共查询到18条相似文献,搜索用时 93 毫秒
1.
大肠杆菌F18菌毛A亚单位基因(fedA)的克隆与序列测定 总被引:6,自引:0,他引:6
利用PCR技术,分别从产F18ab菌毛的猪水肿病大肠杆菌分离株G及产F18ac菌毛的大肠杆菌8813株中扩增出510bp左右的F18菌毛A亚单位基因(fedA)。将这2个PCR扩增产物按预测阅读框架克隆入pGEX-6p-1载体的谷胱甘肽S-转移酶(GST)基因的下游,筛选获得阳性重组质粒,并对质粒中的插入序列进行测定。序列分析表明:F18ab与F18ac的fedA基因的核苷酸序列同源性为97.6%,的氨基酸序列同源性为94.7%,两者的主要区别在于F18ac fedA基因的第363bp处比F18ab多3个核苷酸,并出现一个新的酶切位点(NgoMI)。 相似文献
2.
大肠杆菌F18菌毛E亚单位基因克隆与序列分析 总被引:2,自引:2,他引:0
根据已发表的F18ab菌毛E亚单位的基因序列(fedE/ab),设计1对引物,利用PCR技术从10株大肠杆菌(F107/86、YCED1、YCED2、C、D、E、12F、2134P、8199、8813)中分别扩增到1个片段,并克隆至pGEM-T载体,获得重组质粒TF107E、TYCED1E、TYCED2E、TCE、TDE、TEE、T12FE、T8813E、T8199E、T2134PE。琼脂糖凝胶电泳、序列测定及分析表明,这10个片段大小均为516bp。通过与已发表的fedE/ab序列进行比较,发现这10个菌株的fedE序列高度同源,其中F107/86、YCED2、C、D、E、8813、8199、2134P的fedE序列完全相同,只有YCED1株在第45位碱基处存在1个G—A转换、12F株在第316位碱基处存在1个G—A转换。这说明F18ab和F18ac菌毛的fedE基因相同,fedE是F18菌毛的保守性亚单位。 相似文献
3.
鸡大肠杆菌1型菌毛是一种重要的致病因子,可以黏附到家禽机体的呼吸道上皮,从而引起机体发病。1型菌毛基因簇由fimB,fimE,fimA,fimI,fimC,fimD,fimF,fimG和fimH等组成。在国外K12株大肠杆菌1型菌毛fimE基因是一个大小为为555 bp,具有相变开关功能的片段,我国鸡源大肠杆菌1型菌毛fimE基因序列尚未见报道。本研究通过聚合酶链式反应扩增、克隆到了鸡大肠杆菌MG10株1型菌毛的fimE基因,测定了基因序列,并运用相关软件将其翻译成氨基酸序列。通过对fimE基因序列分析比较及对fimE蛋白进行预测分析,发现鸡大肠杆菌与K12大肠杆菌1型菌毛的fimE基因之间的同源性达到99.1%以上;亲水性、抗原性预测表明,二者之间都存在密切的相似相关性。结果表明,核酸同源性为99.5%。fimE基因的核苷酸序列中有5个核苷酸残基发生了改变,而预测氨基酸序列变化仅第184位氨基酸由缬氨酸V变为丙氨酸A;其余无核苷酸的变化。 相似文献
4.
鸡源大肠杆菌1型菌毛结构基因(pilA)克隆 总被引:5,自引:0,他引:5
根据人源大肠杆菌1型菌毛结构基因DNA序列,在其保守区设计了1对带有BamH I/HindⅢ酶切位点的引物,经PCR扩增,从24株鸡源大肠杆菌致病株染色体中得到21个大小约657bp的阳性产物,经酶切、连接、转化及筛选,得到3种来自不同自清型鸡源大肠杆菌PCR产物的阳性克隆。经核酸序列测定,确认所克隆的外源基因为1型菌毛pilA基因。 相似文献
5.
根据已发表的大肠杆菌1型菌毛fimH基因序列,以产1型菌毛菌株MG2(O11)、YR5(O78)、MG12(O18)基因组DNA为模板,对大肠杆菌1型菌毛fimH基因进行扩增并与国外同源菌株基因序列进行比对。结果表明:核酸同源性分别为97.8%、99.7%、97.8%,氨基酸序列的相似性分别达到98.7%、99.3%、98.0%。运用DNA-STAR软件对fimH蛋白抗原决定簇进行预测分析,发现它们的抗原决定簇基本相似,这说明fimH基因序列及氨基酸序列的变异并未对fimH蛋白的抗原结构产生明显影响。 相似文献
6.
