.Perfringens)、魏氏梭菌(C.Welchii),为一类G+产芽胞的厌氧杆菌.其致病作用一般由它产生的胞外酶或毒素诱导.最重要的就是α-毒素和θ-毒素.此外,其它的一些胞外酶,如胶原酶E(κ毒素)、透明质酸酶(μ-毒素)DNA酶(v-毒素)和神经节苷酶(唾液酸酶)的病理作用也已经阐明.人和动物食物中毒主要与该菌在芽胞形成过程中产生的一种芽胞相关蛋白(肠毒素)有关.随着产气荚膜梭菌分子生物学领域的飞快发展,各种主要毒素和肠毒素基因均已克隆成功.本文重点针对产气荚膜梭菌α-毒素、θ-毒素、神经节苷酶以及肠毒素和芽胞形成的分子机制等方面的研究进展作一综述.     

产气荚膜梭菌α毒素研究进展

产气荚膜梭菌 (Clostridium perfringens)α毒素是第一个被赋予酶活性的细菌毒素 ,194 1年Mac Farlane和 Knight将其命名为磷脂酶 C。产气荚膜梭菌是一类革兰氏阳性厌氧粗大杆菌 ,大小 3～4μm× 1～ 1.5μm,分布广泛 ,恶劣时可产生高抵抗力的内生性孢子。该菌产生的外毒素有α、β、γ、δ、ε、η、θ、ι、κ、λ、μ、ν 12种以及肠毒素 (也称为芽胞相关蛋白 ) ,但主要起作用的是α、β、ε、ι4种。根据细菌产生外毒素的种类差别 ,可将产气荚膜梭菌分成 A、B、C、D、E等 5型。各型菌均可产生α毒素 ,其中以 A型菌产生的最多。毒素…     

产气荚膜梭菌α毒素的研究进展

产气荚膜梭菌 (Clostridiumperfringens)的致病作用一般由它所产生的胞外酶或毒素诱导。主要有α -毒素、β -毒素、θ -毒素及其他的一些胞外酶。本文针对产气荚膜梭菌α毒素的组成、结构、理化性质、作用机理及分子遗传等方面的研究进展作了简要综述。     

鸡坏死性肠炎de诊断与防治

一．历史、分布１９６１年，Parish首次报道了家禽的坏死性肠炎，并用病原魏氏梭菌复制出了本病。以后世界大多数养鸡地区都有类似的病例报道，我国一些养鸡地区，先后都报道过多起鸡坏死性肠炎。本病又称梭状芽胞杆菌肠炎（Clostridialenteritis）、菌群失调症（dysbacte－riosis）或小肠细菌生长过度症（SIBO）。病死禽以肝肿大，肠道出血，肠黏膜有麸皮样坏死灶为特征。二．病原坏死性肠炎的病原为A型和C型产气荚膜梭菌。产气荚膜梭菌的部分菌株在体外培养等产生毒素较少，难以分型。A型和C型产气荚膜梭菌产生α毒素，产气荚膜梭菌C…     

产气荚膜梭菌α—β融合基因的构建

用PCR从含产气荚膜松菌β毒素基因的质粒pXETB2中扩增出β毒素基因，NcoⅠ和BamHⅠ双酶切该β毒素基因，回收0.93kb的β毒素基因片段，再用NcoⅠ和BamHⅠ双酶切含产气荚膜梭菌α毒素基因质粒pXETA1,与上述回收的β毒素基因片段连接，转化至受体菌BL21（DE3）中，经NcoⅠ，NotⅠ酶切反应鉴定和苷酸序列分析证实，获得的重组质粒pXCPAB1含有α－β融合基因，重组菌株BL21（CD3）（pXCPAB1)表达产物经ELISA检测和SDS－PAGE分析，表明重组菌株可以表达α－β融合蛋白。     

A型产气荚膜梭菌α毒素的研究进展

α毒素（CPA）是产气荚膜梭菌最重要的毒素之一,而且也是A型产气荚膜梭菌最主要的毒力因子。Macfarlane首先发现α毒素的本质为酶,它具有细胞毒性、溶血活性、致死性、皮肤坏死性、血小板聚集和增加血管渗透性等特性。产气荚膜梭菌是引起各种动物坏死性肠炎、肠毒血症、人类的食物中毒和创伤性气性坏疽的主要病原菌之一,该菌分为A、B、C、D、E5型,其致病因子是菌体产生的外毒素。本文主要综述了A型产气荚膜梭菌α毒素的基本特征、结构、功能、检测技术等方面的研究进展。     

