猪瘟病毒Erns和E2蛋白重组表达及抗体间接ELISA检测方法的建立

本研究将CSFV Erns和E2基因的主要抗原区进行克隆,构建pET32a-Erns和pET32aEK-E2重组质粒,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达和纯化,以纯化的rErns、rE2重组蛋白为包被抗原,经条件优化,分别建立CSFV rErns和rE2抗体间接ELISA检测方法.SDS-PAGE结果显示,...     

经典猪瘟和非洲猪瘟的鉴别诊断

经典猪瘟和非洲猪瘟是由不同病毒引起猪只的高度接触性传染病,对养猪业危害极大。经典猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒引起猪发病的流行病学特征和临床症状有许多相似,也有许多不同点。在临床上对经典猪瘟和非洲猪瘟进行鉴别诊断,应多注意其不同点,以便早期确诊疫病和采取合理的防控和扑灭措施,减少猪场损失。     

应用重组杆状病毒表达猪瘟病毒糖基化EO(Erns)蛋白

通过PCR方法扩增出包含糖基化信号肽的猪瘟兔化弱毒疫苗株E0 (Ems)蛋白基因,末端引入6×His标签序列,将其克隆到Bac-to-Bac杆状病毒表达系统pFastBacTM HT B载体中,将阳性重组质粒pF-E0转化DH10Bac感受态大肠杆菌,经蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组Bacmid质粒(rBac-E0).转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒rAc-E0.经Western blot鉴定重组蛋白正确表达,且具有良好的抗原性;用糖苷酶PNGase F处理后重组蛋白分子量减小为32 ku,表明重组蛋白为糖基化蛋白.这为进一步研究E0蛋白的功能、亚单位疫苗和诊断试剂的开发奠定了基础.     

基于Erns基因的猪瘟病毒一步法RT-PCR快速检测方法的建立和应用

根据猪瘟病毒Erns基因保守序列设计了1对引物,建立了检测猪瘟病毒一步法反转录-聚合酶链（RT-PCR）方法,并对其特异性、敏感性进行了研究。该一步法RT-PCR对CSFV扩增结果为阳性,对照毒株扩增结果均为阴性;对猪瘟病毒检测的灵敏性为10 pg总RNA量。以上结果表明,该一步法RT-PCR特异性强、敏感性高、简便、快速,可用于猪瘟的早期确诊和病毒鉴定。     

猪瘟病毒野毒株RT-LAMP可视化检测方法的建立

本研究旨在建立一种可视化检测猪瘟病毒(CSFV)野毒株的反转录.环介导等温扩增方法(RT-LAMP).根据CSFV的NS5B基因序列设计一套RT-LAMP引物,以样品的cDNA为模板,利用Bsf DNA聚合酶,在62℃恒温条件下进行扩增,扩增产物中加入sYBR Green I染料直接或在紫外光下观察判定扩增结果.该方法可检测出不同基因型的CSFV厂野毒株,其检出极限为2.5 TCID_(50)的CSFV,与实时荧光定量RT.PCR方法的敏感性相当;特异性试验表明,该方法对猪瘟免化弱毒疫苗株(HCLV)、牛病毒性腹泻病毒以及其它常见猪源病毒均无扩增反应;通过对126份不同样品进行检测比较,该方法与实时荧光定量RT-LAMP检测方法的符合率达100%.与引物.探针能量转移PCR方法的符合率为98.4%.该方法无需特殊仪器,是一种适用于基层的快速、简便的CSFV野毒鉴别检测方法.     

非洲猪瘟、猪瘟鉴别诊断与防控

猪瘟是由猪瘟病毒感染引发的一类重大传染性疾病,在我国有大面积的流行传播。而非洲猪瘟是近些年在我国生猪养殖领域传播流行的一类病毒性传染性疾病,传播流行速度相对较快。由于上述两种疾病的临床表征及病理学变化十分相似,基层地区的兽医人员对两种疾病的认知不足,开展疾病诊治过程中,经常将非洲猪瘟作为猪瘟病毒进行处置,导致了防控缺乏针对性,无法在短时间的控制病情,对当地的生猪养殖业构成了毁灭性的打击。基层地区的畜牧兽医人员应该注重做好非洲猪瘟和猪瘟的有效鉴别,明确两种疾病在流行病学、临床特征及病理变化等方面的不同,并结合针对性的实验室诊断方法,鉴别诊断两种疾病,明确具体的病原,然后采取针对性措施进行防控。     

非洲猪瘟与猪瘟的鉴别诊断及宰后检疫判定要点

对非洲猪瘟与猪瘟的概念及危害、鉴别诊断、屠宰检疫的判定要点等知识进行了介绍。     

一起猪瘟诊治的体会

猪瘟是由猪瘟病毒引起的猪的一种急性或慢性、热性和高度接触性传染病.介绍了某猪场猪瘟的发病情况、临床症状、病理变化、鉴别诊断、发病机理、防控措施,以期为该病的诊断、防控提供参考.     

