牛促卵泡激素β亚基基因在哺乳动物细胞中的导入与表达

将牛ＦＳＨ－βｃＤＮＡ连接于ｐＭＭＴ中金属硫蛋白启动子下游，与带有二氢叶酸还原酶基因的质粒共转染中国仓鼠卵巢细胞ＣＨＯ－ｄｈｆｒ＾－，在ＤＨＦＲ＾＋转化细胞中所整合的ＭＴ－ｂＦＳＨ－β基因可重金属镉诱导。     

表皮生长因子对卵泡刺激素促进的小鼠胚胎卵巢卵泡发育和雌二醇分泌的影响

FSH、EGF是参与卵巢功能调节的重要因素，关于EGF对FSH促进的胚胎卵巢卵泡发育和类固醇激素发生的影响报道甚少。本实验经单个卵巢的总卵泡数、生长卵泡数和5个最大卵母细胞的平均直径为卵泡发育优劣的衡量指标，利用我们早期研究建立的无血清培养体系研究EGF对FSH促进的小鼠胚胎卵巢卵泡发育和分泌雌二醇的作用。结果发现：①EGF＋FSH＋雄烯二酮（A）处理组的胚胎卵巢总卵泡数在培养第7－9d显著高于FSH＋A处理组，而且生长卵泡数和卵巢内5个最大卵母细胞平均直径在培养后期也显著高于FSH＋A处理组（P＜0.05);②FSH＋A处理组的胚胎卵巢在培养第7－9d分泌大量雌二醇，而GF和FSH联合使用时胚胎卵巢的培养早期雌二醇分泌水平显著低于FSH＋A处理组（P＜0.05）。结果提示EGF协同FSH促进小鼠胚胎卵巢卵泡体外生长发育；同时EGF抑制SH诱导的雌二醇分泌，其促卵泡发育作用可能与雌二醇的合成不相关联。     

包被硒对西门塔尔母牛发情周期生殖激素分泌的影响

选用16头18月龄、体况良好、体重380±16 kg的西门塔尔牛育成母牛,采用完全随机区组设计分为4组,以包被硒为硒源研究日粮添加硒(0 mg·kg-1、0.3 mg·kg-1、0.6 mg·kg-1和0.9 mg·kg-1)对发情周期生殖激素分泌规律的影响.结果表明:0.3 mg·kg-1和0.6 mg·kg-1处理组牛发情周期促黄体素平均值显著高于0.9 mg·kg-1和对照组,0.9 mg·kg-1处理组显著高于对照组(P＜0.05);发情后12 h、第10 d、第16 d出现3个高峰,0.3 mg·kg-1和0.6 mg·kg-1组的峰值均显著高于0.9 mg·kg-1和对照组.0.3 mg·kg-1和0.6 mg·kg-1组发情周期促卵泡素平均值显著高于0.9 mg·kg-1和对照组,0.9 mg·kg-1处理组显著高于对照组(P＜0.05);第8 d、第12 d、第15 d出现3个峰值,0.3 mg·kg-1和0.6 mg·kg-1组的峰值显著高于0.9 mg·kg-1和对照组(P＜0.05).0.3 mg·kg-1和0.6 mg·kg-1组发情周期孕酮平均值显著高于0.9 mg·kg-1和对照组,0.9 mg·kg-1处理组显著高于对照组(P＜0.05);发情周期1～7 d平均较低,8～15 d 含量增加,形成台状峰,0.3 mg·kg-1和0.6 mg·kg-1组的峰值显著高于0.9 mg·kg-1和对照组.0.3 mg·kg-1和0.6 mg·kg-1组发情周期雌二醇平均值显著高于0.9 mg·kg-1和对照组,0.9 mg·kg-1处理组显著高于对照组(P＜0.05);发情后12 h、发情周期第5～8 d出现高峰,0.3 mg·kg-1和0.6 mg·kg-1组的峰值显著高于0.9 mg·kg-1和对照组,0.9 mg·kg-1处理组显著高于对照组(P＜0.05).以包被硒为硒源时添加硒0.3～0.6 mg·kg-1对发情周期生殖激素分泌有显著促进作用,以0.6 mg·kg-1为佳,兼顾基础日粮含硒量,建议以包被硒为硒源时日粮硒水平为0.67 mg·kg-1.     

