山羊卵母细胞体外成熟培养液体积筛选

研究在一定卵丘-卵母细胞复合体(COCs)与培养液体积比例条件下,不同体积的培养液对山羊卵母细胞体外成熟的影响。按照COCs 1枚/4μL培养液的比例,采用5种不同体积的培养液,即50,100,250,500和1 000μL,对山羊卵母细胞进行体外成熟培养和孤雌激活。结果:100μL和250μL两组的卵母细胞体外成熟培养24 h后,其卵母细胞成熟率分别为78.10%和74.62%,差异不显著(P>0.05),但高于50μL组(P<0.05)、500μL组(P<0.05)和1 000μL组(P<0.01)组。100μL组孤雌激活胚胎的卵裂率(68.37%)、桑葚胚率(48.78%)和囊胚率(27.61%)都优于其他各组,其卵裂率和囊胚率与250μL组相比差异不显著(P>0.05)。结果表明采用COCs 1枚/4μL培养液的比例条件下培养卵母细胞,宜选用100～250μL范围内的培养液体积进行卵母细胞成熟培养,其卵母细胞体外成熟率可以达到78.10%左右。     

不同采集方法和不同培养液对辽宁绒山羊卵母细胞体外成熟的影响

为了获取高质量的卵泡卵母细胞,提高绒山羊体外胚胎生产的效率,试验采用切割法和抽吸法采集卵泡卵母细胞,并对获得的可用卵母细胞进行体外成熟培养。结果表明:采用切割法可以得到较多的可用卵母细胞,用于体外成熟的卵母细胞数明显增加;39.0℃条件下10%胎牛血清(FCS)的M199培养液成熟率为78.57%,而10 mg/mL牛血清白蛋白(BSA)的M199培养液成熟率为74.07%,且差异不显著(P>0.05)。     

不同收集方法及添加半胱氨酸、肝素钠对黄牛卵母细胞体外成熟及发育的影响

试验旨在研究不同卵母细胞收集方法及添加半胱氨酸、肝素钠对黄牛卵母细胞体外成熟及体外受精的影响。以黄牛为研究对象,采用两种方法（抽卵法和割卵法）抽取卵泡中的卵母细胞,比较两种方法获取的卵母细胞成熟率,结果发现,抽卵法获得的卵母细胞成熟率显著高于割卵法（P<0.05）。将获取的卵母细胞分为4组：A组（对照组,只添加基础成熟培养液）、B组（基础成熟培养液+200 μmol/L半胱氨酸）、C组（基础成熟培养液+20 μg/mL肝素钠）、D组（基础成熟培养液+200 μmol/L半胱氨酸+20 μg/mL肝素钠）,结果发现,D组的卵母细胞成熟率显著高于A、B、C组（P<0.05）,B、C组间卵母细胞成熟率无显著差异（P>0.05）,但两组卵母细胞成熟率均显著高于A组（P<0.05）;A组卵母细胞卵裂率均显著低于B、C、D组（P<0.05）,B、C、D组间卵母细胞卵裂率无显著差异（P>0.05）;D组囊胚率显著高于其他3组（P<0.05）。结果表明,抽卵法获得卵母细胞效率显著高于割卵法,肝素钠及半胱氨酸对黄牛卵母细胞体外成熟和体外受精都有促进作用,且同时添加两种物质对体外成熟的效果更佳。     

细胞因子与激素对山羊卵母细胞体外成熟及卵裂的影响

本试验研究了在培养液中添加不同浓度的GDNF、LIF、SCF及其不同组合对山羊卵母细胞体外成熟与卵裂的影响。结果表明:GDNF、LIF、SCF对山羊卵母细胞体外成熟有极显著影响(P<0.01),不同浓度间无显著影响(P>0.05),添加LIF卵母细胞体外成熟率极显著高于GDNF、SCF(P<0.01),添加GDNF、LIF对卵裂率有显著影响(P<0.05),添加SCF对卵裂率无影响(P>0.05);GDN+LIF+SCF组和GD-NF+LIF组卵母细胞成熟率极显著高于LIF+SCF和GDNF+SCF组(P<0.01),添加GDNF+SCF和LIF+SCF对卵母细胞体外成熟率无显著差异,可见,LIF和GDNF对山羊卵母细胞体外成熟有协同作用。胚胎的早期发育上GDNF+LIF+SCF组优于GDNF+LIF组优于LIF+SCF也优于GDNF+SCF,均能显著提高卵裂率。     

