云南苹果园根际真菌的分离与鉴定

为了弄清云南苹果产区根际真菌种群与分布,从云南主要苹果产区的6个市(县)采集根部病害样品,观察并记录其在田间的危害症状,采用组织分离法分离与纯化获得200份真菌分离物,利用真菌ITS通用引物进行PCR扩增和测序并与序列BLAST比对,同时结合真菌形态分析鉴定分离获得的真菌属种。研究表明,云南苹果根际真菌包含有致病菌、有益拮抗真菌、腐生菌、内生真菌与环境代谢真菌等几种类型。在分离获得的真菌分离物中,根腐病致病菌和拮抗真菌占大部分,分离率分别为31.15%和22.11%,其次为果实病害的致病菌,分离率为8.04%,叶部病害的致病菌分离率为7.04%,腐生菌种群分离率为4.02%,枝干病害的致病菌分离率为2.5%,内生真菌粉红螺旋聚孢霉分离率为1%,木质纤维素降解真菌粗糙脉孢菌分离率为0.5%。此外,研究发现一些功能尚无研究的根际真菌。根腐病优势致病菌尖孢镰刀菌分布于马龙、泸西,具有较高检出率,宁蒗次之,其余果园没有检测出此菌;腐皮镰刀菌仅分布在宁蒗、泸西与丽江;引起苹果轮纹病和苹果枝干溃疡病的葡萄座腔菌分布于马龙、昭通、泸西;属于拮抗性真菌的木霉属和毛霉属真菌在云南苹果产区分布广泛。研究推断苹果园根际微生物存在致病菌与生物防治菌之间的互相对抗与斗争。根际腐生,功能不明的微生物需要进一步研究明确。     

对三种苹果病原菌具抑制作用的新疆野苹果内生真菌的分离与鉴定

【目的】通过分离鉴定对苹果枝干病害有抑制作用的新疆野苹果枝干内生真菌,为苹果病害生物防治提供新型菌种资源。【方法】采用组织分离法从新疆野苹果枝干中分离内生真菌,平板对峙试验筛选对苹果树3种致病菌均具有显著抑菌作用的菌株,结合形态学、分子生物学分析,确定菌株的分类地位。【结果】共分离获得内生真菌75株,从其中筛选出对苹果树3种病原菌均具较强抑菌作用的菌株5株(E-m6、S-p5、S-m2、S-p6、E-p5)。对葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea的最高抑菌率为73.39%,对胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides的最高抑菌率为73.52%,对苹果拟茎点霉Phomopsis mali的最高抑菌率为82.19%。结合形态学和ITS序列和TUB基因序列分析,菌株E-m6和S-p5为黑曲霉Aspergillus niger,S-m2为黄曲霉Aspergillus flavus,S-p6为Rosellinia sp.,E-p5为球毛壳菌Chaetomium globosum。【结论】从新疆野苹果枝条中筛选出具生防潜力的内生真菌菌株5株,为苹果枝干病害的生物防治提供了新的微生物资源,同时也为新疆野苹果内生菌研究奠定了基础。     

草莓根腐病病原菌分离与鉴定

为了有效防控草莓根腐病,采用组织分离法,对徐州地区草莓根腐病病原菌进行分离与鉴定,分离、纯化后获取了5个真菌菌株,经形态学与分子生物学碱基序列测定结果比对发现：CMGF-1是胶孢炭疽菌或其亚种,CMGF-2和CMGF-3是棒孢拟盘多毛孢或其亚种,CMGF-4和CMGF-5是串珠镰刀菌或其亚种。黑根根腐的致病菌主要是镰刀菌和拟盘多毛孢菌,而红中柱根腐的致病菌是胶孢炭疽菌。     

