牛促卵泡激素β亚基基因在哺乳动物细胞中的导入与表达

将牛ＦＳＨ－βｃＤＮＡ连接于ｐＭＭＴ中金属硫蛋白启动子下游，与带有二氢叶酸还原酶基因的质粒共转染中国仓鼠卵巢细胞ＣＨＯ－ｄｈｆｒ＾－，在ＤＨＦＲ＾＋转化细胞中所整合的ＭＴ－ｂＦＳＨ－β基因可重金属镉诱导。     

表皮生长因子对卵泡刺激素促进的小鼠胚胎卵巢卵泡发育和雌二醇分泌的影响

FSH、EGF是参与卵巢功能调节的重要因素，关于EGF对FSH促进的胚胎卵巢卵泡发育和类固醇激素发生的影响报道甚少。本实验经单个卵巢的总卵泡数、生长卵泡数和5个最大卵母细胞的平均直径为卵泡发育优劣的衡量指标，利用我们早期研究建立的无血清培养体系研究EGF对FSH促进的小鼠胚胎卵巢卵泡发育和分泌雌二醇的作用。结果发现：①EGF＋FSH＋雄烯二酮（A）处理组的胚胎卵巢总卵泡数在培养第7－9d显著高于FSH＋A处理组，而且生长卵泡数和卵巢内5个最大卵母细胞平均直径在培养后期也显著高于FSH＋A处理组（P＜0.05);②FSH＋A处理组的胚胎卵巢在培养第7－9d分泌大量雌二醇，而GF和FSH联合使用时胚胎卵巢的培养早期雌二醇分泌水平显著低于FSH＋A处理组（P＜0.05）。结果提示EGF协同FSH促进小鼠胚胎卵巢卵泡体外生长发育；同时EGF抑制SH诱导的雌二醇分泌，其促卵泡发育作用可能与雌二醇的合成不相关联。     

包被硒对西门塔尔母牛发情周期生殖激素分泌的影响

选用16头18月龄、体况良好、体重380±16 kg的西门塔尔牛育成母牛,采用完全随机区组设计分为4组,以包被硒为硒源研究日粮添加硒(0 mg·kg-1、0.3 mg·kg-1、0.6 mg·kg-1和0.9 mg·kg-1)对发情周期生殖激素分泌规律的影响.结果表明:0.3 mg·kg-1和0.6 mg·kg-1处理组牛发情周期促黄体素平均值显著高于0.9 mg·kg-1和对照组,0.9 mg·kg-1处理组显著高于对照组(P＜0.05);发情后12 h、第10 d、第16 d出现3个高峰,0.3 mg·kg-1和0.6 mg·kg-1组的峰值均显著高于0.9 mg·kg-1和对照组.0.3 mg·kg-1和0.6 mg·kg-1组发情周期促卵泡素平均值显著高于0.9 mg·kg-1和对照组,0.9 mg·kg-1处理组显著高于对照组(P＜0.05);第8 d、第12 d、第15 d出现3个峰值,0.3 mg·kg-1和0.6 mg·kg-1组的峰值显著高于0.9 mg·kg-1和对照组(P＜0.05).0.3 mg·kg-1和0.6 mg·kg-1组发情周期孕酮平均值显著高于0.9 mg·kg-1和对照组,0.9 mg·kg-1处理组显著高于对照组(P＜0.05);发情周期1～7 d平均较低,8～15 d 含量增加,形成台状峰,0.3 mg·kg-1和0.6 mg·kg-1组的峰值显著高于0.9 mg·kg-1和对照组.0.3 mg·kg-1和0.6 mg·kg-1组发情周期雌二醇平均值显著高于0.9 mg·kg-1和对照组,0.9 mg·kg-1处理组显著高于对照组(P＜0.05);发情后12 h、发情周期第5～8 d出现高峰,0.3 mg·kg-1和0.6 mg·kg-1组的峰值显著高于0.9 mg·kg-1和对照组,0.9 mg·kg-1处理组显著高于对照组(P＜0.05).以包被硒为硒源时添加硒0.3～0.6 mg·kg-1对发情周期生殖激素分泌有显著促进作用,以0.6 mg·kg-1为佳,兼顾基础日粮含硒量,建议以包被硒为硒源时日粮硒水平为0.67 mg·kg-1.     