根据Z26520中fedF序列设计1对引物,从发病仔猪的腹泻粪便分离获得的大肠杆菌中扩增得到fedF基因,经纯化、连接、转化,将其成功克隆到pMD18-T中,所克隆fedF基因序列与GenBank中收录的其他fedF基因序列的同源性达97.8%~99.2%.另设计1对引物,利用基因工程方法将所克隆的fedF的编码序列亚克隆到表达载体pBV220中,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得表达重组菌.测序结果表明,插入编码序列与预期序列一致.SDS-PAGE电泳及Western-blotting分析表明,重组菌在诱导后可以表达特异性的相对分子质量为30 100的FedF蛋白. 相似文献
7.
应用PCR方法从产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)中扩增出不含信号肽序列的F5菌毛抗原基因片段,克隆测序后将其连接到大肠杆菌表达载体pET-30a(+)中,转化工程菌BL21,经IPTG诱导表达。经SDS-PAGE和Western Blot分析,重组蛋白在BL21中得到表达并与F5菌毛单因子血清发生明显反应。 相似文献
8.
据GenBank中人源大肠杆菌pilA基因序列,由Oligo 6.0设计一对引物,以提取的鸭源致病性大肠杆菌基因组为模板,进行PCR扩增,获得了5株鸭源致病性大肠杆菌的pilA基因,序列测定和生物信息学分析表明:鸭源致病性大肠杆菌pilA基因核苷酸序列长度为549bp,编码182aa,与人源、鸡源及猪源大肠杆菌pilA基因之间核苷酸同源性为87.3%~100.0%,氨基酸同源性为87.5%~100.0%。对不同宿主来源大肠杆菌pilA基因所编码蛋白的二级结构、亲水性、抗原性、抗原表位进行预测分析比较,结果显示Ⅰ型菌毛间具有一定的结构相似性,并存在一定的共同抗原位点;系统进化分析表明,各菌株之间的pilA基因遗传相关性与其宿主来源及血清型之间没有严格的相关性。 相似文献
9.
大肠杆菌F18菌毛FedE蛋白的表达与鉴定 总被引:5,自引:2,他引:3
根据已经发表的F18菌毛E亚单位的基因序列(fedE)设计1对引物,利用PCR技术从重组质粒TFl07E中扩增到一段序列,并按预定的阅读框架插入到表达性质粒载体pGEX-6p-1中的谷胱苷肽转移酶(GST)基因的下游,获得重组质粒pPFedE,并转化大肠杆菌BL21获得重组菌PPFedE。琼脂糖凝胶电泳、序列测定及分析表明:该序列大小为459bp,与GENEBANK中的FedE结构编码序列(Z26520)完全一致。通过对菌体裂解物的SDS—PAGE电泳分析以及Western blotting鉴定,证明重组大肠杆菌PPFedE的可以表达融合蛋白形式的FedE(命名为GST-FedE),即FedE蛋白(16.297ku)与谷胱苷肽转移酶(27.335ku)相连组成分子量为43.632ku的融合蛋白。 相似文献
10.
鸡病原性大肠杆菌(O2)亚单位疫苗的研究 总被引:2,自引:2,他引:2
试验提取并纯化了鸡病原性大肠杆菌血清型(O2)的菌毛,并电镜观察了菌毛及菌毛表达。提取了鸡病原性大肠杆菌血清型(O2)荚膜多糖及菌体可溶性蛋白质,电镜观察了提取过程中荚膜、细胞壁以及胞内物质等细菌结构变化。将提取的菌毛、荚膜多糖和灭活的菌体作为抗原、蜂胶作佐剂,制成蜂胶疫苗,免疫鸡只,于7周龄进行同尖毒保护试验,从保护指数、细菌分离和病变级数三方面比较了3种疫苗的免疫效果,试验结果表明:荚膜疫苗效 相似文献
11.