马卵母细胞胞质内精子注射后体外发育能力的研究

本研究在非繁殖季节评估卵丘形态(松散型、致密型)、成熟培养体系(TCM 199、NCSU 23)、体外成熟时间(34、38 h)和离子霉素结合6-DMAP激活对马卵母细胞胞质内精子注射(ICSI)后体外发育能力的影响。从屠宰场采集马卵巢,获得的卵母细胞进行体外成熟,然后注射马冷冻解冻精液,统计分裂情况。试验结果表明,①马松散型卵母细胞成熟率显著高于致密型卵母细胞(P<0.05),分别为61.09%和41.24%,但ICSI后36 h分裂率无显著差异(P>0.05),分别为47.34%和44.92%;②两种培养体系对马松散型或致密型卵母细胞成熟率及ICSI后36 h分裂率无显著影响(P>0.05),但相同成熟体系培养松散型卵母细胞成熟率均显著高于致密型卵母细胞(P<0.05),然而ICSI后36 h分裂率差异不显著(P>0.05);③松散型或致密型卵母细胞在TCM 199或NCSU 23中成熟38 h成熟率均高于34 h成熟率,分别为44.43%～68.87%和34.52%～58.90%,松散型卵母细胞在TCM 199体系中成熟34 h、ICSI后激活组或对照组的分裂率显著高于成熟38 h、ICSI后激活组的分裂率(P<0.05),以及致密型卵母细胞在TCM 199体系中成熟34 h、ICSI后激活组的分裂率(P<0.05),而且显著高于松散型卵母细胞在NCSU 23体系中成熟38 h、ICSI后对照组的分裂率(P<0.05);④ICSI后用离子霉素结合6-DMAP激活对马卵母细胞ICSI后36 h分裂无显著影响(P>0.05)。因此,马松散型和致密型卵母细胞的成熟能力存在差异,TCM 199和NCSU 23成熟体系对这2种类型卵母细胞的发育能力无显著影响(P>0.05),马卵母细胞成熟38 h成熟率高于34 h成熟率,TCM 199成熟体系培养松散型卵母细胞34 h进行ICSI后的分裂率最高。离子霉素结合6-DMAP激活对TCM 199或NCSU 23体系成熟马卵母细胞ICSI后的体外发育能力无显著影响(P>0.05)。     

甘草酸单铵盐对猪卵母细胞体外成熟及胚胎发育能力的影响

将收集的猪COCs置于添加不同浓度(0.0,0.3,0.6,1.2μmol/L)甘草酸单铵盐(monoammonium glycyrrhizinate, MAG)的卵母细胞体外成熟培养液中培养46 h,统计成熟率，通过免疫荧光染色检测成熟卵母细胞ROS表达水平；对成熟卵母细胞体外受精，于胚胎培养液内体外培养48,120 h,分别统计体外受精胚胎卵裂率、囊胚率，并用Hochest荧光染色检测囊胚总细胞数；结合成熟率及IVF胚胎发育囊胚率选定最佳添加浓度，在体外成熟培养液中添加最适浓度MAG,以0μmol/L MAG为对照组，体外培养46 h后，利用免疫荧光染色检测猪成熟卵母细胞的线粒体膜电位水平和细胞凋亡水平。结果显示，与对照组相比，不同浓度MAG处理组猪卵母细胞体外成熟率均有所提高，但差异均不显著(P>0.05);不同浓度MAG添加均可降低猪卵母细胞ROS水平，与对照组相比，0.3,0.6μmol/L组差异显著(P<0.05),1.2μmol/L组差异极显著(P<0.01)。0.3μmol/L添加组显著提高了猪体外受精囊胚率(P<0.05),但不同MAG添加组对...     

不同培养液及不同培养时间对犬卵母细胞体外成熟的影响

试验采集犬卵巢,用切割法回收卵泡中的卵母细胞,选取胞质均匀、2层或2层以上颗粒细胞、直径≥110μm的卵母细胞移入不同的培养液中:(A)M199+10%FBS+0.5μg/mL FSH+10 IU/mL hCG,(B)M199+0.1%PVA进行体外成熟培养。在培养不同时间(0,48,72 h)用1%醋酸地衣红染色,在显微镜下观察卵母细胞核成熟情况,探索适宜犬卵母细胞体外成熟的培养体系。结果表明:卵母细胞在A液中培养48 h MII期比例(7.84%)高于B液中的比例(P<0.01);在培养72 h MII期比例也是A液中(8.00%)高于B液,虽然二者差异不显著(P>0.05),但72 h卵母细胞退化比例高于48 h(P<0.01)。因此培养液中添加FBS,FSH和hCG有利于犬卵母细胞体外成熟,且在此培养液中培养48 h为最佳成熟时间。     