山羊促卵泡激素α和β亚单位cDNA的克隆与序列分析

促卵泡素(follicle stimulating hormone,FSH)是由动物脑垂体前叶分泌的一种糖蛋白类促性腺激素,由α和β两个糖基化亚单位以非共价键连接而成[1,2].使用常规设备和生化方法很难将其分离纯化,在现有的FSH制品中多混杂有上述结构相似的激素,使得FSH作用机理和应用研究受到限制.     

促性腺激素及卵泡液协同对牛腔前卵泡体外发育的影响

将100个φ100～150μm牛腔前卵泡,随机分成8组,每组12～13个卵泡,在McCoy's 5a无血清培养系统研究了促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)有、无两种情况下,添加0、10%、15%及20%牛卵泡液(BFF)对牛腔前卵泡的体外生长、发育、存活及雌二醇(E2)分泌的影响.结果显示,在无促性腺激素下,添加不同浓度BFF对牛腔前卵泡体外发育无明显促进作用(P>0.05),但可刺激体外培养腔前卵泡的E2分泌.当有10 ng/mL LH和50 ng/mL FSH存在下,培养不同时间腔前卵泡的发育率、存活率,各卵泡液组均高于对照组,其中10%BFF组腔前卵泡培养6 d时发育率为(78.52%)与对照组(49.28%)差异显著(P<0.05),培养12 d腔前卵泡φ增长值33.7±4.8μm,显著高于对照组及其它处理组(P<0.01),同时在培养9 d时,有一枚卵泡成腔;各添加卵泡液组的E2测定值更高,其中添加10%BFF组中φ>100μm腔前卵泡在培养6 d时其E2分泌量达最高值48.96±1 1.54 pg/mL.表明FSH、LH存在下,培养液中加入10%BFF可显著提高腔前卵泡在体外的生长、发育、存活和E2分泌及诱导卵泡腔的形成.     

硫酸铜对西门塔尔牛发情周期生殖激素分泌的影响

选用16头18月龄、体况良好、体重380±14kg的西门塔尔牛育成母牛,采用完全随机区组设计分为4组,研究日粮添加硫酸铜(0、8、16和24mg铜/kg)对母牛发情周期生殖激素分泌规律的影响。结果表明:与对照组比较,8mg/kg组发情周期促黄体素(LH)、促卵泡素(FSH)、孕酮(P4)、雌二醇(E2)水平显著提高(P<0.05);16mg/kg组有提高趋势,但差异不显著(P>0.05)。添加8mg铜/kg的硫酸铜对母牛发情周期生殖激素分泌有促进作用,加上基础日粮的含铜量,建议日粮以硫酸铜为铜源时铜水平为13.87mg/kg。     

赛乐硒对西门塔尔母牛发情周期生殖激素分泌的影响

以赛乐硒为硒源,研究了日粮(混合精料+玉米秸秆)添加不同水平硒(0、0.3、0.6和0.9mg/kg)对西门塔尔牛育成母牛发情周期生殖激素分泌的影响。结果表明,赛乐硒提高了母牛发情周期LH、FSH、P4、E2水平,0.3和0.6mg/kg组显著高于0.9mg/kg和对照组,0.9mg/kg组显著高于对照组(P<0.05)。由此推断0.6mg/kg处理对发情周期生殖激素分泌有显著促进作用,兼顾基础日粮含硒量,建议日粮硒水平为0.67mg/kg。     

饲粮锌、硒和维生素E水平对后备母猪生长发育及生殖激素的影响

选择日龄、体况较一致的二元杂(长白×约克)后备母猪27头,采用L9(34)正交表安排试验,共9个试验组,每组3个重复。饲粮锌、硒和维生素E均设置3个水平,分别为:锌(45.0mg/kg,85.0mg/kg,125mg/kg);硒(0.10mg/kg,0.25mg/kg,0.40mg/kg);维生素E(15IU/kg,30IU/kg,45IU/kg),目的是研究饲粮微量元素锌、硒和维生素E对后备母猪生长发育和血清生殖激素参数的影响规律。结果表明在喂给含锌量85mg/kg,含硒量0.25mg/kg,含维生素E量45IU/kg饲粮时:(1)后备母猪的初次发情时间最早,分别为(187.4±6.6)d,(185.9±8.4)d,(189.1±7.3)d(P<0.05);(2)血清雌激素及孕激素浓度在不同日龄情况下均显示最高水平(P<0.05或P<0.10)。综合所考察的参数,后备母猪饲粮中含锌85mg/kg,含硒0.25mg/kg,含维生素E45IU/kg是适当的组合用量。     