鸡大肠杆菌1型菌毛单克隆抗体的研制 总被引:2,自引:0,他引:2
将菌毛化的大肠杆菌C600(fim^ )经0.3%甲醛灭活后作为免疫原,经淋巴细胞杂交瘤技术,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选获得1F4-1和2C32株抗F1菌毛a或b因子抗原单抗和1株抗F1c因子抗原单抗,它们均为IgG1。免疫印迹试验结果表明:3株单抗均能同禽大肠杆菌1型菌毛反应,识别分子质量为17ku左右的菌毛蛋白。同时对沙门氏菌及猪源大肠杆菌进行检测,结果均无交叉反应性,说明禽病原性大肠杆菌F1菌毛与沙门氏菌1型菌毛及猪大肠杆菌粘附素之间存在很大差异。 相似文献
12.
奶牛γ-干扰素基因克隆及其在大肠杆菌中表达 总被引:13,自引:2,他引:13
根据奶牛γ干扰素 ( Bov IFN-γ)基因的 c DNA序列设计 1对引物 ,应用一步法逆转录聚合酶链式反应 ( RT-PCR)技术从奶牛脾淋巴细胞的总 RNA中扩增出特异性片段。将 RT-PCR产物克隆到 Pucm-T载体中 ,经过限制性酶切分析、测序证实扩增得到的 Bov IFN-γ基因序列正确。将该基因片段切下并克隆到大肠杆菌表达载体 PGEX-6P-1谷光甘肽 S 转移酶基因的下游 ,经 IPTG诱导后 ,表达出 42 ku的融合蛋白 ,薄层扫描测定可溶性融合蛋白表达量约占菌体可溶性总蛋白的 2 5 %。通过细胞病变抑制试验证实 ,融合蛋白具有较好的生物学活性 ,在牛肾细胞上抑制水泡性口炎病毒的活性可达到 1 63 84U· mg- 1 ,有望成为预防和控制奶牛疾病的新产品。 相似文献
13.
从乳酸克鲁维斯酵母(Kluyveromyces lactis)菌株k538中克隆获得乳糖酶基因klac,并将其插入到表达载体pET-30a( )上构建重组表达质粒pETlac4。将pETlac4电击转化到大肠杆菌BL21中,分别研究了阳性转化子在28℃,37℃下经IPTG诱导3h后的蛋白表达情况。表达产物的SDS-PAGE分析和酶活性测定表明,k/ac基因在大肠杆菌中获得活性表达,其中低温条件28℃下的表达水平明显高于37℃,28℃诱导的细胞经超声波破碎所测酶活力为0、475U/mL,37℃仅为0.134U/mL。 相似文献
14.
大肠杆菌和弗氏志贺氏菌临界生长温度的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
Tang Houkuan 《湖北农学院学报》1991,(3)
本文通过对大肠杆菌(Escherichia coli)和弗氏志贺氏菌(Shiglla flexneri)生长速率常数的研究,提出了k~(1/2)=a+bT的线性关系式。借助此线性关系式,本文得到了以上2种细菌的临界生长温度T_0=-a/b。实验证明:k~(1/2)-T的相关系数比lnk-1/T的相关系数高;同1细菌在不同培养基中的临界生长温度基本上是1个常数,不同的细菌则临界生长温度不同;常数b是与培养基有关的常数,本文定义为细菌的培养基常数。 相似文献
15.
经对我国 16 个省、市、自治区分离到的 110 个禽病原性大肠杆菌 O1 8 和 O7 8 分离株的外膜蛋白型( O M P型)的测定,结果表明,这些分离株共产生了 4 个 O M P 型,56 个 O1 8 分离株可分为 3 个 O M P型,54 个 O78 分离株出现了 4 个 O M P型,其 O M P1~3 型为二者所共有。 相似文献
16.
17.
18.
枯草杆菌纳豆激酶基因的克隆与序列分析 总被引:3,自引:0,他引:3
用CTAB法从枯草杆菌(Natto)提取基因组DNA,聚合酶链式反应(PCR)扩增获得约1.3kp的DNA片段,在T4DNA连接酶作用下,将扩增片段连接到pUCm-T载体上,载化Ecoli DH5a感受态细菌。将初步鉴定的阳性细菌提取质粒DNA进行PCR鉴定和测序,序列分析结果证明获得了包含全部读码框的纳豆激酶基因。 相似文献