应用二次细胞技术生产鸡痘弱毒细胞疫苗

应用二次细胞技术生产鸡痘弱毒细胞疫苗,在单位培养瓶内可培养更多的细胞以供鸡痘病毒生长繁殖,对提高鸡痘病毒产量来说,是一种十分有效的方法。     

应用二次细胞技木生产鸡痘弱者细胞疫苗

应用二次细胞技术生产鸡痘弱毒细胞疫苗，在单位培养瓶内可培养更多的细胞以供鸡痘病毒生长繁殖，对提高鸡痘病毒产量来说，是一种十分有效的方法。     

利用BrdU在CEF（TK^＋）细胞中筛选TK^—重组鸡痘病毒

将新城疫病毒（NDV）四平株HN基因，插入不含报告基因，以TK为侧翼的鸡痘病毒表达载体pUTA-2中的复合启动子下游，获得重组表达质粒pUTA-2HN。将重组表达质粒转染鸡痘病毒（FPV）感染的鸡胚成纤维细胞（CEF），培养、收获病毒后，用含40mg/L5－溴－2－脱氧尿嘧啶（BrdU)的培养液，在CEF（TK^ )细胞中筛选培养2代，然后用不含BrdU的培养液进行病毒蚀斑纯,化成功筛选出表达NDV HN蛋白的TK^-重组鸡痘病毒。     

利用BrdU在CEF(TK~ )细胞中筛选TK~-重组鸡痘病毒

将新城疫病毒 (NDV)四平株 HN基因 ,插入不含报告基因、以 TK为侧翼的鸡痘病毒表达载体 p UTA- 2中的复合启动子下游 ,获得重组表达质粒 p UTA- 2 HN。将重组表达质粒转染鸡痘病毒 (FPV)感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,培养、收获病毒后 ,用含 40 m g/ L 5 -溴 - 2 -脱氧尿嘧啶 (Brd U )的培养液 ,在 CEF(TK )细胞中筛选培养 2代 ,然后用不含 Brd U的培养液进行病毒蚀斑纯化 ,成功筛选出表达 NDV HN蛋白的 TK-重组鸡痘病毒     

鸡痘病毒在哺乳细胞内复制的研究

将重组鸡痘病毒在1种禽类细胞和13种哺乳动物及人的细胞内培养.通过电镜观察可见重组鸡痘病毒在CEE、BHK、PK、BTC、Vero细胞内的复制,同时用PCR方法扩增出目的基因,Western-blotting检测到目的蛋白,验证是鸡痘病毒.试验表明鸡痘病毒在禽类、个别哺乳动物细胞中可以复制,但尚未发现在人的细胞内复制;在CEF中可以稳定传30代以上;在BHK内第1代可以观察到细胞病变(CPE);在PK、BTC、Vero内第2代可以观察到CPE,证明鸡痘病毒在个别哺乳动物细胞发生复制,但不能稳定遗传.     

应用鸡胚成纤维细胞培养鸡痘病毒

用丹麦产ＮＵＮＣ一次性细胞培养瓶,１９９培养基加小牛血清培养鸡胚成纤维细胞,结果显示,细胞生长快,贴壁良好,２４ｈ单层细胞即长满瓶底,无卷边脱落现象发生。将在鸡胚绒毛尿囊膜上适应了的鸡痘病毒接种鸡胚成纤维细胞,４ｄ后细胞出现预期的典型病变,并且可见大量多核巨细胞形成,证明鸡痘病毒具有诱发细胞融合的功能,而且说明,用鸡胚成纤维细胞增殖鸡痘病毒,可获得数量可观的病毒粒子。将细胞毒回归鸡胚绒毛尿囊膜,形     

H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗

H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗系以高度成熟安全的鸡痘病毒为载体研制的新型基因工程禽流感一鸡痘二联疫苗，该疫苗毒株的研制是采用重组DNA技术，将我国H5N1亚型禽流感病毒早期分离株的HA和NA基因同源重组到鸡痘病毒疫苗株的基因组中，构建重组鸡痘病毒(rFPV—HA—NA)，经体外、体内试验表明该重组鸡痘病毒具有良好的免疫原性。同时经细胞连续传代，证实了重组鸡痘病毒具有良好的遗传稳定性，从而进一步保证了该疫苗的免疫原性。     

规模蛋鸡场的鸡痘及综合防控措施

<正>目前,在河北省承德地区的规模蛋鸡场常有鸡痘流行,呈现地区性流行,本文对本病的病原体、流行病学、临床症状等加以总结,并提出了综合防控措施,供读者参考。1病原体鸡痘病毒是禽痘病毒引起的一种亚急性的流行性传染病,它包括鸡痘病毒、鸽痘病毒、火鸡痘病毒、鹌鹑痘病毒、金丝雀痘病毒和麻雀痘病毒等。上述痘病毒之间有着密切的亲缘关系,在血清学和免疫学方面具有交叉反应性,但又可互相明确区分。在自然情况下,各种痘病毒对相应的宿主具有选择性的致病作用,但在人工感染时,也可使异种宿主感染。禽痘病毒通常不感染人和其他哺乳动物,也无交互免疫性。鸡痘病毒在病变皮肤的表皮细胞和感染鸡胚的绒毛尿囊膜上皮细胞的孢浆内,可形成卵圆形或圆形的包涵体。本病毒对外界     