洛阳地区牡丹根腐病病原菌的分离与鉴定

2016—2018年以洛阳地区不同牡丹种植地的根腐病株为试材,采用组织分离法进行根腐病病原菌的分离纯化,根据柯赫氏法则检测分离物的致病性,同时结合形态学特征和基因序列分析对具有致病性的分离物进行鉴定,以明确引起洛阳地区牡丹根腐病发病的主要病原菌种类。结果表明:从30份根腐病株中共分离获得15株病原分离物,离体致病性检测表明9株分离物具有显著致病性;根据形态学特征,初步鉴定9株致病分离物为镰刀菌属(Fusarium)真菌,rDNA-ITS序列和EF-1α基因序列分析表明其中7株致病分离物为茄病镰刀菌(Fusarium solani),2株致病分离物为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。因此,该研究结果初步表明茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌是引发洛阳地区牡丹根腐病的主要病原菌种类,2种病原菌复合侵染引起根腐病的发生,其中茄病镰刀菌为优势致病菌。     

云南泸西苹果病虫害调查与病原及害虫鉴定

云南红河州泸西县为云南重要的苹果新产区,调查鉴定泸西县苹果病虫害的发生情况,对泸西县的苹果病虫害防控,苹果产业发展具有重要意义。本研究系统调查和鉴定了云南红河州泸西县向阳乡习峨村、三塘乡、向阳乡沙马村等3个苹果产区的病虫害。通过室内病原显微观察,对真菌病原进行形态鉴定,应用RT-PCR检测技术与测序鉴定病毒,害虫形态鉴定。最终结果表明:云南泸西苹果病虫害共8种,其中真菌病害3种,有斑点落叶病、枝干轮纹病、褐斑病;病毒病害2种,有苹果茎沟病毒病、苹果花叶病毒病;虫害3种,蚜虫、蓟马和金纹细蛾3种虫害。其中斑点落叶病和褐斑病为主要病害,病毒病害其次,虫害发生率较小。其次通过调查与鉴定,否定了危险性病害苹果炭疽叶枯病在云南泸西的存在。     

猕猴桃根腐病根际土壤酶活性及真菌群落组成研究

分析猕猴桃根腐病感病植株和未感病植株根际土壤真菌群落差异,可为研究猕猴桃根腐病发生机制及其调控技术提供依据。在浙江省天台县街头镇的“红阳”猕猴桃种植基地,以树龄9年的猕猴桃根腐病感病植株和未感病植株根际土壤真菌为研究对象,对菌群ITS序列进行高通量测序注释后,对比分析了真菌群落结构与多样性指数的差异,并测定分析了根际土壤脲酶、蔗糖酶和酸性磷酸酶的活性。结果表明,猕猴桃根腐病的发生极显著地降低了根际土壤脲酶、蔗糖酶和磷酸酶的活性(p<0.01)。感病植株根际土壤真菌群落丰富度指数(Chao1)显著低于未感病植株根际土壤(p<0.05)。在门分类水平上,感病植株根际土壤真菌中相对丰度降低的有担子菌门、未分类真菌和接合菌门,其差异均为极显著(p<0.01);相对丰度升高的为子囊菌门,其差异达极显著水平(p<0.01)。在属分类水平上,感病植株根际土壤真菌相对丰度增加的有赤霉菌属、丛赤壳属、镰刀菌属、假裸囊菌属和肉座菌属,其差异均达极显著水平(p<0.01);相对丰度降低的有未分类伞菌纲、枝鼻菌属、粗糙孔菌属、线虫草属、支顶孢属、粪盘菌属、木霉属和被孢霉属,其差异...     

大理州“红阳”猕猴桃真菌性枝干的发生与病原鉴定

以大理州"红阳"猕猴桃枝干为试材,采用田间调查法调查病原菌对其危害状况,对采集的10份病样采用常规组织分离法分离病原,单孢纯化法获得病原菌,采用形态和分子法鉴定病原种类,以期明确大理州"红阳"猕猴桃枝干病害的发生状况及危害病原。结果表明:大理州"红阳"猕猴桃枝干病害发生严重,病株率高达69.6%,5个采样点共分离得到15个菌株,其中以链格孢菌(Alternaria alternata)、厚坦镰刀菌(Fusarium chlamydosporum)、小新壳梭孢菌(Neofusicoccum parvum)和间座壳属中一种(Diaporthe bohemiae)共4类病原菌出现频率最高,是优势种,分离率分别为55.6%、52.4%、49.8%和50.1%。利用柯赫氏法则对分离所得的所有菌株进行致病性测定,证实了优势菌株对猕猴桃茎杆的致病性,进一步明确了引起大理州猕猴桃茎杆的病原真菌。     