绍兴鸭性成熟前卵巢GnRH-Ⅰ与ER-βmRNA表达的发育性变化

采用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法检测了绍兴蛋鸭出雏至90日龄卵巢GnRH-Ⅰ和ER-βmRNA表达丰度的变化.结果表明:从1～90日龄卵巢GnRH-ⅠmRNA含量逐渐升高,1日龄水平最低,60和90日龄时水平显著高于1和30日龄(P＜0.01);卵巢ER-βmRNA含量呈先升后降趋势,60日龄时表达量最高,显著高于1、30(P＜0.01)和90日龄(P＜0.05).提示:绍兴鸭卵巢内GnRH-Ⅰ mRNA表达的上调可能对后期等级卵泡的形成起重要调节作用;而ER-βmRNA则主要参与介导E2对卵巢早期发育调节.     

绍兴鸭性成熟前卵巢GnRH-I与ER-βmRNA表达的发育性变化

摘要： 采用反转录多聚酶链式反应（RT-PCR）方法检测了绍兴蛋鸭出雏至90日龄卵巢GnRH-I和ER-β mRNA表达丰度的变化。结果表明：从1~90日龄卵巢GnRH-I mRNA含量逐渐升高，1日龄水平最低， 60和90日龄时水平显著高于1和30日龄（P <0.01）；卵巢ER-β mRNA含量呈先升后降趋势，60日龄时表达量最高， 显著高于1、 30 （P <0.01）和90日龄（P < 0.05）。提示：绍兴鸭卵巢内GnRH-I mRNA表达的上调可能对后期等级卵泡的形成起重要调节作用；而ER-β mRNA则主要参与介导E2对卵巢早期发育调节。     

氟对小鼠生精细胞凋亡的影响及锌的保护作用

为观察氟对成年雄性小鼠生精细胞凋亡的影响及锌的保护作用,通过腹腔注射氟化钠建立氟中毒动物模型及锌保护实验。采用石蜡切片、苏木精-伊红染色(HE染色)、末端原位标记(TUNEL)及琼脂糖凝胶电泳的方法检测小鼠生精细胞的凋亡情况。结果显示:(1)氟感染组无论是低剂量组(NaF10 mg/kg)或是高剂量组(NaF 20 mg/kg)生精细胞都发生了明显的凋亡。生精细胞凋亡主要发生在精母细胞和精原细胞,凋亡指数与对照组差异极显著(P<0.05)。(2)无论是高剂量锌(ZnSO430 mg/kg)和低剂量锌(ZnSO415 mg/kg)都可以使凋亡指数明显降低,高剂量锌组的凋亡指数与对照组差异不显著(P>0.05)。     

精原细胞分化与凋亡的影响因素

人们对哺乳动物精子发生过程已经有了相当多的了解，但对精子发生过程的调控机制仍然了解甚少。生殖激素及原癌基因和肿瘤抑制基因的表达产物对维持正常精子发生中各类细胞的存活、增殖和凋亡，以及各类细胞受损伤后的清除均具有十分重要的作用。本文论述了促卵泡激素、雌激素、雄激素、干细胞因子、Bcl-2家族蛋白及p53蛋白在原细胞的分化和凋亡中的作用，以便人们进一步了解精子发生的调控机制。     

Copper Stress Affects Metabolism and Reproductive Yield of Chickpea

To observe the effects of copper (Cu) deficiency on growth, metabolism, and reproductive yield of chickpea (Cicer arietinum L.) cv. ‘13.G-256’, plants were grown in refined sand at deficient (0.1 μM) and adequate Cu (1 μM), supplied as copper sulfate (CuSO₄·5H₂O). At d 35–40, at deficient Cu, the growth of plants were depressed and the young leaflets appeared reduced in size, chlorotic, with narrow pointed tips. The primary branches collapsed later, and secondary branches were stunted with reduced number of leaves. The flowering was disturbed, less flowers matured, as a consequence pods and seeds were reduced, malformed and low in productivity, which lowered biomass and economic yield and is accompanied by decrease in Cu concentration in leaves and seeds. The quality of seeds deteriorated at deficient Cu as the concentration of proteins, carbohydrates (sugars and starch), protein nitrogen were lowered, and phenols, non-protein nitrogen, increased. Whereas in leaves, the concentration of carbohydrates (sugars and starch), phenols, and non-protein nitrogen were elevated and protein nitrogen was reduced. Copper deficiency also alleviated the concentration of chlorophyll (a and b) in leaves. At deficient Cu, the activity of antioxidative enzyme viz. peroxidase along with that of acid phosphatase and ribonuclease increased in leaves, seeds and pod wall of chickpea.     

