牛布氏杆菌二抗苗应用安全性实验研究（Ⅱ）──实验性豚鼠兔抗体的研究（GpARA）

用牛布氏杆菌抗独特型兔源抗体（简称二抗）苗免疫实验动物豚鼠１～３次后，采用琼脂扩散的方法检测抗兔抗体的产生。初步实验结果表明：免疫一次未检出抗兔抗体，免疫２次后检出了抗兔抗体。     

不同免疫程序对MDV抗独特型抗体苗效果的影响

探讨不同免疫程序对MDV（Marek＇s DiseaseVirus,MDV）抗独特型抗体苗抗感染保护的影响.将MDV抗独特型抗体苗用胚内.皮下与单纯皮下相结合的方法免疫SPF鸡,以第二次免疫接种5 d攻毒后, 进行抗感染保护测定,比较各实验组淋巴细胞增生病变,病毒分离及大肠杆菌感染指标等的差异,确定MDV抗独特型抗体苗的免疫程序.结果表明,二种免疫效果相同,抗MD感染保护力达90%.     

布氏杆菌抗独特型抗体苗小白鼠免疫试验

用布氏杆菌抗独特型抗体苗(简称二抗苗)进行试验表明,免疫小白鼠酸性α-醋酸萘酯酶阳性T淋巴细胞(TANAE~+)数明显高于对照组(P<0.01),且比19号苗免疫组还高,证实此二抗苗确有增强细胞免疫功能的作用。     

鸡马立克氏病毒抗独特型抗体苗免疫效果观察

探讨MDV(Marek’s Disease Virus)抗独特型抗体(Ab2)模拟抗原诱导抗MDV感染的能力。将MDV抗独特型抗体分别与福氏完全佐剂和福氏不完全佐剂按1：1比例乳化制备成抗体苗．对1日龄，10日龄SPF鸡进行两次免疫，同时设火鸡疱疹病毒疫苗(HVT)和非免疫空白对照。30日龄后用马立克氏病毒(MDV)标准Ⅰ型强毒——京-1毒行腹腔攻击，在第30天，第60天，第120天采血，分别检测免疫系统一淋巴器官重量、循环血淋巴细胞数量、病理组织学变化、孵化率及免疫抑制性反应。MDV抗独特型抗体苗免疫攻毒后淋巴组织器官增重、器官未见淋巴细胞浸润．120d保护率为83．45％．未见大肠杆菌继发感染发生。HVT苗免疫攻毒后淋巴组织器官，淋巴细胞的数量下降、出现病理损伤，120d保护率为73．80％。MDV感染法氏囊、脾脏的重量及循环血中淋巴细胞的数量减少，大肠杆菌的敏感性增加。MDV抗独特型抗体能诱导机体产生抗MDV感染保护。     

布氏杆菌单克隆抗独特型抗体细胞株建立及免疫原性测定

在建立了布氏杆菌单克隆抗体细胞株的基础上,筛选具有强保护作用的单抗细胞株A7免疫BALB/C鼠,并进行细胞融合.用竞争抑制ELISA法筛选出5个强阳性孔,经克隆化培养后首次建立了9个布氏杆菌单克隆抗独特型抗体细胞株.其中,F9株传25代后及液氮冻存复苏后仍能稳定地产生高效价的抗独特型抗体.其IgG类型鉴定为IgG2a,并证实具有抗原“内影象”.以鼠红细胞为载体将抗独特型抗体吸附其表面进行小鼠免疫试验,检测结果表明该抗独特型抗体具有良好的免疫原性,能诱导免疫小鼠产生相当效价抗布氏杆菌抗体(Ab3).     