宁夏枸杞内生真菌的分离及多样性分析

以枸杞为试材,采用组织分离法从不同品种、不同部位的枸杞组织中进行内生真菌的分离,根据培养性状、菌落、孢子等的形态特征和rDNA-ITS序列分析对分离菌株进行鉴定;根据枸杞内生真菌的相对频率、物种多样性指数、丰富度指数和相似性系数分析其组成特点。结果表明:21份枸杞样品中共分离得到363株内生真菌,这些菌株分属于链格孢属(Alternaria)、曲霉属(Aspergillus)、双极霉属(Bipolaris)、毛壳菌属(Chaetomium)、枝孢属(Cladosporium)、镰刀菌属(Fusarium)、青霉菌属(Penicillium)、光黑壳属(Preussia)、裂壳菌属(Schizothecium)、粪壳菌属(Sordaria)、戴氏霉属(Taifanglania)、梭孢壳属(Thielavia)、火丝菌属(Tricharina)和炭角菌属(Xylaria)14个属,其中链格孢属(Alternaria)、梭孢壳属(Thielavia)和曲霉属(Aspeirgllus)为优势属,分别占分离菌数的46%、14%和13%。枸杞植株各器官都有内生真菌分布,其中,茎部内生真菌多样性指数最大,为0.86,且果与茎部的相似性系数最大。不同枸杞品种间内生真菌分布存在差异,"宁杞1号""宁杞2号"内生真菌多样性指数和丰富度指数远远高于黄果枸杞和黑果枸杞。内生真菌群落组成的相似性结果表明,部分内生真菌具有一定的宿主和组织偏好性。枸杞体内含有丰富的内生真菌资源,其内生真菌具有很高的宿主特异性,而且其分布受生境影响。     

新疆加工辣椒根腐病病原鉴定

以制干辣椒根腐病病样为分离对象,采用形态学和分子生物学方法对致病菌进行鉴定。结果表明:共采集根腐病样211个,从中分离获得161个分离物,其中镰刀菌Fusarium spp.121个,占总分离物的75.16%;其它菌40个,占24.84%,说明镰刀菌是新疆加工辣椒的主要致病菌。经致病性测定后,采用形态学观察结合18SrDNA-ITS、EF-1α和β?tubulin 3个序列分析,将80株有致病性的镰刀菌鉴定为尖孢镰刀菌(F.oxysporum)和茄病镰刀菌(F.solani),其中尖孢镰刀菌57株,占镰刀菌分离物的47.11%;茄病镰刀菌23株,占19.01%。     

西葫芦根腐病病原的鉴定

通过对所采集的西葫芦根腐病病株进行分离培养,共得到5种病原菌,分属于疫霉菌Phytophthora和镰刀菌Fusarium2个属。经致病性测定,确定引起西葫芦根腐病的主要致病菌为疫霉菌,镰刀菌对西葫芦根腐病的发生有加重作用。经鉴定该致病疫霉菌为烟草疫霉菌(Phytophthora nicotanae),主要致病镰刀菌为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。     

番荔枝根腐病病原菌的鉴定及其生防真菌的筛选

番荔枝根腐病是番荔枝的严重病害。在广东湛江番荔枝果园中,从病根中分离到了5种不同的真菌菌株,其中有致病力的3种:寄生疫霉(Phytophthoraparasitica)、棕榈疫霉(P.palmivora)、镰刀菌(Fusariumsp.),镰刀菌的致病力最强,寄生疫霉次之,棕榈疫霉的致病力较弱。致病力测定表明了以上二3种真菌菌株均有可能为湛江番荔枝根腐病的病原菌。分别以各病原菌为靶标,用对峙培养法,从果园健康番荔枝的根际土壤和果实、叶片筛选到了3个对上述病原物都有较强拮抗活性的生防菌株,经初步鉴定均为木霉菌(Trichodermasp.)。防效测定表明,这些拮抗菌株均有很好的防效,是极具开发潜能的生防菌株。     