氧化乐果对雄性大鼠生殖毒性及作用机制

为评价氧化乐果在体内的亚慢性生殖毒性,以0（CK）、0.44、1.32和3.97mg/(kg•d).连续染毒大鼠6周。结果显示,氧化乐果能引起雄鼠体重下降,睾丸和附睾及脏器系数极显著增加（P ＜0.01）,睾丸组织病理学改变,尤其引起睾丸曲细精管萎缩、变性,各级生精细胞减少,支持细胞数量减少,间质增宽。降低附睾精子数及附睾精子活力(P ＜0.01 ）,精子畸形率显著升高(P ＜0.05 ）; 降低睾丸组织酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）、乳酸脱氢酶（LDH）的活力,增加γ-谷氨酰转移酶（γ-GT）活力（P ＜0.01）和睾酮（T）（P ＜0.01）和卵泡刺激素（FSH）的含量（P ＜0.05）。结合组织病理、性激素、酶活性及精子质量的变化,表明氧化乐果可对雄性大鼠机体产生明显的毒性作用,也具有雄性生殖毒性,其主要靶器官为睾丸。     

五指山小型猪生长激素及其受体基因的克隆与序列分析

动物生长发育调控是一个高度复杂而精细的生理过程,受多种因素如神经、体液、遗传、营养及环境等的影响。其中,动物神经内分泌生长轴各因子(激素、受体、结合蛋白等)及其基因对动物的生长发育起着关键的作用。正常情况下,下丘脑接受体内外的信息,生长激素释放激素(grow thhorm one releasing horm one,GHRH)和生长抑素(som atostatin,SS),调节垂体生长激素(grow thhorm one,GH)的分泌,GH通过与生长激素结合蛋白(grow th horm one b ind ing protein,GHBP)结合而运输,与靶器官上的生长激素受体(grow th horm one receptor,GHR)结合,促使类胰岛素生长因子(insu lin-like grow th factors,IGFs)的产生并进入血液循环,IGFs再通过其结合蛋白(insu lin-likegrow th factor b ind ing protein,IGFBP)转运到全身组织细胞,促使组织细胞的生长与分化。五指山猪(Wuzhishan Pig,WZSP)是一种原产于中国海南省山区的小型猪。五指山猪成年体重仅为35 kg,是正常猪体重的15%~30%,是一种频临灭绝的珍稀物种。五指山猪具有以下特征:体型小,性成熟早,肉质好,耐近交和遗传稳定。为了开发和应用这一珍稀猪种的遗传资源,中国农业科学院北京畜牧兽医研究所从1989年就已经开始对五指山猪进行近交系培育,现在已经获得五指山猪近交系18代(近交系数为0.974),但五指山猪的矮小机理至今不明。为了探讨五指山猪矮小的分子机理,对五指山猪生长激素及其受体基因进行了克隆和序列分析。从纯种近交16代五指山猪的垂体和肝组织提取总RNA,根据GenBank中猪生长激素及其受体基因的序列(登录号分别为X53325,NM214254)设计特异性引物,对五指山猪生长激素及其受体基因进行扩增,然后对PCR产物进行回收、克隆测序。测序结果表明,五指山猪生长激素基因开放阅读框长651 bp,编码216个氨基酸,其中包含26个氨基酸的信号肽;生长激素受体基因编码区编码639个氨基酸,其中包含18个氨基酸的信号肽。运用生物学软件DNAssist 2.2将五指山猪和普通猪的生长激素基因编码区进行比对发现,五指山猪生长激素基因的编码区有4个突变:26号位置发生C→T突变,该突变导致缬氨酸代替丙氨酸;65号位置发生G→A突变,该突变导致谷氨酰胺替换精氨酸;114号位置发生T→C突变,252号位置发生A→G突变,但是这两个突变都未引起所编码氨基酸的变化。五指山猪和普通猪生长激素受体基因比对发现,1143号位置的G→T突变引起天冬氨酸替换谷氨酸;1225号位置的G→T突变导致丝氨酸替换丙氨酸;1666号位置C→G突变导致缬氨酸替换亮氨酸;1739号位置C→G突变导致丙氨酸被甘氨酸所代替;1801号位置G→A突变导致缬氨酸被异亮氨酸代替;1248号位置G→A突变,1287号位置G→A突变和1827号位置G→C突变均为同义突变,未引起相应编码氨基酸的变化。五指山猪生长激素基因有两处氨基酸替换,这两处替换发生在信号肽区,对成熟蛋白的结构和功能没有影响,但是有可能会影响蛋白的运输。五指山猪生长激素受体基因突变都发生在生长激素受体的胞内结构域,这些突变可能改变生长激素受体的空间构像,从而对生长激素受体的胞内信号转导产生一定的影响,影响生长激素-生长激素受体-胰岛素样生长因子轴的信号级联,削弱生长激素的促生长作用。     

