双价杀虫基因植物表达载体的构建及其在烟草中的表达

本文报道了抗虫植物基因工程研究中的新进展－转双价杀虫基因烟草的获得。用ＰＣＲ方法来自豇豆的胰蛋白酶抑制基因进行了修饰,在基因５‘及３’端分别加入了克隆所需地ＰｓｔＩ和ＳａｃＩ限制性酶切位点,去除了原基因５‘端非翻译区序列,并进一步定点突变了基因内存存在的ＥｃｏＲＩ位点。     

植物抗真菌和细菌病害的基因工程

随着植物分子生物学的迅猛发展和对寄主－病原菌相互作用的深入了解，植物抗病菌基因工程策略不断出现。本文从以下两方面评述了目前植物抗真菌和细菌病害的基因工程策略研究进展：（１）调控寄主－病原相互识别和信号传递系统表达介导的抗性；（２）调控防卫反应基因和外源抗菌基因表达介导的抗性。     

植物蛋白酶抑制剂抗虫基因工程研究现状与对策研究

植物蛋白酶抑制剂基因作为一种抗虫基因,具有广泛的抗虫谱,并且与其他抗虫基因相比具有很大的优势。文章基于蛋白酶抑制剂的研究现状,分析蛋白酶抑制剂抗虫基因工程中存在的各种问题,提出了相应的解决方法。     

水稻抗病基因工程研究进展

简要综述了水稻(Oryaa sativa)抗病性的分子生物学机制。着重从抗病基因、防卫反应基因、植保素代谢、抗菌肽及病毒基因组组分的利用等方面综述了水稻抗真菌、细菌和病毒病害基因工程研究的现状及其进展。     

Bt毒蛋白抗虫植物基因工程研究（综述）

本文简要回顾了苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因在抗虫植物基因工程研究中的进展情况。包括Ｂｔ基因分类,Ｂｔ基因的结构和特性,Ｂｔ毒蛋白的杀虫机理,昆虫对Ｂｔ产生抗性的机制以及抗虫转基因植物的研究,并对其农业生产上的应用进行了展望。     

抗青枯病转群体感应猝灭基因烟草的培育

利用具有猝灭青枯菌群体感应信号分子功能的aac基因构建高效植物表达载体,通过农杆菌介导的方法转化烟草,获得了卡那霉素抗性植株57株。经PCR及RT-PCR检测,筛选得到30株阳性转基因再生苗,并证实了目的基因已经整合到烟草基因组中,且在转录水平上得到表达。转基因植株苗期抗青枯病试验表明,16天后转基因烟草较对照植株病情指数降低了51,相对病情指数为56.5％。     

植物表达载体构建和转基因烟草抗除草剂及耐盐性的分析*

利用基因重组,将来自于拟南芥（Arabidopsis thaliana)的发生单个碱基突变的als基因插入含有AtNHXI1基因的质粒pCAMBIA1300中,由CaMV35S启动子分别启动AtNHX1和als的表达,得到了兼有除草剂抗性基因和耐盐相关基因的植物表达载体。用烟草叶盘转化法获得了转基因植株。Southern杂交检测表明,外源基因已经整合到烟草(Nicotiana tobacum)基因组中。抗性测定发现,转基因植株除草剂抗性至少提高了1000倍,而耐盐性提高了约1．0％NaCl浓度,即带有同样启动子的不同外源基因赋予转基因植株的抗性程度有明显差异。     

激发子隐地蛋白基因介导的烟草抗病性研究

摘要：从隐地疫霉（Phytophthora cryptogea）中克隆cryptogein（Crypt）激发子基因。针对病原菌侵染和Crypt基因的特点，选用能在根、茎、叶等的表皮细胞中特异性表达的、弱组成型并受病原菌诱导的水稻(Oryza sativa )苯丙氨酸解氨酶基因（PAL）的启动子；同时为了使表达的cryptogein蛋白能分泌到细胞外，更好地与植物细胞膜受体互作，在Crypt基因前还融合了病程相关蛋白PR1b的信号肽; 然后将此融合基因构建于植物表达载体CHF3中。通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefancens)介导的叶盘转化法转入烟草(Nicotiana tabacum )。经卡那霉素抗性筛选获22株再生植株，PCR检测都为阳性，部分植株的Southern杂交结果表明,Crypt基因已以低拷贝（1～2个）整合到烟草基因组中。抗病性测定结果表明,转化植株对烟草黑胫病菌(P. parasitica var. nicotianae )、赤星病菌(Alternaria alternata )和野火病菌(Pseudomonas syringae pv. tabaci )的抗性均有提高。     

烟草病毒研究现状与展望

简述了烟草病毒主要种类、最新分类地位、鉴定与检测技术、抗病毒基因工程等方面研究进展,并展望了烟草病毒病检测技术、抗病毒制剂研制与开发以及烟草抗病毒基因工程技术等方面研究发展趋势。指出应加强用于烟草病毒诊断与检测的试剂盒研究及开发。     

人溶菌酶基因在烟草中的表达

根据植物偏爱的密码子，改变G＋C总量和密码子第三位碱基的G＋C含量，同时避免在真核表达中影响转录，翻译及mRNA稳定性的序列如AATTAAA和ATTTA，在原氨基酸序列不变的基础上，设计并合成了适合在植物中中高效表达的人溶菌酶(human lysozyme,简单HL）基因。构建了含HL基因的植物表达载体。用根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens)介导法将其转化烟草（Nicotiana tabacum).PCR和Western检测表明，HL基因在转基因烟草中得到整合和表达，提高了转基因烟草离体叶对野火病（Pseudomonas syringaepv.tabaci)的抗性。     