不同收集方法及添加半胱氨酸、肝素钠对黄牛卵母细胞体外成熟及发育的影响

试验旨在研究不同卵母细胞收集方法及添加半胱氨酸、肝素钠对黄牛卵母细胞体外成熟及体外受精的影响。以黄牛为研究对象,采用两种方法(抽卵法和割卵法)抽取卵泡中的卵母细胞,比较两种方法获取的卵母细胞成熟率,结果发现,抽卵法获得的卵母细胞成熟率显著高于割卵法(P0.05)。将获取的卵母细胞分为4组:A组(对照组,只添加基础成熟培养液)、B组(基础成熟培养液+200μmol/L半胱氨酸)、C组(基础成熟培养液+20μg/mL肝素钠)、D组(基础成熟培养液+200μmol/L半胱氨酸+20μg/mL肝素钠),结果发现,D组的卵母细胞成熟率显著高于A、B、C组(P0.05),B、C组间卵母细胞成熟率无显著差异(P0.05),但两组卵母细胞成熟率均显著高于A组(P0.05);A组卵母细胞卵裂率均显著低于B、C、D组(P0.05),B、C、D组间卵母细胞卵裂率无显著差异(P0.05);D组囊胚率显著高于其他3组(P0.05)。结果表明,抽卵法获得卵母细胞效率显著高于割卵法,肝素钠及半胱氨酸对黄牛卵母细胞体外成熟和体外受精都有促进作用,且同时添加两种物质对体外成熟的效果更佳。     

EGF和IGF-1对山羊卵母细胞体外成熟的影响

研究了在培养液中添加不同浓度的EGF、IGF-1以及EGF联合IGF-1对山羊有腔卵母细胞体外成熟的影响。结果表明: (1)10, 20, 30μg/LEGF对山羊卵母细胞体外成熟无显著影响(P>0.05)。(2) 10μg/L的IGF-1对山羊卵母细胞体外成熟无显著影响(P>0.05); 20, 30μg/L的IGF-1能显著提高山羊卵母细胞体外成熟率 (P<0.05)。(3)添加 10μg/LEGF+20μg/LIGF-1组卵母细胞体外成熟率显著高于添加 20μg/L的IGF-1组(P<0.05),极显著高于添加 10μg/LEGF组和对照组(P<0.01)。可见,EGF和IGF-1对山羊卵母细胞体外成熟有协同作用。     

兔卵母细胞体外成熟培养影响因素的研究

试验旨在探讨卵丘细胞包裹层数、表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)对兔卵母细胞体外成熟培养的影响。分别采用切割法和针刺挤压法取母兔卵巢表面的卵丘卵母细胞复合体(cumulus oocyte complexes,COCS),将获取的COCS在基础培养液中添加不同浓度表皮生长因子(0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、30ng/mL)及不同浓度的谷胱甘肽(0μmol/mL、0.5μmol/mL、1.0μmol/mL、1.5μmol/mL、2.0μmol/mL)进行体外成熟培养并观察第一极体排出率。结果表明:①手术刀切割法和针刺挤压法平均回收卵母细胞率分别为(22.83、39.29)枚,针刺挤压法显著高于手术刀切割法(P<0.05)。②3层以上卵丘细胞包裹的卵母细胞体外成熟率为81.27%,显著高于1~3层卵丘细胞包裹的体外成熟率63.75%和裸卵细胞体外成熟率23.45%(P<0.05)。③添加20ng/mL的EGF对兔卵母细胞体外成熟培养后成熟率为82.14%,效果最好,且显著高于对照组10ng/mL和30ng/mL EGF组(P<0.05)。④添加不同浓度的谷胱甘肽可以促进和提高兔卵母细胞体外成熟率,其中添加1.0μmol/mL的谷胱甘肽时,卵母细胞成熟率为71.44%,与添加1.5μmol/mL组的相比差异不显著(P>0.05),但显著高于其他组(P<0.05)。结论为添加20ng/mL的EGF和1.0μmol/mL谷胱甘肽,对用针刺挤压法获得3层以上卵丘细胞包裹的兔卵母细胞体外培养效果最佳。     

水牛卵母细胞的体外受精及其胚胎发育的研究

本研究比较了不同来源的水牛卵母细胞的体外受精及其胚胎发育。对10头摩拉母水牛连续6周进行活体采卵,共采集292枚卵母细胞,头均回收卵母细胞4.87枚,头均A级卵数为3.07枚,从屠宰场收集74头水牛卵巢共采集559枚卵母细胞,头均回收卵母细胞和A级卵母细胞分别为7.55枚和5.20枚,均显著高于活体采集的水牛卵母细胞(P<0.01)。将收集的AB级水牛卵母细胞在相同的条件下进行体外成熟、体外受精和体外培养至囊胚。结果表明,活体采卵组和屠宰水牛卵母细胞组受精分裂率差异不显著,分别为54.81%和57.73%。屠宰水牛卵母细胞组的囊胚率则高于活体采卵组(28.78%vs21.34%,P<0.05)。利用两组的胚胎进行常规法冷冻保存,冻胚解冻后的存活率差异不显著(P>0.05)。     

