Dot—PPA—ELISA联合检测猪PRV.Brucella和Chlamydia抗体方法的建立和应用研

首次将Ｄｏｔ－ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ用于联合检测猪衣原体、伪狂犬病毒和布氏杆菌抗体,并进行了较大规模的田间猪血清检测。实验对制作诊断膜片的工艺流程和关键材料做了细致研究,并进行同步监测、分析。确定了本方法的最佳反应条件和阳性标准。联合诊断膜片（简称膜片）具有良好特异性、灵敏性和稳定性。诊断膜片在４℃保存８个月、室温（１５～２５℃）保存２个月、３７℃保存１个月灵敏性,特异性不变。１：６４、１：１２８、１：６４为联合检测猪伪狂犬病、衣原体病和布氏杆菌病抗体的阳性标准。结果表明,Ｄｏｔ－ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ联合检测法操作方便、快速,结果客观,易于判读,诊断膜片便于寄送、保存,性能稳定、可靠,并能同时检测多种疫病等优点,适宜应用于猪衣原体病、伪狂犬病和布氏杆菌病抗体的联合检测。     

应用Dot PPA ELISA检测猪布氏杆菌病抗体的研究

本试验以布氏杆菌ＳＡＴ 为对照试验,建立了Ｄｏｔ ＰＰＡ ＥＬＩＳＡ 检测猪布氏杆菌病抗体的方法,该法检测的猪ＩｇＧ 含量可达６９９２×１０－ ９ｇ,灵敏性高,不同猪抗ＰＲＶ、ＰＰＶ、ＨＣＶ、ＪＥＶ、ＣＨＬ 等阳性血清发生交叉反应,特异性强;此外该法还具有操作简便、快捷不需特殊试验条件、结果客观、肉眼易于判断、反应膜片可长期保存等优点。适宜在广大基层单位应用,对布病的快速诊检有着十分重要的意义。     

应用PPA—ELISA检测系统控制猪瘟的持续感染

上海郊区某两猪场自１９９４年初起不断有少量仔猪死亡，经诊断为猪瘟持续感染（亚临床隐性感）。对发病舍的母猪和仔猪应用ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ检测系统重点检测其血清猪瘟抗体水平，表明８．３％的母猪和相当数量的仔猪抗体郊价处于低水平状态。普查表明，在１１５８头母猪中ＯＤ值小于０．５的有５７头，占４．９２％。用４头份的猪瘟疫苗对抗体水平低的母猪进行强化免疫，一个月后检测其抗体效价；再用６头份的猪瘟疫苗对抗体效价     

应用ELISA方法检测犬狂犬病血清抗体试验

运用ELISA方法检测狂犬病抗体水平,试验结果表明:检测狂犬病抗体阳性率达92.5%,免疫效果基本满意。运用此方法较简单、操作方便、灵敏度高、特意性强,值得推广运用。同时,分析了免疫失效的原因。     

ELISA法检测猪瘟抗体消长规律的试验研究

本试验采用间接ELISA方法,对猪瘟（CSF）常规免疫的仔猪CSF抗体水平进行检测。试验分A、B两组,A组首免注射4头份猪瘟兔化弱毒疫苗,B组首免注射2头份猪瘟兔化弱毒疫苗;二免两组均注射2头份猪瘟兔化弱毒疫苗。试验结果表明,注射疫苗后10d,开始产生抗体,20~30d抗体达到峰值,二免后抗体峰值维持40d以上。首免4头份的仔猪比首免2头份的仔猪CSF抗体峰值出现的早,维持的时间长。     

猪流行性腹泻病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

【目的】建立2种猪流行性腹泻病毒(PEDV)抗体间接ELISA检测方法.【方法】分别以GD-1株PEDV灭活全病毒和原核表达的COE融合蛋白作为包被抗原,确定最佳ELISA条件,检验其重复性、特异性等,并进行临床应用.【结果和结论】确定了2种ELISA方法的最佳条件,重复性试验显示变异系数分别小于4.60%和5.30%,特异性试验检测口蹄疫病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清均为阴性,并具有良好的稳定性和较长的保存期.临床样品检测结果显示,223份血清样品总阳性率分别为97.3%(217/223)和98.6%(220/223),2种方法检测的阳性率相近,具有良好的检出率和很高的符合率,为PEDV的抗体检测及流行病学调查提供了一种技术手段.     