共表达H5亚型AIV HA 基因与鸡IL-18基因的重组鸡痘病毒的构建

以鸡痘病毒(FPV)疫苗株为载体,将H5亚型AIV血凝素基因(HA)和鸡白细胞介素18(IL-18)基因分别插入到鸡痘病毒表达载体pUTA-16-LacZ复合启动子(ATI-P7.5×20)和单一启动子(P7.5)下游,构建了携带AIV HA基因和鸡IL-18基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-H5HA-IL18.将H5亚型AIV HA基因插入到鸡痘病毒表达载体pUTA2复合启动子(ATI-P7.5×20)下游构建了携带H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTA2-H5HA.应用脂质体转染法,将重组鸡痘病毒转移载体质粒与282E4株鸡痘病毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),在BrdU药物加压下进行3次蚀斑筛选.以不同代次细胞的mRNA为模板,利用H5亚型AIV HA基因和鸡IL-18基因特异引物进行RT-PCR和蛋白印迹检测,筛选出能共表达H5亚型AIV HA基因与鸡IL-18基因和单独表达H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒rFPV-H5HA-IL18和rFPV-H5HA,这些重组鸡痘病毒的构建为AIV活载体疫苗的研制奠定了基础.     

表达狂犬病病毒糖蛋白的重组鸡痘病毒的构建和鉴定

将 RVG基因插入到鸡痘病毒表达载体 p UTA- 2 Sm a 位点获得重组转移载体 p U TA- RVG,利用脂质体转染已感染中国鸡痘病毒疫苗株 2 82 E4株 2～ 3h的鸡胚成纤维 (CEF)细胞 ,收获病毒后 ,用 Brd U法进行加压筛选重组病毒 ,PCR检测到重组病毒 RVG基因 ,Western blot检测出 RVG,从而证实已成功构建了表达 RVG的重组鸡痘病毒     

表达传染性支气管炎病毒S1基因与鸡IL-18基因重组禽痘病毒的构建

将含痘病毒启动子LP2EP2的鸡传染性支气管炎病毒S1糖蛋白基因和鸡IL-18(ChIL-18)基因同时插入到禽痘病毒转移载体pSY681中,获得重组禽痘病毒转移载体pSYS1/ChIL-18。用脂质体将其转染已感染禽痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与禽痘病毒基因组发生同源重组,产生表达S1和鸡IL-18的重组禽痘病毒(rFPV-S1-ChIL-18)。在含有X-gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选,对重组病毒rFPV-S1-ChIL-18进行多次蚀斑克隆。以重组禽痘病毒DNA为模板,利用S1基因和鸡IL-18基因特异引物进行PCR,分别扩增出1条约1.7 kb和1条约0.6 kb的带。经间接免疫荧光法和T细胞转化试验证实感染rFPV-S1-ChIL-18的CEF中存在表达的S1和鸡IL-18。     

禽痘的发生与诊断

<正>禽痘是由禽痘病毒引起的禽类的急性、高度接触性传染病。在世界各养禽国家和地区均有发生。1病原体痘病毒属痘病毒科、脊椎动物痘病毒亚科,为双股脱氧核糖核酸病毒,具有囊膜,在细胞浆内增殖,似砖形或卵圆形。脊椎动物痘病毒亚科现分四个属,各种动物的痘病毒分属于各个属。各属病毒在形态、构造、化学成分和抗原性方面大同小异,在血清学上也多少有些交叉反应。痘病毒可在易感动物的皮肤上或其他上皮和睾丸内培养传代外,也可在鸡胚尿     

重组鸡痘病毒表达的鸡IL-1β和IL-2以及cMGF对新城疫LaSota疫苗免疫效果的影响

将128只10日龄SPF鸡随机分成8组，每只免疫1PD50的新城疫LaSota疫苗；同时Ⅰ～Ⅵ组鸡分别皮下注射不同剂量的重组鸡痘病毒rFPV-IL-1β、rFPV-IL-2或cMGF，而Ⅶ组和Ⅷ组鸡分别皮下注射鸡痘病毒wt-FPV和PBS作为阴性对照和空白对照。结果，重组鸡痘病毒表达的IL-1β、IL-2或cMGF可以消除鸡痘病毒在免疫后第7d对雏鸡体重增长的影响；一定剂量的IL-1β和IL-2可使鸡脾中CD4^＋T细胞在免疫后第7d和CD8^＋T细胞在免疫后第14d的总体水平提高；免疫第21d新城疫F48E8强毒攻毒后，一定剂量的IL-1β和IL-2能提高免疫保护率，而cMGF却无此作用。结果表明，重组鸡痘病毒表达的IL-1β和IL-2在一定剂量下可增强新城疫LaSota疫苗的免疫效果。     