抗独特型单克隆抗体在鸡中诱导的抗新城疫病毒保护性免疫——新城疫单克隆抗独特型疫苗研究(Ⅲ)

用AFE_8Id_(16-6)和ALA_(15-6)Id两株新城疫病毒(NDV)的抗独特型单抗(MAb_2)分别免疫接种一组(18只)无HI抗体鸡,并以一组(7只)Lasota苗常规免疫鸡和一组(12只)不免疫的易感鸡分别作为免疫阳性和阴性对照。在两株MAb_2末次免疫后8天,用微量血凝抑制(HI)试验检测了4组鸡的血清中HI抗体水平。结果:两株MAb_2和Lasota苗免疫的鸡全都产生了HI抗体,非免疫鸡均未测到HI抗体。AFE_8Id_(16-6)免疫鸡的HI滴度为1～5log_2;ALA_(15-6)Id免疫鸡的HI滴度为1～4log_2;Lasota苗免疫鸡的HI滴度高达7～10log_2。在HI抗体检测后2天,用100LD_(50)F_(48)E_8株NDV强毒攻击4组鸡,隔离观察10天,AFE_8Id_(16-6)和ALA_(15-6)Id免疫鸡的保护比值分别为17/18和10/18,Lasota苗免疫鸡保护比值达7/7,而非免疫对照鸡在攻毒后6天全部死亡。试验结果证明,上述两株MAb_2是NDV保护性抗原的模拟物,在多次注射后可诱导鸡产生抗NDV的血凝抑制抗体,并能使鸡抵抗NDV强毒的人工感染。因此,这两株抗独特型单抗,尤其AFE_8Id_(16-6)有希望用作新城疫抗独特型疫苗。     

抗独特型抗体在小分子农药、真菌毒素免疫检测中的应用

小分子农药、真菌毒素免疫分析技术的发展,存在难以实现多残留检测、标准品昂贵且不易获得和检测灵敏度受限制等制约因素,而抗独特型抗体技术可以为这些问题的解决提供新的思路。文章阐述了抗独特型抗体的基本原理,该技术在小分子食品污染物免疫分析技术中的应用及优势,国内外在此领域的研究进展,以及该技术存在的制约因素与发展前景。     

兔源IBD抗独特型抗体疫苗的制备及对鸡的初试

用纯化的抗ＩＢＤＶ抗体作为抗原免疫家兔,并分离制得效价较高（１：１６）的兔源ＩＢＤ抗独特型抗体,分别与氏安全和福氏不完全佐剂按１：１比例乳化制成抗ＩＢＤＶ独特型抗体疫苗,免疫接种普通迪卡公雏鸡和ＳＰＦ鸡,然后用ＩＢＤＶ强毒株攻毒,得到保护率分别为１００／１００,１００／１００,５０／５０和大群免疫接种应答为１００％的免疫保护效果。     

Cry2A毒素抗独特型单链抗体库的构建

为了降低苏云金杆菌Cry2A毒素的免疫检测成本,开发廉价、无毒试剂盒,采用整体抗体免疫和噬菌体展示技术的路线,设计和构建了Cry2A抗独特型单链抗体库。以Protein A纯化的Cry2A兔多克隆抗体为免疫原,对雌性Balb/c系小鼠进行了免疫。在优化的包被原浓度下,用ELISA法测定小鼠血清效价及抗独特型抗体组分。选取效价最高的小鼠,取脾脏提取总RNA,RT-PCR法合成c DNA第一链。设计简并引物,利用PCR法扩增小鼠VH、Vκ基因,再用SOE-PCR法进行单链抗体基因的拼接。SOE-PCR产物和p IT2载体经双酶切后连接,电转入感受态E.Coli. TG1完成建库,并用多克隆噬菌体ELISA对抗体库与免疫原的结合能力进行了鉴定。结果表明,免疫鼠血清的效价在1∶1.6×105到1∶6.4×105倍之间。免疫鼠血清可对Cry2A与其兔多克隆抗体的结合最高可产生17. 6%的抑制,证明Ab2β和Ab2γ型抗独特型抗体的存在。最终构建了库容为1.2×107的Cry2A抗独特型单链抗体库,该抗体库与免疫原的结合信号/背景比值为6. 04。     

