绿僵菌不同菌株DNA 多态性的RAPD 分析

采用RAPD-PCR 技术分析了4 个绿僵菌菌株的DNA 遗传多态性。从160 条引物中筛选出27 条引物, 对各菌株进行PCR 扩增, 结果4 个绿僵菌菌株共扩增出334 个位点, 其中多态性位点299 个, 占89.5%, 表明各菌株间具有较丰富的遗传多态性。菌株DNA 多态性与原寄主和孢子形态表现出明显的相关性, 但与对松墨天牛幼虫的毒力间未表现出相关性。图2 表4 参7     

土壤中金龟子绿僵菌菌落宏观特征与DNA多态性的RAPD分析

为了解不同地区土壤中金龟子绿僵菌菌株间的亲缘关系,以及不同菌株亲缘关系的远近与菌株的菌落形态和地理来源是否存在相关关系,对分离自河北省8个地区土壤中的12株金龟子绿僵菌进行形态观察及DNA多态性的RAPD分析.结果表明,不同地理来源菌株间的菌落形态和DNA图谱均存在明显差异;依据菌落孢子的分布形态、基质色泽、孢子颜色以及珠状渗出液的有无等特征能实现与RAPD聚类结果相同的菌株类型划分结果,证实了利用菌株培养特征对菌株亲缘关系远近进行类型划分的可行性;同时,RAPD聚类结果也表明菌株问差异与地理来源有一定的相关性.     

绿僵菌属分类的研究进展

绿僵菌属真菌是一类广泛用于生防制剂的昆虫病原真菌,其分类历史长达上百年,分歧比较大.为完善绿僵菌属真菌的分类提供参考,对近年来绿僵菌属系统分类的研究现状以及分类方法进行综述,并总结了现行研究中存在的问题,展望了绿僵菌系统学的研究前景.     

贵州绿僵菌和戴氏绿僵菌分类地位的确证

为正确描述贵州绿僵菌和戴氏绿僵菌的分类地位提供更充分的形态学和分子证据,通过观察贵州绿僵菌和戴氏绿僵菌的形态特征并扩增其转录间隔区序列(ITS)和翻译延伸因子(TEF)基因部分序列,用最大简约法构建了系统发育树。结果表明:戴氏绿僵菌应归入贵州绿僵菌中。     

感染萧氏松茎象幼虫的绿僵菌菌株的初步筛选

应用10个绿僵菌菌株对萧氏松茎象幼虫进行致病力试验,结果表明,以浓度为(1.5±0.5)×106个.mL-1的孢子悬液喷菌,校正死亡率最高为91.90%,最低为15.28%,僵虫率最高为91.32%,最低为24.80%,LT50为5.39-10.12 d,单头虫体平均产孢量为106-107个.头-1.Ma1291-2、MaWP-01菌株对萧氏松茎象幼虫致病力较强,喷菌7 d后僵虫率分别为89.56%、91.32%,LT50分别为5.49、5.72 d,经不同剂量测定LC50分别为2.5707×104、1.9871×104个.mL-1,这2个菌株对萧氏松茎象生物防治有较大的开发利用价值.     

不同菌株绿僵菌酯酶型与其致病力的关系

对17株绿僵菌的酯酶同工酶培养特性和毒力进行了比较研究。结果表明:不同菌株酯酶同工酶型不同,绿僵菌的毒力与酶型及菌株培养特性有一定相关性。同工酶型可作为毒力筛选和鉴定绿僵菌种的标志。     

寄生松墨天牛的球孢白僵菌不同菌株DNA多态性的RAPD 分析

采用RAPD 技术对21 个不同来源的寄生松墨天牛Monochamus alternatus 的球孢白僵菌Beauveria bassiana 菌株的DNA 指纹图谱进行了测定。从RAPD 结果可知寄生松墨天牛的白僵菌菌株间具有丰富的遗传多态性。聚类分析把21 个寄生松墨天牛的白僵菌菌株分为两大类群:①B1 , B14 , B4 , B5 , B6 , B7 , B8 , B12 , B13 , B10 , F-263 , Bxs , B2 , B11 , Bf , Bz , B9 ;②B3 , B15 , By2 , By7 。结果表明菌株DNA 多态性与采集地之间有一定的相关性, 与对松墨天牛幼虫的毒力未表现出相关性。图2 表2 参11     

寄生松墨天牛的球孢白僵菌不同菌株DNA多态性的RAPD分析

采用RAPD技术对21个不同来源的寄生松墨天牛Monochamus alternatus的球孢白僵菌Beauveria bassiana菌株的DNA指纹图谱进行了测定.从RAPD结果可知寄生松墨天牛的白僵菌菌株间具有丰富的遗传多态性.聚类分析把21个寄生松墨天牛的白僵菌菌株分为两大类群:①B1,B14,B4,B5,B6,B7,B8,B12,B13,B10,F-263,Bxs,B2,B11,Bf,Bz,B9;②B3,B15,By2,By7.结果表明菌株DNA多态性与采集地之间有一定的相关性,与对松墨天牛幼虫的毒力未表现出相关性.图2表2参11     

绿僵菌毒素的提取

用金龟子绿僵菌的液物培养体,提取绿僵菌素。每升培养液得绿僵菌素0.7mg。用绿僵菌素注射青杨天牛幼虫,每克虫体用量10.6μg,3d内死亡率达100％。     

绿僵菌毒素的研究进展

绿僵菌毒素是绿僵菌产生的具有杀虫活性的次生代谢物质,在农业害虫防治方面具有广阔的应用前景。根据其分子量和结构分为低分子量毒素和高分子量蛋白毒素两大类,对其分子结构、种类、提取方法、生物活性、产生条件等进行了综述。     

