鳜→鲤的细胞核移植

本文报道用细胞核移植的方法,获得了亲缘关系较远的不同目鱼类之间的核一质杂种鱼胚胎.即以鳜鱼的囊胚细胞核作供体,以鲤鱼的成熟未受精去核卵细胞质作为受体进行核移植试验,使囊胚细胞核发生分裂,从而启动卵细胞质也发生分裂,导致重新进行个体发育.在获得的112个正常发育的核移植卵中,发生卵裂的107个,占95.5%发育至囊胚期的61个,占54.5%,发育至原肠期的6个,占5.4%,发育至神经胚期和胚孔封闭期的各1个,分别占0.9%.鳜→鲤核质杂种胚胎类似鲤鱼同期胚胎,其早期发育速度与鲤鱼相似而比鳜鱼快.各杂种胚胎发育期的胚盘形状及大小均类似鲤鱼,大于鳜鱼同期胚盘,且胚盘细胞较多,但比鲤鱼胚盘细胞小,这是鳜→鲤核质杂种胚胎发育的一个显著特点.作者认为核-质杂种胚胎的性状发育,受核受体物种的母性影响控制.     

细胞核移植技术在研究太湖猪高繁殖性能核外基因效应中的应用

细胞核移植技术细胞核移植技术 ,根据核供体细胞的不同 ,有胚胎细胞核移植、胚胎干细胞核移植、胎儿成纤维细胞核移植和体细胞核移植。以核移植为核心技术的动物克隆技术 ,其基本技术环节除基本显微操作外 ,主要包括供核的分离、受体细胞的去核、核卵重组、重组胚的融合、核移植胚的培养与移植或重复克隆。供体核的分离胚胎细胞用 0 2 %链霉蛋白酶预处理胚胎 ,去胚胎的胶膜及透明带 ,离出单个卵裂球。目前在胚细胞核分离技术中有两大重要进展 :①胚胎干细胞系建立──胚胎干细胞在发育阶段上类似于内细胞团细胞 ,胚胎干细胞系是早期胚胎经…     

草鱼与青鱼、鳙鱼与团头鲂之间的细胞核移植

在草鱼与青鱼、鳊鱼与团头鲂之间进行核移植试验,获得了不同属鱼类间的草鱼细胞核和青鱼细胞质配合的核质杂种鱼——草青移核鱼幼鱼,以及不同亚科间的鳙鱼细胞核与团头鲂细胞质配合的核质杂种鱼——鳙团移核鱼,得率分别为0.9％和1.8％。核质杂种鱼的胚胎发育特征大多与受核体鱼相似,而形态特征大多与供核体鱼相似。表明胚胎发育明显受受核体细胞质的影响,而形态性状特征主要受供核体细胞核的影响。     

卵母细胞核因子促进核移植四倍体胚胎早期发育研究

研究旨在探讨猪卵母细胞核因子在重编程过程中发挥的作用。将体细胞引入未去核的MⅡ期卵母细胞中,构建体细胞核与卵母细胞核共存的核移植四倍体胚胎。通过分析核移植四倍体胚胎的早期发育情况探讨卵母细胞核因子对核移植四倍体胚胎早期发育的影响。结果显示,核移植四倍体胚胎、孤雌二倍体胚胎及孤雌单倍体胚胎这3组胚胎的卵裂率极显著高于核移植二倍体胚胎（P<0.01）,且核移植四倍体囊胚率及总细胞数也极显著高于核移植二倍体囊胚（P<0.01）。与通过标准核移植程序构建的核移植二倍体胚胎相比,核移植四倍体胚胎具有更强的发育能力。本研究建立了一个体细胞核与完整卵母细胞核因子物质共存的四倍体胚胎模型,有助于研究供体核与卵母细胞核之间的联系,为研究核因子在重编程过程中发挥的作用提供了平台。     