猪生长激素抗独特型抗体的制备及生物活性检测

【目的】以鼠肝细胞为模型,在细胞水平上研究猪生长激素抗独特型抗体的作用机制。【方法】以猪生长激素单克隆抗体1A5-F(ab′)2部分免疫BALB/c鼠,采用杂交瘤细胞技术制备猪生长激素抗独特型单克隆抗体。分离Wistar大鼠肝脏细胞,以其为模型,采用流式分析、激光共聚焦显微镜观察、Western-blot等技术手段,研究猪生长激素抗独特型单克隆抗体的生物活性。【结果】成功制备了3株猪生长激素抗独特型单克隆抗体,分别命名为CG1、CG2、CG3。其中,CG1阳性信号最强,经鉴定,CG1为Ab2β类抗独特型抗体,属于IgG2a亚类。CG1能够以二聚体的形式激活鼠肝细胞表面的生长激素受体,并可激活信号转导蛋白JAK2。【结论】CG1抗体可与鼠肝脏细胞表面的生长激素受体特异性地结合,并可磷酸化信号转导蛋白JAK2。     

疫苗研制的新进展

随着生物技术的不断创新,继减毒苗、灭活苗、基因工程苗、合成肽苗、抗独特型抗体苗之后,科研工作者又先后研制出核酸疫苗、转基因植物疫苗和高分子微球疫苗,本文对后三种疫苗作一简介。1核酸疫苗所谓的核酸疫苗又称基因疫苗,就是把外源基因克隆到真核质粒表达载体上,然后将重组的质粒DNA直接注射到动物体内使外源基因在活体内表达,产生的抗原激活机体免疫系统,引起免疫应答。用DNA作为免疫原的称DNA疫苗,用RNA作为免疫原的称RNA疫苗。核酸免疫是近几年基因治疗研究中衍生发展的一个新领域,有人将核酸疫苗看作是继全菌减毒疫…     

猪口蹄疫病毒DNA疫苗与常规灭活苗的比较

以含有FMDV VPI基因和VPI基因主要抗原位点141—160及200—213位的氨基酸的真核表达质粒pcDNA-VPI和pcDNA-F与常规O型FMD灭活疫苗分别免疫6—8周龄的BALB／c小鼠和豚鼠,同时设生理盐水为阴性对照,以肌肉注射,间隔2周3次免疫的方式进行．通过脾脏T淋巴细胞增殖（MTT）、T淋巴细胞亚群、中和抗体、抗病毒能力的检测和病理组织学观察等方面比较DNA疫苗与常规灭活苗的免疫效果．结果发现pcDNA-VPI和pcDNA-F能够诱导细胞免疫和体液免疫反应,pcDNA-F可使小鼠和豚鼠产生一定程度的抗FMDV感染的保护性免疫,但与常规灭活苗比较还存在差异．     

三肽囊素抗独特型抗体可变区基因库的建立

利用抗bursin单克隆抗体免疫SPF来航鸡，获得抗独特型抗体的产生细胞，从中提取总RNA，经反转录合成cDNA第一链。以cDNA第一链为模板，根据鸡抗体重、轻链基因设计引物，进行PCR扩增。在体外成功地扩增出该抗体的可变区重链和轻链基因。     

鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗的研究 Ⅲ、二联苗免疫鸭后抗体消长规律的测定

本文报道了鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗免疫不同品种成年鸭后，其血清中抗鸭瘟病毒（DPV）和鸭肝炎病毒（DHV）的ELISA抗体消长规律，从而为临床上合理地应用二联苗提供理论依据．试验结果表明，二联苗免疫鸭后抗体的消长与鸭的免疫力密切相关。并可以通过检测二联苗免疫鸭后的血清中抗DHV和DPV的ELISA抗体滴度来确定种鸭是否要进行加强免疫。当二联苗免疫鸭后血清中抗DHV的ELISA抗体滴度在1：512以下时或抗DPV的ELISA抗体商度在1：64以下时，需要进行DVH或DP的免疫．     