绿僵菌和白僵菌对刚竹毒蛾的毒力比较

3株金龟子绿僵菌(M1、M2、M3)和3株球孢白僵菌(B1、B2、B3)经室内侵染试验证明,皆能侵染2～3 龄刚竹毒蛾幼虫.3个金龟子绿僵菌菌株中以M3对刚竹毒蛾的毒力最强,LC50、LT50分别为:LC50 M1 = 3.12×107个·L-1、LC50 M2 = 7.01×107个·L-1、 LC50 M3= 7.55×106 个·L-1;LT50 M1 = 6.50～11.65 d、LT50 M2 = 7.66～11.53 d、LT50 M3= 5.88～10.50 d.3个球孢白僵菌菌株中以B1对     

辣椒种质资源的RAPD分析

为明确辣椒种质资源的遗传基础,利用RAPD技术对来自不同生态环境不同类型的辣椒种质资源亲缘关系进行了研究．从160个随机引物中筛选9个用于PCR反应,88．68％的扩增条带表现多态性,聚类分析结果表明,46份辣椒种质资源可分为六大类,DNA分子水平上辣椒亲缘关系与传统方法研究结论基本一致．     

绿竹不同栽培类型RAPD分子标记的研究

利用RAPD标记对22个不同栽培类型的绿竹进行多态性分析.从粗筛后的94个10 bp随机引物中筛选出20个有效引物,共扩增出113条DNA带,其中91条为多态性带,占总数的80.5%.不同引物扩增出不同的DNA指纹图谱.利用POPGEN32进行聚类分析,结果表明:聚类结果可将绿竹的不同栽培类型区分开来;这些不同栽培类型绿竹的遗传距离为0.122 2~0.815 4,大部分在0.6以下;RAPD分子标记对竹类植物种下等级进行分类有一定的意义.     

锥栗不同品种遗传距离的RAPD分析

运用RAPD法对不同锥栗品种间基于DNA基础上的遗传距离进行了研究，建立了锥栗PCR反应的标准程序，得到的扩增片段大小在500－2000bp之间，确定了10个品种基于DNA分子水平上的相似系数。当相似系数等于0．74时，可把这10个品种分为4类，即“油栗仔，蔓榛，中尖嘴，猴嘴榛”“红紫榛，大尖嘴”“仁嘴栗，乌棒”和“嫁接毛榛”。图2表2参6     

低能离子注入凤仙花后DNA变异的RAPD分析

将3种不同剂量的低能P＋和N＋注入来自同一纯系品种的风仙花（Impatiens balsamina L．）种子中后,采用RAID技术研究风仙花的变异。首先,建立了凤仙花的RAPD反应体系,然后,从25个随机引物中筛选出扩增条带清晰、反应结果稳定、重复性较好的3个引物,共扩增出86条较清晰的谱带,其中多态性谱带23条,分子量在350-2000bp之间。通过分析DNA的变异情况发现,注入低能离子可以使凤仙花发生DNA水平上的变异。这一研究为花卉产业的发展提供了一种新的育种手段。     

一串红品种（系）遗传多样性RADP分析

用RAPD分子标记技术分析了8个一串红品种(系)DNA的多态性,从200个10碱基随机引物中筛选出多态性高的30个引物,扩增出162条DNA谱带中,119条是多态的,多态性占73.5%,通过聚类分析,获得品种(系)聚类树状图;聚类分析的结果,按照株高可将供试的8个一串红品种(系)分为两大类。     

一种适于杉科植物遗传多样性分析的RAPD体系的建立初探

以墨西哥落羽杉、中国柳杉及日本柳杉为代表样品，摸索出一套适于杉科植物遗传分析的RAPD方法，通过大量的引物筛选和扩大所用引物数量，将能从理论上筛选出特定的引物对，用于杉科植物的真假杂种鉴定、亲本确认以及分类学的研究。     

RAPD分子标记技术在茶树亲子鉴定中的应用

为给茶树种质资源的鉴定、品种鉴定、亲子鉴定提供科学方法，通过对3个人工杂交组合的亲本及F1代进行RAPD分析。结果显示：双亲的RAPD谱带能在其F1代中表现出来，表现率分别为94.90%，97.92%,98.64%，说明3个杂交单株是其亲本的真正后代，这也表明RAPD技术在亲子鉴定中具有很强的适用性。同时从3个杂交组合的RAPD分析结果可以看出，双亲的RAPD谱带在F1代出现分离现象，这一结果表明茶树是一个杂合体。     

槟榔江水牛群体遗传结构的RAPD分析

 为探讨RAPD标记在水牛遗传多样性方面检测的应用价值，以及了解槟榔江水牛的群体遗传结构状况，研究采用随机扩增多态性DNA标记技术对槟榔江水牛20个个体进行了遗传变异分析，从70个随机引物中筛选出15个多态性丰富的引物对其所有个体的总基因组DNA进行了PCR扩增，结果15条引物共产生105种扩增片段，多态片段95条，平均每条引物的扩增带数为7，各引物多态性片段范围在2～12之间，多态频率在40%～100%之间，多态座位平均为90.48%。表明槟榔江水牛的遗传多样性较丰富。     

油菜RAPD反应体系的优化研究

针对RAPD反应体系中Taq聚合酶，dNTP和引物这3个影响较大的因素，设计了一组3因素3水平试验，根据试验结果，筛选了油菜random amplified polymorphic DNA(RAPD)反应体系中3因素的最佳浓度配比，即Taq 1.6U,dNTP 0.2mmol/L，引物0．3umol/L。