苹果根腐病根际土壤真菌组成及多样性研究

【目的】探究苹果感染根腐病后根际土壤真菌群落组成、丰富度及多样性变化。【方法】以ITS5-1737F和ITS2-2043R为引物,对真菌ITS区进行扩增并利用Illumina Hiseq高通量测序技术进行测序,分析苹果根腐病病株及健康植株根际土壤真菌物种组成、丰度及α-多样性。【结果】通过高通量测序,患根腐病和健康根际土壤分别获得1 006、708个OTU,主要分为11个门,33个纲,148个科,263个属。病、健根际土壤真菌种群多样性、丰富度均存在显著性差异。患病土样中,子囊菌门相对丰度显著低于健康土样,Dothideomycetes纲相对丰度极显著低于健康土样,而Leotiomycetes、Eurotiomycetes纲相对丰度显著低于健康土样;已报道的与苹果根腐病相关的病原菌Fusarium、Rosellinia相对丰度高于健康土壤,但差异不显著;有益真菌Trichoderma相对丰度稍低于健康土样。【结论】苹果感染根腐病后,根际土壤的真菌物种多样性、群落多样性升高,物种均匀度下降。根腐病病原菌和有益真菌普遍分布在患病和健康根际土壤中。患病土样中,已报道的苹果根腐病病原菌高于健康土壤,而部分有益菌,如Trichoderma低于健康土壤,说明病原菌的略微积累和有益菌的略微下降,都可能打破根际土壤真菌群落的平衡,影响土壤的健康。     

宝丽安防治苹果霉心病田间药效试验

苹果霉心病主要由多种弱寄生菌如链格孢菌、粉红单端孢菌、镰刀菌和拟茎点菌等病菌引起,是苹果果实生长前期、采收期和贮藏期的主要病害之一。在豫西苹果产区,该病发生普遍,尤其是套袋苹果受害严重,据调查,2009年病果率达26.7%。宝丽安为生物药剂,为验证其防治效果,     

草莓根腐病菌拮抗细菌的分离与鉴定

 采用平板对峙法,从分离自土壤的436株细菌菌株中筛选对草莓根腐病菌——尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）具有拮抗作用的细菌,得到了3株稳定性好,具有较高拮抗活性的菌株w-25、w-79和w-181。拮抗菌w-25对尖孢镰刀菌的抑菌带达到11.0 mm,w-79和w-181的抑菌带分别达到5.4和6.4 mm。此外,3株拮抗菌对草莓灰霉病菌（Botrytis cinerea）、草莓红中柱致病菌（Fragria ananassa）和草莓胶孢炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）等具有很强的拮抗作用。经过对3株菌株形态观察、理化分析和分子鉴定,认为w-25可能为荧光假单孢菌（Pseudomonas fluorescens）,w-181和w-79可能为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。研究表明3株拮抗菌对致病菌生长有较好的抑制作用,显微观察发现拮抗菌代谢产物会破坏致病菌菌丝形态,电镜观察发现致病菌细胞器溶解,细胞内液泡变大。     

贮藏期苹果轮纹病拮抗菌的筛选研究

以苹果、姜、蒜为试材,采用对峙培养法研究了健康苹果果实、姜、蒜内的可培养内生细菌和健康苹果植株根际土壤微生物对苹果轮纹病的拮抗作用。结果表明:根际土壤中分离到可培养细菌9种,姜、蒜、苹果内分别分离到可培养菌株5种、3种和1种;对分离到的微生物进行拮抗性测定,除土2对苹果轮纹病菌菌丝生长无抑制效果外,其余菌株都对苹果轮纹病菌有抑菌效果,且从根际土壤中分离到的微生物对苹果轮纹病菌具有拮抗性的所占比例较大,为44.4%;其次为姜和蒜,所占比例分别为27.8%和16.7%。所有菌株中除蒜12,土1和土5与对照比较抑菌效果差异不显著外,其余菌株抑菌效果差异都显著。所有菌株中抑制效果最好的为姜4,其真菌菌落直径只有(30.78±0.49)mm,其次为土4,真菌菌落直径为(35.12±0.13)mm。     