一起猪瘟诊治的体会

猪瘟是由猪瘟病毒引起的猪的一种急性或慢性、热性和高度接触性传染病。介绍了某猪场猪瘟的发病情况、临床症状、病理变化、鉴别诊断、发病机理、防控措施,以期为该病的诊断、防控提供参考。     

生猪检疫中猪瘟鉴别诊断和无害化处理

猪瘟具有极高的致病率与死亡率,会对地区养猪业发展造成毁灭性的危害.生猪检疫是猪瘟疫病防控的重要环节,通过规范开展生猪检疫工作,及时发现与处置携带猪瘟病毒的生猪及猪肉产品,可促使猪瘟的蔓延与传播得到有效抑制.因此,要充分重视生猪检疫工作,深入掌握猪瘟鉴别诊断技术要点,无害化处理携带病毒的生猪及猪肉产品,促使猪瘟防控效果得...     

2020年新疆部分地区猪瘟病毒抗体检测及分析

为了解2020年新疆部分地区规模化猪场的猪瘟病毒（CSFV）抗体水平,本试验应用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）,对采自18个规模化猪场的1 085份血清样品进行猪瘟病毒抗体检测。结果显示,CSFV抗体平均合格率为83.59%（907/1 085）,高于国家规定标准（70%）,平均阻断率为（66.99±25.09）%。A、B、C、D、E地区间猪瘟病毒抗体水平差异显著（P<0.05）。各规模猪场猪群抗体合格率在70%~87%之间,并且差异显著。此次检测结果表明,6个不同地区平均抗体合格率中,A、B、C、F地区抗体水平整齐度良好,E地区抗体水平偏低,变异系数偏大,抗体整体水平较差。大型规模养猪场猪瘟抗体合格率普遍高于中、小型规模养猪场,说明大型规模养猪场在猪瘟的防控方面具有一定优势。该结果可为新疆地区规模化猪场的猪瘟免疫防控提供参考。     

猪瘟病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及优化

以原核表达、纯化的猪瘟病毒(CSFV)E2主要抗原区蛋白为目标检测物,通过对各反应条件的筛选和优化,建立了检测CSFV抗体的间接ELISA检测方法。结果表明,本研究的最佳抗原包被浓度和最佳血清稀释度分别为1.0 μg/mL和1:200;最佳抗原包被条件和最佳封闭时间均为37 ℃ 1 h;最佳酶标二抗稀释度和作用时间分别为1:10 000和37 ℃ 45 min;阴性临界值判断标准为当D450nm<0.30时猪血清样品为CSFV抗体阴性;批内和批间重复试验变异系数分别为4.8%和6.9%,表明该检测方法具有较高的稳定性;特异性试验结果表明,间接ELISA方法与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒(PCV)、猪细小病毒(PPV)阳性血清均无交叉反应;应用该间接ELISA方法随机检测80份猪血清样品,与进口阻断ELISA试剂盒相比其阳性符合率为83.58%,阴性符合率为76.92%,总体符合率为80.25%。结果表明本试验建立的间接ELISA方法具有很好的临床应用价值。     

Development and Optimization of Indirect ELISA Detection Method of Classical Swine Fever Virus Antibody

In this study,through a series of screening and optimization of reactions condition,an indirect ELISA method was developed for detections the antibodies against classical swine fever virus (CSFV) with the purified recombinant CSFV E2 protein.The results showed that the optimal concentration for coating antigen was 1.0 μg/mL and incubated at 37 ℃ for 1 h.The proper serum sample was diluted by 1:200 and the sealing time was 37 ℃ for 1 h.Enzyme labeled second antibody was diluted by 1:10 000 and the reaction time was 45 min incubating at 37 ℃.The D450 nm<0.30 of sample defined as negative of CSFV antibody in the serum sample.The intra-batch and inter-batch variation coefficients were 4.8% and 6.9%,respectively.It indicated that the method in this study had a high stability.Specific test showed that the indirect ELISA had no crossing reactions with the antibodies against PRV,PRRSV,PCV and PPV.80 serum samples were detected in this study,the positive coincidence rate of indirect ELISA was 83.58%,the negative coincidence rate was 76.92%,and the total coincidence rate was 80.25% compared to the results of import blocking ELISA kit.The results suggested that the established indirect ELISA method in this study had an excellent clinical application.     