草鱼与青鱼,鳙鱼与团头舫之间的细胞核移植

在草鱼与青鱼、鳙鱼与团头鲂之间进行了核移植试验，获得了不同属鱼类间的草鱼细胞核和青鱼细胞质配合的核质杂种鱼－草青移核鱼幼鱼，以及不同亚科间的鳙鱼细胞核与团头鲂细胞质配合的核质杂种鱼－鳙团移核鱼，得率分别为０．９％和１．８％。核质杂种鱼的胚胎发育特征大多与受核体鱼相似，而形态特征大多与供核体鱼相似，表明胚胎发育明显受受核体细胞质的影响，而形态性状特征主要受供核体细胞核的影响。     

家兔胚胎细胞核移植的研究现状

胚胎细胞核移植技术(核移植)是指将不同发育时期的胚胎细胞核以显微手术及细胞融合的方法移植到去核卵母细胞或受精卵中,并使重组胚胎发育至产仔的过程。通过此技术,不仅可以生产出大量的克隆动物,而且对于研究动物胚胎的发育机理也具有重要的作用。 早在1905年,Spemann就证明,蝾螈早期胚胎的卵裂球具有功能相同的核,并在1938年提出了核移植的设想;按这一设想,1952年Berggs和King首次获得了两栖类美洲豹蛙的核移植后代。到80年代,核移植技术在哺乳动物中也相继获得成功,目前已取得了绵羊、牛、小鼠、兔、猪、山羊的核移植后代。而且核移植技术也成功地用于研究细胞的核质关系,配子发光过程中核的相互作用等方面。     

分子育种手段之微卫星技术的应用与前景

在国内，1995年，西北农业大学窦忠英等用胚胎细胞核移植产生了6头猪。1996年，湖北农科院魏庆信等得到了胚胎细胞核移植猪。1997年赵浩斌等和2000年Li等分别获得猪胚细胞核移植后代1998年，东北农业大学的李光鹏等把猪胚胎的细胞核通过电融合移植到去核的体内和体外成熟卵母细胞中，出生了2头克隆猪。2003年，西北农林科技大学冯秀亮等得到了人体细胞和猪卵母细胞异种核移植囊胚。     

牛卵母细胞质内注射体细胞核移植胚的早期发育

研究牛皮肤成纤维细胞的处理方式对卵质内直接注射法构建的核移植胚胎发育的影响，同时比较了MⅡ期与TⅡ期卵母细胞作为受体的效果。结果表明：在细胞核注射前对供体细胞作低渗处理可明显提高胚胎构建的成功率和早期发育能力。牛皮肤成纤维细胞是否作G1／G0期同期化处理，对核移植胚胎的发育没有明显的影响。发现供核细胞在悬浮情况下作休眠处理，所得核移植胚胎的发育能力与贴附休眠的细胞基本相同，且悬浮休眠3d后的细胞无需再作低渗处理便可用作细胞核注射。MⅡ期或TⅡ期卵母细胞作为胞质内核注射受体，对牛体细胞核移植胚胎的早期发育没有明显影响。     

牛胚胎原代和继代细胞核移植结果比较

比较了原代和继代核移植的操作各环节以及核移植胚胎在体外发育能力上的差异。通过显微操作将体外受精发育而来的８～３２细胞期胚胎的单个卵裂球注入激活的去核卵母细胞的卵周隙内,并用８０Ｖ/mm、４０us２次电脉冲诱导卵裂球与去核卵母细胞融合,借此进行牛胚胎的原代核移 体外发育来的８～３２细胞期的原代核移植胚胎作为供体,用原代核移植相同的方法进行牛胚胎的继代移植。原代核移植的存活率和融合率（８７．３％和６８．５     

牛胚胎的核移植

本研究是试验一种牛胚胎核移植的方法,并观察去核的胚胎移植不同龄胚胎的细胞核后的发育情况。先将原核胚胎离心处理,以显示原核,再用非穿透法取出原核,用电击法将其融合到去核的合子中。在Zimmernan细胞融合液中,以100伏电压脉冲20～40微秒,融合膜与电极平行时融合率最高(79％)。用原核胚胎观察了核移植对胚胎发育的影响。将这些胚胎的原核取出再注回,然后保存在绵羊输卵管里5天。结果,从输卵管回收到的完好的核移植胚胎中,5/29(17％)发育到桑葚期或囊胚期,而未作核移植处理的胚胎为11/30(37％)。将2个核移植胚胎移植给母牛,结果都发育成正常犊牛。而移植2-、4-或8-细胞期胚胎细胞核的去原核胚胎中,没有观察到发育现象。     

Developmental capacity of reconstituted mouse embryos: influences of nucleus and cytoplasm sources.