枸杞根腐病防治试验

枸杞是茄目茄科枸杞属的多年生灌木,其根腐病的病原菌为茄类镰孢,属半知菌亚门真菌。该病是枸杞产区主要病虫害之一,危害严重,防治困难。本文通过选取病株,利用不同药剂组合,对枸杞根腐病株进行防治试验研究,试验结果表明,配方1、配方2、配方3可以防治枸杞根腐病,病株康复率分别达到97.70%、93.21%、47.87%。配方1、配方2可在枸杞生产中推广应用。     

基于高通量测序的猕猴桃根腐病根际土壤真菌群落研究

以猕猴桃根腐病根际土壤真菌群落为研究对象,通过高通量测序,研究猕猴桃根腐病感病植株与未感病植株根际土壤真菌群落结构的分布情况,为猕猴桃根腐病生物防治提供理论依据。结果表明,与未感病植株相比,猕猴桃植株感染根腐病后,其根际土壤真菌的群落结构和相对丰度发生了变化。在门分类水平上,感病植株根际土壤子囊菌门相对丰度较高,而接合菌门和担子菌门较低。在纲分类水平上,感病植株根际土壤粪壳菌纲相对丰度较高,伞菌纲、盘菌纲较低。在目分类水平上,感病植株根际土壤肉座菌目相对丰度较高,而Sordaihales, Trechnsporales、小壳菌目较低。在科分类水平上,感病植株根际土壤赤壳科相对丰度较高,而毛球壳科、囊菌科的较低。在属分类水平上,感病植株根际土壤的赤霉菌属、丛赤壳属相对丰度较高。     

果树烂根病病因及防治措施

果树烂根病包括白纹羽病、紫纹羽病、圆斑根腐病等几种 ,其中发病最严重的是圆斑根腐病 ,可危害苹果、梨、桃、葡萄、杏等树种 ,轻者造成果园大片萎蔫枯死 ,严重时全园毁灭。下面就圆斑根腐病的病原及发病原因进行分析 ,并提出相应的防治措施1　病原及发病症状　该病的病原菌有腐皮镰刀菌、尖孢镰刀菌及弯角镰刀菌 ,均属土壤习居菌 ,可在土壤中长期腐生存活 ,也可寄生于寄主植物上 ,当果树根系衰弱、根系环境不适时发病。发病初期须根先变褐枯死 ,然后扩展到与须根相连的侧根和主根 ,地上部症状在发芽后的 4、5月份开始出现 ,常见的有 :萎蔫…     

红果臭椿苗期病害致病菌的分离与鉴定

以感病红果臭椿幼苗病株为试材,采用形态学鉴定、分子生物学鉴定和致病性鉴定方法,研究了引起红果臭椿苗期病害致病菌的种类,以期为其苗期病害防治提供了有力的依据,从而提高红果臭椿的成活率,为园林绿化提供充足的苗源。结果表明:红果臭椿苗期病害有5种致病真菌,分别为木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)、腐皮镰刀菌(F.solani)、极细链格孢菌(Alternaria tenuissima)、球毛壳菌(Chaetomium globosum)和新棒孢拟盘多毛孢菌(Neopestalotiopsis clavispora),其中腐皮镰刀菌为主要致病菌。     

甜瓜多种真菌病害拮抗细菌NBmelon-1的鉴定及其促生和生防效果

从甜瓜根部分离纯化获得一株多粘类芽孢杆菌NBmelon-1,探究其对甜瓜及甜瓜病害的影响。采用平板对峙法对拮抗菌株筛选鉴定,发现对甜瓜多种真菌病害的病原菌均有抑制作用,例如尖孢镰刀菌甜瓜专化型(Fusarium oxysporum)、黑点根腐病菌(Monosporascus cannonballus)、蔓枯病菌(Didymalla bryoniae)、层生镰刀菌(F.proliferatum)、亚洲镰刀菌(F. asiaticum)和链格孢(Alternaria alternata)等;采用苗期灌根的方法,发现NBmelon-1对甜瓜幼苗的生长具有促生作用,甜瓜幼苗的茎粗、叶片大小、鲜质量与对照相比均有显著提高;盆栽实验表明,其对甜瓜枯萎病具有良好的生防潜力,相对防治效果为52.76%,可很好地防治甜瓜枯萎病。