基因工程技术在烟草研究中的应用现状与展望

介绍转基因、RAPD分子标记、基因芯片、mRNA差异显示以及蛋白质组学等基因工程技术在烟草中的应用,指出这些技术不仅在烟草遗传图谱建立、系统分析、物种及品系的鉴定、转基因烟草鉴定和检测等方面发挥着重要作用,而且在改善烟草品质和建立烟草基因组学方面也有广阔的应用前景,并从抗病性、抗虫性、抗旱性、抗除草剂等方面介绍了基因工程技术在烟草抗逆性中的研究现状,对转基因烟草的安全性问题进行了探讨。     

海岛棉 GbRac1基因过量表达提高转基因烟草离体叶片对赤星病的抗性

利用简并引物PCR和3’RACE，克隆了海岛棉(Gossypium barbadense)GbRac1的编码基因。Northern—blot分析表明，海岛棉GbRac1基因在转录水平上受棉花黄萎病菌(Verticillium dehliae)的诱导，诱导后mRNA表达量显著增加。构建组成型植物表达载体pRac，转化烟草(Nicotiana tabacum)品种NC89，离体叶片抗病性鉴定表明，转GbRac1基因烟草对烟草赤星病(Altemaria altemata)的抗性明显提高。这暗示GbRac1在植物抗病基因工程中具有潜在的应用价值。     

琼脂床在烟草种子发芽势（率）检验中的应用

摘要：为实现琼脂床代替纸床运用于烟草种子发芽势和发芽率的检验。以K326、云烟87和南江3号的裸种、引发种子和包衣种子为试验材料,采用梯度浓度的琼脂培养基制备发芽床,进行种子检验试验。结果表明：当琼脂浓度为0.55%时,琼脂床上的烟草种子萌发显著早于纸床（p<0.05）。当琼脂浓度大于1.65%时,裸种在9 d后,包衣种在10 d后,幼苗会出现萎蔫现象;在0.8%和1.1%的琼脂床上,3个品种3种类型种子发芽势和发芽率与传统纸床检验结果均无显著差异（p<0.05）。另外与传统纸床相比,琼脂床保水性好,在整个检验周期内无需再次补水,琼脂床吸附性较好,便于烟草种子点播,在轻微震动下种子也不易滚动,所以预先摆好的苗床不易被破坏,便于计数。     

RNA干扰在植物抗根结线虫病基因工程应用中的研究进展

植物根结线虫病对农业生产的危害连年加重,以轮作和化学农药为主的传统防治难以满足现代农业生产的需要。以常规的抗性育种和表达外源蛋白为主的抗线虫转基因育种主要受限于抗性基因的匮乏。而近来RNA干扰技术的应用为抗线虫基因工程带来新的突破,通过构建RNA干扰载体,在转基因植物中表达寄生线虫重要基因的dsRNA或siRNA,并经口针取食被导入线虫体内,并引发线虫的系统性RNA干扰反应,导致其出现寄生、发育、代谢、运动等障碍甚至致死,从而使转基因植物实现对寄生线虫的抗性。本文综述了RNAi介导的抗根结线虫基因工程方面的研究进展,分析探讨了这种新的策略的特点并展望了它的应用前景。     

植物铝抗性基因及抗铝毒基因工程研究进展

酸性土壤占世界可耕作土壤的30％,而铝毒是酸性土壤中植物生长和作物生产的主要限制因素.近年来,在植物中鉴定了一系列抗铝基因,如有机酸通道蛋白基因(ALMT1和MATE),ABC通道蛋白基因(STAR1和STAR2)和转录因子基因(STOP1和ART1).通过基因工程手段在植物中过表达有机酸通道蛋白基因、有机酸代谢酶基因和其他铝胁迫响应基因均获得了很大的进展.本文综述了植物抗铝基因的克隆与鉴定,以及通过遗传操作提高植物的抗铝能力.     

埃及伊蚊TMOF同源基因表达载体构建及烟草转化

胰蛋白酶调节抑制因子（Trypsin-modulating oostatic factor, TMOF）可以有效地抑制昆虫中肠胰蛋白酶的活性。本文为了研究埃及伊蚊TMOF同源物基因在转基因植物广谱抗虫中的作用,利用人工合成的Aea-TMOF同源物基因,以改造过的pCAMBIA1301质粒为基本载体,构建了由组成型CaMV35S启动子驱动Aea-TMOF基因的植物表达载体pCAMBIA1301+ Aea-TMOF。然后,采用冻融法转入农杆菌LBA4404菌株,通过叶盘法对烟草进行了遗传转化。经PCR和GUS染色检测,Aea-TMOF同源物基因已整合到烟草基因组中。     

抗稻瘟病（Piricularia oryzae）水稻突变体R917的诱发和筛选研究

用６０Ｃｏγ射线１０ｋｒａｄ处理城特２３２／秀水３７Ｆ０代水稻干种子，经稻瘟病病区多代筛选，培育成抗病突变体Ｒ９１７。１９９１、１９９２年经全省９个稻疾病病圃联合鉴定，抗性分别为０．８９和１．０级。１９９２年经太湖稻区搜集的７个稻瘟病菌群中１３８个菌株接种鉴定，Ｒ９１７杭其中１３６个菌株，抗病频率为９８．５５％，双亲对其中的１９个菌株均为感，而Ｒ９１７为抗。试验表明，Ｒ９１７是一个抗稻瘟病强，抗谱广的水稻突变体，可作为水稻品种改良的新抗源。