产气荚膜梭菌所致动物猝死症

产气荚膜梭状芽胞杆菌 (Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ)简称产气荚膜梭菌 ,又称魏氏梭菌 (Ｃｌｏｓｔｒｄｉｕｍｗｅｌｃｈｉｉ) ,根据该菌产生的α、β、ε、ι 4种主要毒素 ,将其分为Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ 5型。1 994年笔者报道了国外由Ａ、Ｂ、Ｃ型菌感染或混合感染所致仔猪坏死性肠炎的猝死症。近年国内也时有由产气荚膜梭菌Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ五型菌所致多种家畜猝死症的报道。现将产气荚膜梭菌所致疫病、所产毒素及近年国内由产气荚膜梭菌所致家畜猝死症概述如下。1　产气荚膜梭菌所致疫病及所产毒素类型毒素中和试验对…     

产气荚膜梭菌肠毒素的分子生物学研究进展

产气荚膜梭菌(Clostridum perfringens)是一类G 产芽胞的厌氧梭菌,可以引起人食物中毒和家畜气肿疽,其致病性很大程度取决于产生不同的外毒素.目前至少已鉴定出20余种不同的产气荚膜梭菌的毒素.根据产气荚膜梭菌的4种主要毒素(α,β,ε,т),可以将产气荚膜梭菌分为A～E5个型.……     

多重PCR方法快速检测粪样中产气荚膜梭菌

建立了多重聚合酶链反应 (multiplexPCR)检测产气荚膜梭菌的α_毒素和肠毒素 (enterotoxin)基因。该方法可以检测猪粪便样品或小肠内容物中肠毒性产气荚膜梭菌。首先猪粪便样品经前处理后 ,接种选择性培养基 ,再挑取单个菌落溶于超纯水中 ,煮沸提抽 ,制备样品DNA ,进行PCR检测。从实验中我们成功的扩增出 32 4bp的α毒素基因片段和 2 33bp的肠毒素基因片段。以人工污染样品 10倍系例稀释后进行检测 ,该方法的检测灵敏度达到 1.0× 10 4 CFU/g并对 5 8份猪粪便样品检测 ,获得 5 3株产气荚膜梭菌 ,分离率为 91%,其中 4株为带有肠毒素的产气荚膜杆菌 ,占整个分离菌株的 7.5 %。因此多重PCR方法在检测粪样中的产气荚膜梭菌是一种非常有用的方法并可以快速检出肠毒素 ,从而避免了使用动物作定型试验。     

对鸡坏死性肠炎的新认识

本病于1961年首次报导，又称之为梭状芽胞杆菌肠炎(Clostridialenteritis)、菌群失调症(dysbacteriosis)或小肠细菌生长过度症(SIBO)，是由革兰氏阳性细菌——产气荚膜梭状芽胞杆菌(Clostridiumperfrigens,又称魏氏梭菌)A型或C型引起的一种疫病。A型产生α毒素，C型产生α、β毒素。这些毒素是引起坏死性肠炎的主要毒素。产气荚膜梭状芽胞杆菌是肠道寄生菌，在正常情况下不会引起发病，但当球虫侵害肠粘膜时，或是小肠微生物之间的平衡关系遭到破坏(例如，因革兰氏阴性细菌数量的减少导致革兰氏阳性细菌的过量繁殖)，或改变肠道微生态…     

产气荚膜梭菌β2毒素研究进展

产气荚膜梭菌是引起各种动物坏死性肠炎和肠毒血症的主要病原菌之一,该菌可以产生15种以上的毒素,α、β、ε、ι毒素、肠毒素及β2毒素等被认为是主要致病性毒素,其中β2毒素被推测在该病致病过程中起着重要作用。近年来,国内外对β2毒素的研究正在逐步深入和完善。论文就产气荚膜梭菌β2毒素的分子结构特征、生物学特征、致病性及免疫原性等方面的研究进展进行论述。     

产气荚膜梭菌所致仔猪坏死性肠炎

产气荚膜梭菌所致仔猪坏死性肠炎吴雅玲，高其栋（青海省畜牧兽医科学院西宁，８１０００３）产气荚膜梭菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｐｅｒｆｒｉｎ－ｇｅｎｓ）也称魏氏梭菌（ｃｌｏｓｔｒｄｉｕｍｗｅｌｃｈｉｉ），根据该菌产生４种主要毒素（α、β、ε、）的有无，把...     