猪瘟诊断与防控

近年人们生活水平提高,人们对猪肉的消费水平也随之提高,对猪肉产品绿色健康的品质要求也逐渐升高。由于集约化、一体化养殖规模扩大,猪只相关疾病也逐渐增多。1925年中国首次出现猪瘟疫情,给中国养猪业造成巨大的经济损失。猪瘟兔化弱毒疫苗在中国问世,极大缓解了猪瘟疫情,但仍会出现零星散发的状态。该文将对猪瘟进行全面阐述,以期为临床上预防和治疗猪瘟提供强有力的理论支持。     

模猪场猪瘟野毒感染情况调查

利用ELISA方法对广西6个规模猪场送检的1626份猪血清进行猪瘟野毒感染情况调查。结果6个规模猪场均存在猪瘟野毒感染,其中母猪感染率为7.86%~29.21%,平均为17.52%,种公猪感染率为0%~23.52%,平均为11.83%,育肥猪感染率为5%~22.45%,平均为15.5%,断奶仔猪感染率为8.24%~18.57%,平均为12.69%。此检测结果与猪场临床发病情况基本一致,病猪多表现为繁殖障碍型、温和型的非典型猪瘟。     

猪瘟分子生物学诊断新进展

猪瘟是养猪业常见的一种烈性传染病,尽管中国很早就研制成功了猪瘟兔化弱毒疫苗,但近年来猪瘟的流行和发病特点发生了很大的变化,很多地区和猪场不断出现非典型猪瘟、温和型猪瘟,给该病的诊断带来困难。因此,尽早对猪瘟进行确诊是减少该病造成损失的有效措施。近年来,猪瘟的分子生物学诊断方法研究进展迅速,为猪瘟的诊断起到了重要作用。作者着重对最新的猪瘟分子生物学诊断方法（如RT-PCR、RT-LAMP等方法）加以综述。     

抗猪瘟病毒单克隆抗体的制备及特性鉴定

将纯化后的猪瘟病毒免疫4只SPF级BALB/c小鼠,无菌取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经半固体培养基克隆化和间接ELISA筛选,最终获得了4株稳定分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。ELISA结果显示4株单克隆抗体效价均较高,并与其他病毒及PK-15细胞培养物无交叉反应。Western blotting结果证实3株单克隆抗体可特异性识别猪瘟病毒。间接免疫荧光试验可在细胞膜内观察到特异性绿色荧光,表明3株单克隆抗体与猪瘟病毒具有良好的反应性。该研究为猪瘟病毒新型诊断试剂开发奠定了基础。     

猪瘟病毒E2蛋白A/D区单抗的制备及其抗原表位的初步研究

应用分子克隆技术将猪瘟病毒E2蛋白部分基因插入到载体pGEX-4T-1中构建重组质粒pGEX-4T-E（A）,在大肠杆菌Rosetta中表达融合蛋白GST-E（A）,以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经克隆化和间接ELISA筛选,获得了C3、A1两株稳定分泌抗猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,ELISA结果显示,其腹水效价为1∶128000和1∶256000。Western blotting结果证实,单克隆抗体C3和A1能与猪瘟病毒（classical swine fever virus,CSFV）发生特异性的反应,表明该单抗是针对猪瘟病毒E2蛋白的保守线性表位。     

新型猪瘟疫苗的研究进展

猪瘟是危害猪健康的重要传染病之一,具有急性、热性和高度接触性等特性,给世界养猪业造成了巨大的经济损失。目前,传统疫苗接种仍是预防猪瘟的主要手段,虽然传统疫苗（如C株）在防控猪瘟方面发挥着巨大的作用,但也存在一些缺陷,如无法区分野毒感染和疫苗免疫动物,猪瘟免疫失败时有发生等。因此,研制新型猪瘟疫苗具有重要意义。随着分子生物学技术与重组DNA技术的不断发展及基因工程疫苗研究的不断深入,亚单位疫苗、核酸疫苗、活载体重组疫苗、基因缺失疫苗、全长感染性cDNA标记疫苗和合成肽疫苗6种新型猪瘟疫苗被相继开发。与传统疫苗相比,新型疫苗拥有廉价、安全、高效、易于运输与保存、能区分野毒感染和疫苗免疫等优点。作者对6种新型猪瘟疫苗的研究进展作一综述,以期为猪瘟的防控提供参考。     

生猪检疫中猪瘟鉴别诊断与无害化处理

猪瘟是由猪瘟病毒感染引发的一种病毒性传染性疾病,在生猪养殖中,该种疾病具有极强传染性,具有发病率高、死亡率高的特点。在疾病防控过程中,需要养殖户提高重视程度,掌握上述该种疾病的具体病理变化和临床表现,然后进行严格的实验室诊断,确定致病原,然后采取综合措施防控,避免病毒传播蔓延,造成严重经济损失。该文主要分析生猪检疫过程中猪瘟有效鉴别诊断和无害化处理措施。