应用PPA—ELISA检测鸡血清中禽分枝杆菌抗体的研究

用禽型提纯结核菌素(PPD)作包被抗原,建立了PPA—ELISA检测鸡结核病血清抗体的程序。筛选最佳包被抗原浓度为25μg/ml,待检血清稀释度为1:40倍,兔抗鸡IgG血清稀释度为1:800倍。检测了30份结核病鸡血清和30份健康鸡血清。两者OD值分别为x0.345和x0.086,P/N值为4.0(P<0.01)。     

副猪嗜血杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

采用超声裂解副猪嗜血杆菌分离株5型菌体上清作为包被抗原,初步建立副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA检测方法。通过棋盘滴定法筛选确定最佳反应条件:抗原包被浓度50mg/L,37℃作用2h后4℃过夜包被,血清的稀释度为1∶320,抗原抗体反应时间为50min,酶标二抗稀释度为1∶12 000,作用时间为30min,底物显色时间为15min。经特异性、敏感性和符合性试验检测结果表明,建立的间接ELISA方法特异性和重复性良好,敏感性高,可用于副猪嗜血杆菌的检疫和流行病学调查。     

双抗体夹心ELISA检测排泄物PEDV

用蔗糖密度梯度离心法纯化猪流行性腹泻病毒(PEDV)免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术获得2株分泌抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)单克隆抗体,建立检测PEDV的双抗体夹心ELISA方法。结果表明,该双抗体夹心ELISA最佳反应条件为,兔抗PEDV抗体稀释度为1:800包被37℃1 h加4℃12 h,样品反应时间为90 min,酶标抗体工作浓度为1:2 000作用45 min,以OD490nm≥0.37作为阳性判定标准。该ELISA的重复性变异系数小于10%,最低检测限为5×103.67TCID50/m L,并与猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒无交叉反应。用该ELISA方法和RT-PCR方法检测48份临床粪便样品,结果显示,ELISA阳性检出率为39.6%,而RT-PCR方法检测卡的阳性检出率为43.8%。表明双抗体夹心ELISA方法具有特异性强、灵敏性高和重复性好等优点,可用于PEDV快速检测。     

应用ELISA检测我国猪病的研究进展

ELIsA技术具有操作简便、快速准确、易于标准化、特异性强、敏感性高、重复性好、经济实用等优点,已被广泛应用于畜牧业、临床医学、环境污染控制、食品安全监测、生物、化学等领域。文章综述了应用ELISA检测我国猪病的研究进展。     

检测禽霍乱抗体间接ELISA法的建立

以方阵滴定法选择出最适ＥＬＩＳＡ反应条件,用系列稀释法测定２１份血清样品的禽霍乱抗体ＥＬＩＳＡ效价（ＥＴ）,并与相应血清样品１：２００倍稀释的Ｐ／Ｎ值配对,作线性回归分析,得到回归方程ｙ＝２１９．６７３ａ－１８３．５７０（ｒ＝０．９４４）和标准曲线,从而建立起快速定量测定禽霍乱抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法－阳阴比值ＥＬＩＳＡ效价法（Ｐ／ＮＩ－ＥＴ法）利用该法,血清样品只需作１：２００倍稀释,测定其Ｐ／     

HRP-SPA ELISA检测猪日本乙型脑炎病毒抗体的研究

将盐析法提纯的、用Hela细胞系增殖的猪日本乙型脑炎病毒JapaneseBencephalitis(JEV)抗原包被酶标板,以HRP-SPA作为第二抗体,建立了检测JEV抗体的ELISA试验方法。结果表明,抗原的最适包被浓度为1∶800,待检血清最适稀释度为1∶50,HRP-SPA最佳工作浓度为1∶1000,各步反应时间确定为5min。交叉试验、阻断试验、重复性试验、敏感性试验证明本实验特异性强,重复性好,敏感性高。包被的病毒抗原经甲醛固定15min即可进行正式试验。确定其测定标准为:S/N≥14.81为阳性,S/N<12.53为阴性,12.53≤S/N<14.81为可疑。     

猪圆环病毒Ⅱ型血清抗体ELISA检测方法的建立

为了检测猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)抗体,本试验建立了快速、敏感的ELISA诊断方法.通过比较差速离心、蔗糖不连续梯度离心、氯化铯等密度梯度离心和氯仿抽提结合超速离心等4种方法纯化PCV2抗原的包被效果,来确定最佳的PCV2包被抗原纯化方法,在此基础上,通过全病毒抗原最适包被浓度和二抗HRP-SPA稀释倍数的确定、待测血清稀释倍数的确定、封闭液浓度的确定、封闭时间的确定、HRP-SPA反应时间的确定、临界值的确定、特异性测定、重复性测定、符合率比较等,进一步优化检测PCV2抗体的间接ELISA方法.结果表明:对猪的多种病毒阳性血清进行ELISA检测,只有PCV2阳性血清呈阳性;对6份血清进行4次重复试验,方差分析显示P0.05,差异不显著;与PCV2-ELISA试剂盒(INGEZIM公司生产)的符合率比较,其总符合率达88.89%.可见,优化建立的检测PCV2抗体的间接ELISA方法特异性强、重复性高、稳定性好,可用于PCV2血清学诊断和血清学普查.