产报荚膜梭菌β—毒素基因的克隆与核苷酸序列分析

为了给产气荚膜梭菌β－毒素基因工程亚单位苗和细菌毒素多价基因工程苗的研制提供基因材料,用聚合酶锭式反应（ＰＣＲ）技术,从Ｂ型产气荚膜梭菌染色体基因组中扩增了９３０ｂｐ的β－毒素基因,用限制性核酸内切栈ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ对ＰＣＲ产物进行双酶切处理。然后通过了Ｔ４ＤＮＡ连接酶将其定向连接于事先经同样的双酶切处理的载体质粒ＰＥＴ－２８Ｃ（＋）的多克隆位点,转化至受体菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中,经ＢａｍＨ     

产气荚膜梭菌α毒素研究进展

α毒素是产气荚膜梭菌的主要毒素和致病因子之一。本文综述了产气荚膜梭菌α毒素的检测，基因的克隆，表达和调控以及毒素的结构与功能等方面的研究进展。     

产气荚膜梭菌β-毒素基因的克隆与核苷酸序列分析

为了给产气荚膜梭菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）β毒素基因工程亚单位苗和细菌毒素多价基因工程苗的研制提供基因材料，用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术，从Ｂ型产气荚膜梭菌染色体基因组中扩增了９３０ｂｐ的β－毒素基因。用限制性核酸内切酶ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ对ＰＣＲ产物进行双酶切处理，然后通过Ｔ４ＤＮＡ连接酶将其定向连接于事先经同样的双酶切处理的载体质粒ｐＥＴ－２８Ｃ（＋）的多克隆位点，转化至受体菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中。经ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ双酶切分析和ＰＣＲ扩增检测，证明重组质粒ｐＥＣＢ２中含有产气荚膜梭菌的β－毒素基因。经核苷酸序列分析，明确了克隆的β－毒素基因在重组质粒中的连接向位和阅读框架是正确的。     

产气荚膜梭菌α毒素保护性抗原基因的克隆与核苷酸序列分析

将含产气荚膜梭菌α毒素基因的质粒ｐＫＭＡ１００用限制性核酸内切酶ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄⅢ双酶切,经１．５％琼脂糖凝胶电泳分离、透析袋电洗脱法回收０．９５ｋｂα毒素基因片段,再将载体ｐＥＴ－２８ｂ（＋）用ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄⅢ双酶切,然后将处理好的ｐＥＴ－２８ｂ（＋）与０．９５ｋｂ的α毒素基因片段通过Ｔ４ＤＮＡ连接酶进行粘性末端连接,转化至受体菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中。经ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄⅢ双酶切分析和核苷酸序列分析,证明重组质粒ｐＸＥＴＡ１含有产气荚膜梭菌α毒素基因。确定了α毒素基因的全部核苷酸序列,并证明其具有正确的阅读框架。     

产气荚膜梭菌次要毒力因子的研究进展

产气荚膜梭菌是一种重要的人兽共患病的病原体,可引起人的食物中毒和动物胃肠疾病.近年来,对产气荚膜梭菌的次要外毒素、肠毒素和酶类研究取得了一定的进展.综述了产气荚膜梭菌的θ和κ外毒素、肠毒素以及神经氨酸酶的组成、结构、理化性质、分子生物学等方面的研究进展.     

产气荚膜梭菌α—β融合基因的高效表达

用PCR从含产气荚膜俊菌α毒素基因的质粒pXETA1中扩增出α毒素基因，用NcoⅠ和BamHI双酶切该α毒素基因，回收0．95kb的α毒素基因片段，再用NcoⅠ和BamHI双酶切含产气荚膜梭菌β毒素基因质粒pXCPAB2，与 回收的α毒素基因片段连接，转化至受菌BL21（DE3）中。经NcoI,BamHI,NcoI酶反应鉴定和核苷酸序列分析证实，获得了理想重组质粒pXCPAB2，该重组质粒含有α-β融合基因。重组菌株BL21（DE）3（pXCPAB2)经IPTG诱导后，其表达产物经ELISA检测和SDSPAGE分析，结果表明重组菌株可以高效表达α-β融合基因，该融合蛋白占菌体总蛋白的22．14％。     

D型产气荚膜梭菌主要毒素基因的PCR检测

为了研究产气荚膜梭菌主要毒素基因,试验采用生物软件以NCBI上登录的产气荚膜梭菌α毒素、ε毒素作为参考,设计扩增D型产气荚膜梭菌α毒素与ε毒素的特异性引物,预期基因片段大小分别为1 110 bp、888 bp,进行PCR扩增。结果表明:设计的引物可以良好地扩增α毒素基因与ε毒素基因,基因片段大小与预期一致。     

多重聚合酶链反应检测环境中产气荚膜杆菌

产气荚膜杆菌根据产生4种主要毒素（α－β、ε、τ－毒素）可分为5种类型A－E型。在该研究中依据产气荚膜杆菌的5种毒素基因的序列，设计了5对PCR引物，建立了多重PCR方法，该方法可以快速区分5种类型的产气荚膜杆菌。并对68份环境样品（生活污水、生物肥料）进行检测和基因分型，共检出55株产气荚膜杆菌，其中A型产气荚膜杆菌50株，占总数的90％以上，B型、C型、D型只占5％，未检出E型产气荚膜杆菌，所有的分离株没有发现带有肠毒素。结果表明，目前环境中主要存在的菌型为A型菌，其他菌型的产气荚膜杆菌很少，而多数是非致病性产气荚膜杆菌。