This study was undertaken to examine the developmental capacity of reconstituted mouse embryos, and the influences of nucleus and cytoplasm on the development of these embryos following reciprocal pronuclear transplantation between in vitro 2-cell blocked and nonblocked embryos. Karyoplast containing pronuclei was transferred into the perivitelline space of the enucleated zygote and fused to cytoplasm with electrofusion. Maximum fusion rate was obtained when a field strength of 1.5 kV/cm was used. The fusion rates were high (86.2 +/- 3.2 to 90.6 +/- 2.0%) regardless of the strains of donor nucleus and recipient cytoplasm. Developmental rates of reconstituted embryos to the blastocyst stage, which were similar to that of the F1 (C57BL/6J x CBA) control were high when F1 embryos were used as the cytoplasm recipients (88.8 +/- 1.5 and 91.9 +/- 2.0%). When ICR embryos were used as the recipient cytoplasm, developmental rates were significantly reduced (71.5 +/- 2.9 and 54.1 +/- 3.2%), and affected by the source of nucleus. There were no significant differences in the cell number of embryos that developed to blastocysts and in the developmental rates to live young among the embryos reconstituted with different nuclei and cytoplasm, and the ICR control. The results of this study show that the development of reconstituted embryos is hardly affected by nuclear transplantation and electrofusion procedures. It is indicated that the recipient cytoplasm, rather than the donor nucleus, has the greater influence on the in vitro development of the reconstituted embryos to the blastocyst stage.     

饲料磷水平对草鱼形体的影响及其骨骼畸形的判定

本试验旨在研究饲料中不同磷水平对草鱼形体的影响,并对其骨骼畸形进行判定.选取初始均重为22.29 g的草鱼270尾,随机分为6个组,每组设3个重复,每个重复放鱼15尾,分别投喂合0、13、29、45、61、77 g/kg磷酸二氢钙的纯化饲料.试验期为75 d.结果表明:饲料中磷酸二氢钙添加量为29 g/kg的组草鱼体长...     

An intracytoplasmic injection of deionized bovine serum albumin immediately after somatic cell nuclear transfer enhances full-term development of cloned mouse embryos

In mouse somatic cell nuclear transfer (SCNT), polyvinylpyrrolidone (PVP) is typically included in the nuclear donor injection medium. However, the cytotoxicity of PVP, which is injected into the cytoplasm of oocytes, has recently become a cause of concern. In the present study, we determined whether bovine serum albumin deionized with an ion-exchange resin treatment (d-BSA) was applicable to the nuclear donor injection medium in SCNT as an alternative to PVP. The results obtained showed that d-BSA introduced into the cytoplasm of an enucleated oocyte together with a donor nucleus significantly enhanced the rate of in vitro development of cloned embryos to the blastocyst stage compared with that of a conventional nuclear injection with PVP in SCNT. We also defined the enhancing effects of d-BSA on the blastocyst formation rate when d-BSA was injected into the cytoplasm of oocytes reconstructed using the fusion method with a hemagglutinating virus of Japan envelope before oocyte activation. Furthermore, immunofluorescence experiments revealed that the injected d-BSA increased the acetylation levels of histone H3 lysine 9 and histone H4 lysine 12 in cloned pronuclear (PN) and 2-cell embryos. The injection of d-BSA before oocyte activation also increased the production of cloned mouse offspring. These results suggested that intracytoplasmic injection of d-BSA into SCNT oocytes before oocyte activation was beneficial for enhancing the in vitro and in vivo development of mouse cloned embryos through epigenetic modifications to nuclear reprogramming.     