绵羊卵丘细胞对裸卵体外成熟及孤雌发育影响的研究

本研究探讨绵羊卵丘细胞对裸卵体外成熟和后期发育的影响。实验分为4组,对照组为卵丘-卵母细胞复合体(COCs);裸卵(DO)组;COCs与DO共培养组(CODO);卵丘细胞(CC)与DO共培养组(CCDO)。体外成熟培养18 h后,检测各组卵子成熟质量并进行孤雌发育研究。结果表明:CODO和CCDO组中裸卵活率显著高于DO组(P<0.05),但显著低于COCs组(P<0.05),且COCs组中卵子活率极显著高于DO组(P<0.01);在极体排出率方面,CODO、CCDO和DO3组差异不显著(P>0.05),但是它们都显著低于COCs组(P<0.05)。COCs、CODO、CCDO和DO 4组卵裂率差异均不显著(P>0.05)。然而,DO组的囊胚率显著低于CODO和CCDO组(P<0.05),极显著低于COCs组(P<0.01),但CODO和CCDO 2组中裸卵的囊胚率差异不显著(P>0.05)。总之,无论散在的卵丘细胞还是COCs均能提高裸卵体外成熟及后期发育潜力。     

日龄对幼龄兔超数排卵及卵母细胞体外培养的影响

对不同日龄的幼龄兔实施超数排卵处理,并进行卵母细胞体外成熟及体外受精培养。结果表明:最早可进行超数排卵的幼龄兔为50日龄,但60日龄兔的超数排卵效果显著优于50日龄兔(P<0.05)、70日龄兔(P>0.05);70日龄兔的卵母细胞总成熟率显著高于50日龄兔(P<0.05),60日龄兔的卵母细胞总成熟率略高于50日龄兔,并低于70日龄兔,但差异均不显著(P>0.05);70日龄兔的卵母细胞总受精率高于60日龄兔,60日龄和70日龄的卵母细胞总受精率均高于50日龄,差异均不显著(P>0.05)。     

FSH对绵羊卵母细胞体外发育能力的影响

为了探讨绵羊卵母细胞体外成熟过程中促卵泡素(FSH)的适宜添加量,试验将FSH分为0.01,0.02,0.03 IU/mL 3个浓度梯度,用于绵羊卵母细胞的体外成熟与体外受精,统计第一极体排出率、卵裂率和囊胚率。结果表明:不同浓度FSH对第一极体排出率影响差异不显著(P>0.05),体外受精后以0.02 IU/mL组效果最好,卵裂率显著高于0.03 IU/mL组(P<0.05),但与0.01 IU/mL组相比差异不显著(P>0.05);0.02 IU/mL组囊胚率与其他2组相比显著升高(P<0.05)。     

不同培养液对牛卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响

为研究表皮生长因子(EGF)、β-巯基乙醇(β-ME)、亚硫磺酸(HTAU)对牛卵母细胞体外成熟(IVM)及孤雌激活胚胎体外发育(IVC)效果的影响,实验采集牛卵巢采用切割法收集卵丘-卵母细胞复合体(COCs)随机处于不同浓度EGF、β-ME培养液成熟培养24 h后孤雌激活,研究其在不同胚胎培养液中的后续发育,以期筛选出最好的牛卵母细胞IVM-IVC条件。结果表明:添加25、50、100 ng/mL EGF组的成熟率、卵裂率均高于对照组,其中50 ng/mL EGF组的成熟率、卵裂率与对照组差异显著(P<0.05);50、100、500μmol/L的β-ME对牛卵母细胞体外成熟没有促进作用;50 ng/mL EGF与50、100μmol/Lβ-ME组合并无协同作用;胚胎培养基中添加不同浓度EGF对早期胚胎的体外发育无显著影响;而添加100μmol/Lβ-ME组的囊胚率、囊胚细胞数均极显著高于对照组(P<0.01);在成熟液中添加50 ng/mL EGF和100μmol/Lβ-ME、胚胎培养液中添加0.5 mmol/L HTAU孤雌胚发育最好。     