日粮不同硒水平对公猪繁殖及精浆营养生化参数的影响

选择年龄、体重、精液质量较一致、正在使用的健康壮年长白公猪5头,采用5×5正交拉丁方试验设计,在不同阶段分别饲喂含硒量为0.05mg·kg-1(处理1)、0.15mg·kg-1(处理2)、0.25mg·kg-1(处理3)、0.35mg·kg-1(处理4)、0.45mg·kg-1(处理5)日粮,研究硒对公猪繁殖参数、精浆生殖激素、精浆营养生化参数的影响。结果表明:(1)处理1公猪精子畸形率显著高于处理4公猪精子的畸形率(P<0.05);(2)处理4公猪精浆促卵泡生成素(FSH)、睾酮(T)的浓度显著高于处理1公猪精浆FSH、T的浓度(P<0.05);(3)处理4公猪精浆的谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)活性显著高于处理1公猪精浆的GSHPx活性(P<0.05);(4)采精量、精子密度、精子活率、精液pH值、精浆促黄体生成素(LH)浓度、精浆尿素含量、精浆总蛋白含量,在不同处理条件下均没有显著的差异(P>0.05);(5)精子活率、精子畸形率、精浆FSH浓度、精浆LH浓度、精浆T浓度、精浆尿素的含量、精浆的GSHPx活性与日粮硒含量之间均存在着一定的规律性:即在一定范围内(0.35mg·kg-1),它们的变化随日粮硒含量的增加而增加或降低,超出该范围则降低或升高;(6)综合上述结果,长白公猪日粮硒含量以0.35mg·kg-1较为适当。     

抑制素A对牦牛颗粒细胞FSH、LH及其受体表达的影响

为了探明抑制素A(INHA)对牦牛卵泡颗粒细胞中促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)与其受体结合发挥的作用,通过体外培养牦牛卵泡颗粒细胞,采用免疫荧光技术(IF)检测促卵泡素受体(FSHR)和促黄体素受体(LHR)在颗粒细胞中的分布情况,用不同浓度外源性INHA(0、1.25、2.5、5、10、20 ng·mL^-1)作用12 h后,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测颗粒细胞中FSHβ、LHβ、FSHR、LHR基因的表达情况,采用酶联免疫分析试验(ELISA)检测细胞内外FSH、LH的含量。结果显示,FSHR和LHR在颗粒细胞质与细胞核中均有表达。FSHβ和LHβ基因在颗粒细胞中的表达随INHA浓度的增大呈先降后升的趋势;INHA浓度接近5 ng·mL^-1时,FSHβ表达最低;INHA浓度接近10 ng·mL^-1时,LHβ表达最低;FSHR和LHR基因的表达与INHA浓度呈负相关。INHA浓度接近5 ng·mL^-1时,颗粒细胞内外FSH含量最低;INHA浓度接近10 ng·mL^...     

氮素形态对小麦生长中后期保护酶等生理特性的影响

在水培条件下,探究了氮素形态对小麦营养生殖并进生长时期保护酶的影响。结果表明:铵、硝态氮单供和混合供应对小麦保护酶活性影响不同。在铵、硝态氮混合供应下,叶片SOD、CAT,根系SOD活性最高,同时叶片、根系可溶性蛋白含量最大,根系活力和根系表面K3Fe(CN)6还原活性最高,但MDA含量最高;单供硝态氮时叶片POD活性最高,根系MDA含量最高;单供铵态氮时根系POD、CAT活性最高。单供尿素时叶片仅CAT活性高于铵和硝态氮混合供给,但同时叶片MDA含量也高于铵和硝态氮混合供给。叶片以SOD、CAT和POD为主清除自由基,而根系以SOD和POD为主清除自由基。铵和硝态氮混合供给下,小麦成熟后,地上部干重,籽粒产量最大,根冠比最小。