促性腺激素及卵泡液协同对牛腔前卵泡体外发育的影响

将100个φ100～150μm牛腔前卵泡,随机分成8组,每组12～13个卵泡,在McCoy's 5a无血清培养系统研究了促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)有、无两种情况下,添加0、10%、15%及20%牛卵泡液(BFF)对牛腔前卵泡的体外生长、发育、存活及雌二醇(E2)分泌的影响.结果显示,在无促性腺激素下,添加不同浓度BFF对牛腔前卵泡体外发育无明显促进作用(P>0.05),但可刺激体外培养腔前卵泡的E2分泌.当有10 ng/mL LH和50 ng/mL FSH存在下,培养不同时间腔前卵泡的发育率、存活率,各卵泡液组均高于对照组,其中10%BFF组腔前卵泡培养6 d时发育率为(78.52%)与对照组(49.28%)差异显著(P<0.05),培养12 d腔前卵泡φ增长值33.7±4.8μm,显著高于对照组及其它处理组(P<0.01),同时在培养9 d时,有一枚卵泡成腔;各添加卵泡液组的E2测定值更高,其中添加10%BFF组中φ>100μm腔前卵泡在培养6 d时其E2分泌量达最高值48.96±1 1.54 pg/mL.表明FSH、LH存在下,培养液中加入10%BFF可显著提高腔前卵泡在体外的生长、发育、存活和E2分泌及诱导卵泡腔的形成.     

山羊促卵泡激素α和β亚单位cDNA的克隆与序列分析

促卵泡素(follicle stimulating hormone,FSH)是由动物脑垂体前叶分泌的一种糖蛋白类促性腺激素,由α和β两个糖基化亚单位以非共价键连接而成[1,2].使用常规设备和生化方法很难将其分离纯化,在现有的FSH制品中多混杂有上述结构相似的激素,使得FSH作用机理和应用研究受到限制.     

硫酸铜对西门塔尔牛发情周期生殖激素分泌的影响

选用16头18月龄、体况良好、体重380±14kg的西门塔尔牛育成母牛,采用完全随机区组设计分为4组,研究日粮添加硫酸铜(0、8、16和24mg铜/kg)对母牛发情周期生殖激素分泌规律的影响。结果表明:与对照组比较,8mg/kg组发情周期促黄体素(LH)、促卵泡素(FSH)、孕酮(P4)、雌二醇(E2)水平显著提高(P<0.05);16mg/kg组有提高趋势,但差异不显著(P>0.05)。添加8mg铜/kg的硫酸铜对母牛发情周期生殖激素分泌有促进作用,加上基础日粮的含铜量,建议日粮以硫酸铜为铜源时铜水平为13.87mg/kg。     

赛乐硒对西门塔尔母牛发情周期生殖激素分泌的影响

以赛乐硒为硒源,研究了日粮(混合精料+玉米秸秆)添加不同水平硒(0、0.3、0.6和0.9mg/kg)对西门塔尔牛育成母牛发情周期生殖激素分泌的影响。结果表明,赛乐硒提高了母牛发情周期LH、FSH、P4、E2水平,0.3和0.6mg/kg组显著高于0.9mg/kg和对照组,0.9mg/kg组显著高于对照组(P<0.05)。由此推断0.6mg/kg处理对发情周期生殖激素分泌有显著促进作用,兼顾基础日粮含硒量,建议日粮硒水平为0.67mg/kg。     

饲粮锌、硒和维生素E水平对后备母猪生长发育及生殖激素的影响

选择日龄、体况较一致的二元杂(长白×约克)后备母猪27头,采用L9(34)正交表安排试验,共9个试验组,每组3个重复。饲粮锌、硒和维生素E均设置3个水平,分别为:锌(45.0mg/kg,85.0mg/kg,125mg/kg);硒(0.10mg/kg,0.25mg/kg,0.40mg/kg);维生素E(15IU/kg,30IU/kg,45IU/kg),目的是研究饲粮微量元素锌、硒和维生素E对后备母猪生长发育和血清生殖激素参数的影响规律。结果表明在喂给含锌量85mg/kg,含硒量0.25mg/kg,含维生素E量45IU/kg饲粮时:(1)后备母猪的初次发情时间最早,分别为(187.4±6.6)d,(185.9±8.4)d,(189.1±7.3)d(P<0.05);(2)血清雌激素及孕激素浓度在不同日龄情况下均显示最高水平(P<0.05或P<0.10)。综合所考察的参数,后备母猪饲粮中含锌85mg/kg,含硒0.25mg/kg,含维生素E45IU/kg是适当的组合用量。     

绍兴鸭性成熟前卵巢GnRH-Ⅰ与ER-βmRNA表达的发育性变化

采用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法检测了绍兴蛋鸭出雏至90日龄卵巢GnRH-Ⅰ和ER-βmRNA表达丰度的变化.结果表明:从1～90日龄卵巢GnRH-ⅠmRNA含量逐渐升高,1日龄水平最低,60和90日龄时水平显著高于1和30日龄(P＜0.01);卵巢ER-βmRNA含量呈先升后降趋势,60日龄时表达量最高,显著高于1、30(P＜0.01)和90日龄(P＜0.05).提示:绍兴鸭卵巢内GnRH-Ⅰ mRNA表达的上调可能对后期等级卵泡的形成起重要调节作用;而ER-βmRNA则主要参与介导E2对卵巢早期发育调节.     