影响辽宁绒山羊母羔胚胎体外生产因素的研究

比较了PMSG+FSH、FSH+PMSG超排方法对超排效果与胚胎发育的影响,EGF对卵母细胞成熟及胚胎发育的影响,以及TALP、SOF受精体系对胚胎发育的影响。结果表明:PMSG+FSH法超排后的卵裂率、囊胚率极显著高于FSH+PMSG法(P<0.01),但超排卵母细胞数差异不显著(P>0.05);成熟液添加20 ng/mL EGF组极体率、囊胚率显著高于对照组(P<0.05),卵裂率差异不显著(P>0.05);SOF受精体系卵裂率显著高于TALP(P<0.05),囊胚率极显著高于TALP(P<0.01)。     

绵羊裸卵与卵丘-卵母细胞共培养对体外成熟及孤雌发育的影响

本研究探讨了在绵羊卵母细胞体外成熟过程中裸卵(DO)与卵丘-卵母细胞复合体(COCs)共培养对成熟质量及后期发育的影响。试验分3组:对照组(COCs);COCs与DO共培养组(CODO)和裸卵组(DO)。结果表明:对照组中COCs与CODO组中COCs的活率和极体排出率差异均不显著(P>0.05),而CODO组中COCs的极体排出率却显著高于该组中的裸卵(P<0.05);CODO组中裸卵与DO组中裸卵在极体率方面差异不显著(P>0.05),但在活率方面CODO组中的裸卵却显著高于DO组(P<0.05)。虽然3组卵裂率之间差异均不显著(P>0.05),而就囊胚率而言,对照组中COCs与CODO组中COCs之间囊胚率差异不显著(P>0.05),但都显著高于CODO和DO 2组中的裸卵(P<0.05);此外,DO组裸卵的囊胚率显著低于CODO组中的裸卵(P<0.05)。总之,在体外成熟共培养过程中,裸卵对COCs的成熟和后期发育影响不大;而COCs则可以显著提高裸卵的成熟率和后期发育潜力。     

猪卵母细胞的体外成熟影响因素的研究

本试验研究了猪卵母细胞的体外成熟体系，着重研究了季节因素、FCS、pFF、胰岛素和17β-E₂对猪卵母细胞体外成熟的影响。结果表明：①3月~4月和10月~11月卵母细胞成熟率最高，与其它月份相比差异显著（P<0.05）；②卵泡期卵母细胞成熟率和卵裂率均显著高于黄体期；③添加10%FCS、10% pFF、20% FCS和10% FCS+10% pFF的卵裂率差异不显著（P>0.05），添加10% FCS或10% pFF的成熟率差异不显著，与添加20% FCS或10% FCS+10% pFF成熟率差异显著；④培养液中添加一定量的胰岛素和17β-E₂有助于提高成熟率和卵裂率。     

牦牛卵母细胞的体外成熟、种间受精与胚胎培养

探讨了卵母细胞体外成熟时间、卵母细胞质量、精子准备和受精卵培养体系对牦牛卵母细胞种间体外受精效果的影响。结果表明:牦牛卵母细胞随体外成熟培养时间延长,第一极体排出率增加,囊胚发育率以成熟培养24 h最高;A级卵母细胞种间受精后囊胚的发育率(48.77±3.76)%显著高于B级(32.05±5.24)%和C级(7.54±7.18)%(P<0.05);BO液洗涤离心处理的精子受精后卵裂率(82.53±6.54)%显著高于Percoll液分离精子受精后的卵裂率(67.39±4.50)%(P<0.05),而两者囊胚率差异不显著((42.32±4.13)%vs(35.59±5.62)%,P>0.05);荷斯坦奶牛精子浓度在1×106～5×106/mL范围与牦牛卵母细胞受精效果差异不显著。卵丘细胞、输卵管上皮细胞共培养和SOF液培养种间受精卵,其卵裂率差异不显著,但共培养组的桑葚胚、囊胚和孵化胚发育率均显著高于SOF液培养组。     

不同采卵方法及卵巢所处性周期阶段对绵羊卵母细胞体外成熟的影响

本试验主要从采集方法和性周期阶段2方面对绵羊卵母细胞体外成熟的影响进行了探讨。结果表明：不同采卵方法的采卵效果存在差异，卵裂率切割法显著高于抽吸法(27.9%，49.5%；P<0.05)；A、B级卵母细胞成熟率极显著高于C级(75.3%，64.4%，29.1%，P<0.01)，卵裂率A、B级均显著高于C级(42.5%，35.8%，16.0%，P<0.05)；从卵泡期和黄体期卵巢采集到的卵母细胞的体外成熟率和卵裂率分别为66.7%、62.9%；38.2%、34.4%，没有显著差异 (P>0.05)。