不同蛋白质源对草鱼和花鲈肉质影响的比较研究

本试验旨在比较不同蛋白质源对草鱼(Ctenopharyngodon idellus)及花鲈(Lateolabrax japonicas)体成分、肌肉游离氨基酸组成及鱼片质构特性的影响。设计草鱼和花鲈饲料各3种,分别等氮等能。3种草鱼试验饲料分别为以鱼粉为唯一蛋白质源的CI-FM组(对照组),以混合植物蛋白质(豆粕和大豆浓缩蛋白)替代80%鱼粉的CI-PPB80组及以混合植物蛋白质替代100%鱼粉的CI-PPB100组。3种花鲈试验饲料分别为以鱼粉为唯一蛋白质源的LJ-FM组(对照组),以混合植物蛋白质(棉籽浓缩蛋白和大豆浓缩蛋白)替代50%鱼粉的LJ-PPB50组和以混合植物蛋白质替代100%鱼粉的LJ-PPB100组。草鱼初始体重为(153.40±0.30)g,随机分为3组,每组3个重复,每个重复20尾鱼;花鲈初始体重为(12.97±0.03)g,随机分为3组,每组4个重复,每个重复25尾鱼。饲喂8周后,检测2种试验鱼的体成分、肌肉游离氨基酸含量及鱼片质构特性、剪切力、滴水损失及胶原蛋白含量。结果表明:与CI-FM组相比,CI-PPB100组草鱼肌肉粗脂肪含量显著降低(P0.05),粗灰分含量显著升高(P0.05);而花鲈肌肉粗脂肪含量则随替代水平的升高呈现先上升后下降的趋势,表现为LJ-PPB50组显著高于LJ-PPB100组(P0.05)。草鱼肌肉总游离氨基酸及生物胺前体含量各组间无显著差异(P0.05);随着替代水平的升高,花鲈肌肉总游离氨基酸及呈味氨基酸含量显著降低(P0.05),生物胺前体含量显著升高(P0.05)。2种试验鱼肌肉中存在各自的特异性成分。2种试验鱼生、熟鱼片的质构特性差异较大。草鱼的CI-FM组和花鲈的LJ-FM组生鱼片的硬度、黏性、咀嚼力、回弹力及剪切力均分别显著高于同鱼种的其他2组(P0.05)。对于熟鱼片,草鱼的CI-PPB80组内聚力显著高于其他2组(P0.05),其他各项指标各组间无显著差异(P0.05);花鲈的LJ-PPB100组硬度及黏附性显著高于LJ-FM组(P0.05),其他各项指标各组间无显著差异(P0.05)。根据结果,混合植物蛋白质替代鱼粉后降低了草鱼和花鲈鱼体脂肪的蓄积,对草鱼肌肉总游离氨基酸含量不造成影响,使花鲈肌肉呈味氨基酸含量下降,必需氨基酸含量减少,生物胺前体含量升高,货架期缩短;高植物蛋白质源饲料使得草鱼和花鲈的肉质均出现明显下降,而高鱼粉饲料可以保证2种试验鱼有较高的肉质。     