精原细胞分化与凋亡的影响因素

人们对哺乳动物精子发生过程已经有了相当多的了解，但对精子发生过程的调控机制仍然了解甚少。生殖激素及原癌基因和肿瘤抑制基因的表达产物对维持正常精子发生中各类细胞的存活、增殖和凋亡，以及各类细胞受损伤后的清除均具有十分重要的作用。本文论述了促卵泡激素、雌激素、雄激素、干细胞因子、Bcl-2家族蛋白及p53蛋白在原细胞的分化和凋亡中的作用，以便人们进一步了解精子发生的调控机制。     

Copper Stress Affects Metabolism and Reproductive Yield of Chickpea

To observe the effects of copper (Cu) deficiency on growth, metabolism, and reproductive yield of chickpea (Cicer arietinum L.) cv. ‘13.G-256’, plants were grown in refined sand at deficient (0.1 μM) and adequate Cu (1 μM), supplied as copper sulfate (CuSO₄·5H₂O). At d 35–40, at deficient Cu, the growth of plants were depressed and the young leaflets appeared reduced in size, chlorotic, with narrow pointed tips. The primary branches collapsed later, and secondary branches were stunted with reduced number of leaves. The flowering was disturbed, less flowers matured, as a consequence pods and seeds were reduced, malformed and low in productivity, which lowered biomass and economic yield and is accompanied by decrease in Cu concentration in leaves and seeds. The quality of seeds deteriorated at deficient Cu as the concentration of proteins, carbohydrates (sugars and starch), protein nitrogen were lowered, and phenols, non-protein nitrogen, increased. Whereas in leaves, the concentration of carbohydrates (sugars and starch), phenols, and non-protein nitrogen were elevated and protein nitrogen was reduced. Copper deficiency also alleviated the concentration of chlorophyll (a and b) in leaves. At deficient Cu, the activity of antioxidative enzyme viz. peroxidase along with that of acid phosphatase and ribonuclease increased in leaves, seeds and pod wall of chickpea.     

日粮不同硒水平对公猪繁殖及精浆营养生化参数的影响

选择年龄、体重、精液质量较一致、正在使用的健康壮年长白公猪5头,采用5×5正交拉丁方试验设计,在不同阶段分别饲喂含硒量为0.05mg·kg-1(处理1)、0.15mg·kg-1(处理2)、0.25mg·kg-1(处理3)、0.35mg·kg-1(处理4)、0.45mg·kg-1(处理5)日粮,研究硒对公猪繁殖参数、精浆生殖激素、精浆营养生化参数的影响。结果表明:(1)处理1公猪精子畸形率显著高于处理4公猪精子的畸形率(P<0.05);(2)处理4公猪精浆促卵泡生成素(FSH)、睾酮(T)的浓度显著高于处理1公猪精浆FSH、T的浓度(P<0.05);(3)处理4公猪精浆的谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)活性显著高于处理1公猪精浆的GSHPx活性(P<0.05);(4)采精量、精子密度、精子活率、精液pH值、精浆促黄体生成素(LH)浓度、精浆尿素含量、精浆总蛋白含量,在不同处理条件下均没有显著的差异(P>0.05);(5)精子活率、精子畸形率、精浆FSH浓度、精浆LH浓度、精浆T浓度、精浆尿素的含量、精浆的GSHPx活性与日粮硒含量之间均存在着一定的规律性:即在一定范围内(0.35mg·kg-1),它们的变化随日粮硒含量的增加而增加或降低,超出该范围则降低或升高;(6)综合上述结果,长白公猪日粮硒含量以0.35mg·kg-1较为适当。     

氮素形态对小麦生长中后期保护酶等生理特性的影响

在水培条件下,探究了氮素形态对小麦营养生殖并进生长时期保护酶的影响。结果表明:铵、硝态氮单供和混合供应对小麦保护酶活性影响不同。在铵、硝态氮混合供应下,叶片SOD、CAT,根系SOD活性最高,同时叶片、根系可溶性蛋白含量最大,根系活力和根系表面K3Fe(CN)6还原活性最高,但MDA含量最高;单供硝态氮时叶片POD活性最高,根系MDA含量最高;单供铵态氮时根系POD、CAT活性最高。单供尿素时叶片仅CAT活性高于铵和硝态氮混合供给,但同时叶片MDA含量也高于铵和硝态氮混合供给。叶片以SOD、CAT和POD为主清除自由基,而根系以SOD和POD为主清除自由基。铵和硝态氮混合供给下,小麦成熟后,地上部干重,籽粒产量最大,根冠比最小。     

不同激素配比对百合叶片诱导与分化的影响

研究不同激素配比的培养基对兰州百合和台湾新铁炮百合的叶片诱导与不定芽分化的影响,结果表明：2,4-D能诱导愈伤组织的形成,浓度为1.5～2.0 mg/L时,愈伤组织诱导率较高,愈伤组织质量较好.一定浓度范围内的6-苄基腺嘌呤（6-BA）、激动素（KT）以及萘乙酸（NAA）间的配组,能诱导小鳞茎的形成,并进一步分化成不定芽.当激素组合为6-BA 1.0 mg/L＋NAA 0.5 mg/L时,兰州百合的出芽率与平均出芽数均达到最高,分别为70.83%和5.22个;当激素组合为6-BA 2.0 mg/L＋NAA 1.0 mg/L时,台湾新铁炮百合的出芽率与平均出芽数达到最高,分别为90.00%和3.31个.     