抗牛布鲁氏菌独特型抗体在牛体中的免疫应答

首次将新疆分离的布鲁氏菌牛Ⅲ型强毒菌株研制成单克隆抗体.选用ELISA效价高的单克隆抗体A₇免疫家兔,经提纯制成抗独特型抗体疫苗,对杂种牛和土种黄牛进行免疫试验.通过平板凝集、试验凝集和Coomb''s试验证明,凝集抗体消失很快,不完全抗体则可维持1年以上,这表明抗细菌性抗体在体内存在时间较长,为独立型疫苗的应用提供了很好的依据.     

猪细小病毒N株弱毒苗的保存温度和时间对豚鼠抗体反应的影响

用不同保存温度和时间的猪细小病毒Ｎ株弱毒苗注射豚鼠,检测ＰＰＶ－Ｎ株弱毒苗的保存期,结果为４℃至少能保存一年,－２０℃至少能保存３年。根据抗体反应的规律性,证明豚鼠可用作ＰＰＶ弱毒苗抗体检测的试验动物。     

“O”型口蹄疫病毒生物合成多肽苗保护性抗体的免疫应答

ｐＸＺ５００持粒表达的生物合成多肽苗分别以总剂量３２μｇ／头和０．３４６ｍｇ／头分两次免疫接种豚鼠和猪，均可获得保护性抗体的良好免疫应答。豚鼠和猪在第一次免疫接种后４０ｄ和４５ｄ时，其血清的乳鼠保护指数均在２．０以上；分别用５０个发病单位强毒攻击，均可获得１００％保护。     

不同佐剂PRV灭活苗免疫奶牛及山羊抗体消长规律研究

用间接ELISA检测伪狂犬病病毒 (PRV闽A株 )自制的油乳剂灭活苗、氢氧化铝胶灭活苗免疫山羊和犊牛后的抗体效价 ,并以市场购买的基因缺失油乳剂灭活苗作对照 ,依据山羊抗体的ELISA效价找出抗体消长规律 .采集犊牛、山羊血清用中和试验测抗体 .试验结果表明 ,(1)首次免疫后抗体上升幅度低 ,仅 2～ 3个滴度 ,且维持时间短 ,仅为 2周 ;二免后抗体上升可高达 12个滴度 ,且维持时间长达 4个月 .(2 )试验组油乳剂灭活苗免疫效果优于氢氧化铝胶灭活苗 .(3)用同种疫苗免疫的犊牛与山羊具有相似的抗体水平和消长规律     

用辛酸—硫酸铵法快速提纯鸡IgG

鸡ＩｇＧ目前广泛应用于鸡病诊断、免疫检测、治疗、及抗独特型抗体苗制备等［１］。然而,在提纯鸡ＩｇＧ过程中,不但要保证除去绝大多数杂蛋白和白蛋白,保留大多数免疫球蛋白（Ｉｇ）,包括各种ＩｇＧ亚类,而且又要不影响ＩｇＧ生物活性。这就需要一种好的提纯方法,...     

用豚鼠效检猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗判断标准的初步研究

8批猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗共免疫PPV HI抗体阴性猪23头，每批2～3头；免疫阴性豚鼠24只，每批3只。均设不免疫为对照。定期采血，测定PPV HI抗体，进行猪和豚鼠免疫后抗体比较试验。全部出现抗体反应的时间，猪是免疫后1周，豚鼠是免疫后4周。23头免疫猪攻毒后，从血浆和内脏中均未分离到病毒，而从对照猪血浆和内脏中均分离到病毒，证明当免疫豚鼠HI≥64时，免疫猪能抵抗PPV强毒的攻击。