饲料中添加龙须菜对草鱼生长性能、血清生化指标及肌肉脂肪酸组成的影响

为考察饲料中添加龙须菜对草鱼生长性能、血清生化指标及肌肉脂肪酸组成的影响,试验共配制了6种龙须菜添加比例分别为0(对照组)、1%、2%、3%、4%和5%的等氮等脂饲料,投喂平均体重为(15.94±0.10)g的草鱼8周。每种饲料投喂4个水箱(重复),每箱30尾鱼。结果显示:1)饲料中不同添加比例龙须菜对草鱼的增重率(WGR)、特定生长率(SGR)、存活率(SR)及饲料效率(FE)没有显著影响(P0.05)。2)各试验组的肝体指数(HSI)均高于对照组,对照组与除5%添加组外的其他试验组的差异均达到显著水平(P0.05)。3)全鱼、肝脏及肌肉的粗蛋白质含量各组间皆无显著差异(P0.05),而饲料中不同添加比例龙须菜对全鱼粗灰分与粗脂肪、肝脏粗脂肪及肌肉水分含量有显著影响(P0.05)。4)血清总蛋白(TP)、总胆固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)以及低密度脂蛋白(LDL)含量以5%添加组最低,显著低于对照组(P0.05),其他试验组与对照组没有显著差异(P0.05)。5)饲料中龙须菜添加比例影响了草鱼肌肉脂肪酸的组成,除C14∶1、C20∶0、C20∶2外,其他肌肉脂肪酸的含量均受到饲料中龙须菜的添加比例的显著影响(P0.05),其中肌肉多不饱和脂肪酸(PUFA)含量及n-3/n-6 PUFA均在3%添加组获得最高值。1%、2%、3%、4%和5%添加组肌肉C20∶5(EPA)、C22∶5(DPA)、C22∶6(DHA)以及EPA+DHA的含量都显著高于对照组(P0.05)。由此得出,饲料中添加一定比例的龙须菜对草鱼的生长性能没有显著影响,但能降低血脂含量,影响草鱼肌肉脂肪酸的组成,并能提高功能性脂肪酸DHA、EPA及PUFA的含量;饲料中添加3%的龙须菜能更好地增加肌肉功能性脂肪酸含量,而添加5%的龙须菜则草鱼生长相对较好,降低血脂效果更加明显。     

草鱼幼鱼对饲料中核黄素的需要量

配制核黄素含量分别为0.54、2.32、4.08、5.78、9.28和19.35 mg/kg的6种纯化饲料,投喂初始均重为(11.21±0.16)g的草鱼幼鱼8周,通过研究核黄素对其生长性能、肝胰脏中D-氨基酸氧化酶(D-AAO)与肠道中消化酶活力及体成分的影响,以确定草鱼幼鱼对饲料中核黄素的需要量。每种饲料设3个重复,每个重复放养20尾鱼。结果表明:0.54和2.32 mg/kg组草鱼幼鱼的成活率显著低于其他各组(P0.05);随着饲料中核黄素含量的增加,草鱼幼鱼的增重率、特定生长率、饲料效率、肝胰脏中D-AAO及肠道中消化酶活力均先升高后趋于稳定,当饲料中核黄素含量为5.78 mg/kg时,以上指标均达到最大值;5.78 mg/kg组的肝体比显著高于0.54 mg/kg组(P0.05),但饲料中核黄素含量对脏体比、肥满度及全鱼的水分、粗蛋白质、粗脂肪和粗灰分含量无显著影响(P0.05)。折线模型回归分析表明,草鱼幼鱼获得最佳生长时对饲料中核黄素的需要量为5.54 mg/kg;肝胰脏中D-AAO活力达到最佳时对饲料中核黄素的需要量为5.99 mg/kg。     

Rabbit oocyte cytoplasm supports development of nuclear transfer embryos derived from the somatic cells of the camel and Tibetan antelope

This study was designed to examine the ability of rabbit metaphase II oocyte cytoplasm to support the development of interspecies nuclear transfer embryos reconstructed using donor nuclei from different species. Skin fibroblast cells from a camel and Tibetan antelope were used as donor nuclei. As a first step, we investigated the efficiency of different activation protocols by comparing the parthenogenetic development of rabbit oocytes. The protocol that yielded the highest blastocyst rate was used to activate the reconstructed embryos in nuclear transfer experiments. In addition, the effect of donor cell serum starvation on the development of the reconstructed embryo was also examined. More than half of the karyoplast-cytoplast couplets could be fused, and about one third of the reconstructed embryos were capable of completing first cleavage, regardless of the species of donor nuclei. Some of the cleaving reconstructed embryos were even capable of progressing further and developing to the blastocyst stage (1.4-8.7% for the Tibetan antelope and 0-7.5% for the camel, respectively). Our results suggest that the mechanisms regulating early embryo development may be conserved among mammalian species and some factors existing in rabbit oocyte cytoplasm for somatic nucleus reprogramming and dedifferentiation may not be species-specific. Rabbit oocyte cytoplasm can reprogram donor nuclei regardless of the origin of the nucleus and support in vitro development to an advanced stage.