日粮真可消化磷水平对生长猪生产性能和血清激素水平的影响

对60头平均体重为21.4kg的健康三元杂交生长猪(杜×长×大)的生产性能和血清激素水平进行研究,以确定生长猪日粮真可消化磷(TDP)的最佳添加水平。以TDP为指标,配制5种TDP含量不同的试验日粮(0.16%、0.20%、0.23%、0.26%和0.39%),并使日粮总钙与TDP的比例为2∶1。采用单因子随机分组设计,将60头生长猪随机分为5个处理,每个处理3个重复,每个重复4头猪。结果表明:(1)根据生长猪平均日增重和日粮TDP含量的关系,可以得出一个生长猪平均日增重随日粮TDP含量变化的多元方程。根据该方程,可以推导出当日粮TDP含量达到0.34%时,生长猪的平均日增重达到最大,为782g/d。(2)根据结果可以拟出一个耗料增重比随日粮TDP含量变化的多元方程。根据该方程知,当日粮TDP为0.34%时,耗料增重比最低,为1.07∶1。(3)根据结果推导出当日粮TDP含量在0.34%左右时,血清生长激素、骨钙素和胰岛素这三种激素水平达到最低点。(4)根据试验结果推导出当日粮TDP含量为0.34%时,血清甲状旁腺素水平达到最高点。由此,本试验得出生长猪日粮TDP的最佳添加水平为0.34%。     

miR-let-7a在大白猪甲状腺中的表达及其对甲状腺细胞凋亡的影响

microRNA(miRNA)是一类内源性的非编码RNA,广泛参与细胞的生长发育、分化、增殖和凋亡等生物学过程.为了研究miR-let-7a对猪(Susscrofa)甲状腺的生长发育及甲状腺细胞凋亡的调控作用,本研究利用免疫荧光技术鉴定了大白猪的甲状腺组织及体外培养的甲状腺细胞,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测了miR-let-7a在不同生长阶段大白猪甲状腺组织中的表达量变化,通过转染miR-let-7a mimics并利用流式细胞术检测了转染组与未转染组的甲状腺细胞凋亡率的差异性,同时预测了miR-let-7a与细胞凋亡相关基因的靶向关系.结果发现,甲状腺组织和细胞中的甲状腺球蛋白(thyroglobulin,TG)发出绿色荧光,表明体外培养的甲状腺细胞功能正常.qRT-PCR结果显示,胚胎期随着胚龄的增加,miR-let-7a表达量逐渐增加.出生后miR-let-7a表达量下降,于60日龄达生长期最小值,之后有所上升,至90日龄后其表达量再次下降,120日龄后随日龄的增加let-7a表达量呈现逐渐增加的趋势.凋亡结果发现,和对照组相比,转染组细胞凋亡率明显升高(P＜0.05).根据研究结果推测,miR-let-7a的表达直接或间接影响了甲状腺细胞凋亡的调控过程.研究结果为深入研究猪甲状腺miR-let-7a的功能机制提供了有益的线索.     

水牛原始生殖细胞(PGCs)的分离培养及生物学特性的研究

以水牛胎儿为材料,从生殖腺中分离培养出牛原始生殖细胞,并对水牛原始生殖细胞的分离与克隆的影响因素进行了探讨。结果发现:(1)分离培养出的原生殖细胞(PGC s)呈集落状生长,细胞堆积密集,细胞之间界限不清,细胞与周围的成纤维细胞界限明显;未分化的细胞表达碱性磷酸酶(AKP)以及O ct-4转录因子;(2)收集妊娠29~100 d牛胎儿28例,从生殖嵴(腺)或类似物中分离克隆水牛PGC s,23例出现PGC s细胞集落。其中胎龄小于45 d(<3.0 cm)和45~55 d(3.0~5.0 cm)各7例,全部出现PGC s细胞集落;55~70 d(5.0~9.0 cm)9例,有7例出现PGC s细胞集落,大于70 d的5例,有2例出现出现PGC s细胞集落。结果表明,水牛原生殖细胞具有多能性特性,胎龄小于55 d的水牛胎儿易于分离培养形成PGC s集落。