鸡痘弱毒细胞苗接毒培养工艺探索

鸡痘是由鸡痘病毒(FPV)引起一种急性、高度接触性传染病。防治鸡痘除加强饲养管理及搞好卫生和消毒工作外。最可靠的方法是及时接种疫苗。目前。我国使用的国产鸡痘疫苗有两种。一种为细胞苗。另一种为组织苗。细胞苗以产量大、生产成本低被各生产厂家广泛应用。研究通过不同时间接人毒种来研究接毒的最佳时间，以获得优质高效的产品。为企业大规模生产提供依据。     

鹅源禽痘病毒在鸡胚中的增殖及其理化特性鉴定

为填补国内外水禽源痘病毒培养特性和理化特性研究方面的空白,对国内检测并鉴定的鹅源禽痘病毒,用鸡胚进行分离培养和病毒理化特性研究。将鹅皮肤痘疹样本研磨后,接种SPF鸡胚进行连续传代培养。病理检查和PCR检测证实,病毒可在鸡胚中增殖,且经连续5轮传代后,鸡胚病变及病毒滴度趋于稳定。鸡胚中可以观察到绒毛尿囊膜水肿增厚及白色痘斑等禽痘特征性病变。对采集病变的绒毛尿囊膜进行电子显微镜观察,可见病毒包涵体和典型禽痘病毒粒子。利用建立的鸡胚培养体系,对该病毒理化特性进行鉴定,发现病毒对热(55℃)、酸(pH3)、碱(pH11)、胰蛋白酶、乙醚和氯仿敏感。本研究首次建立了鹅源禽痘病毒鸡胚培养体系并对其理化特性进行了鉴定,从而为系统开展该病毒生物学特性和防控技术研究提供了必要的技术基础。     

鸡痘病毒细胞培养方法的探索

鸡痘病毒(FPV)是痘病毒科脊椎动物痘病毒亚科禽痘病毒属的成员,为双股DNA病毒,主要侵害皮肤(尤其是头部皮肤)、上呼吸道及口腔黏膜的上皮细胞,引起上皮增生、细胞肿大及与之有关的炎症反应,临床上表现为皮肤型、白喉型及混合型三种形式.……     

鸡痘鹌鹑化弱毒细胞苗病毒释放工艺探索

在鸡痘鹌鹑化弱毒细胞苗生产中，一般将收获的细胞培养物反复冻融释放细胞结合病毒，然后进行配苗冻干，为了确定合适的冻融次数和测定冻融对病毒的影响，我们以超声波裂解的细胞毒液为对照，通过对不同处理方法的原苗冻干前后毒价的多重比较，发现冻融对鸡痘病毒影响较大，因此试验确立了新的释放病毒方法（即超声波裂解法），现总结如下。     

HSN1亚型禽流感病毒NA基因在重组禽痘病毒中的表达及其产物的免疫原性

将禽流感病毒A／Goose／Guangdong／1／96（H5N1）株的NA基因及LacZ报告基因克隆到禽痘病毒载体pSY681中，构建重组转移载体pSY（NA＋LacZ），将其转染鸡胚成纤维细胞，经蓝白斑筛选，纯化表达NA基因的重组禽痘病毒rFPV-NA，用其免疫SPF鸡，检测该重组禽痘病毒的免疫原性。结果显示，该重组禽痘病毒能够在体外培养细胞内表达具有生物学活性的NA蛋白，表达产物的分子质量约为55ku；用该重组禽痘病毒免疫SPF鸡后，能够使免疫鸡获得对H5N1和H7N1两种亚型HPAIV攻击的部分保护。表明，重组禽痘病毒rFPV—NA具有良好的免疫原性。     

鸽痘病毒在鸡胚上的增殖和纯化研究

通过实验建立了鸽痘病毒的鸡胚绒毛尿囊膜和鸡胚尿囊腔培养方法,并对这两种方法的病毒收获量进行了比较研究.结果表明:这两种培养方法实用易行,实验所收集的病毒可以满足电子显微镜观察、核酸分析等科研及疫苗生产的需要.为鸽痘病毒的深入研究提供有利的试材.     

H9亚型禽流感病毒HA基因的重组禽痘病毒构建

本试验构建了H9亚型禽流感病毒HA基因禽痘病毒转移载体,经转染、蓝斑克隆、筛选和纯化,获得了遗传性状稳定的HA基因重组禽痘病毒。提取感染重组病毒的鸡胚成纤维细胞(CEF)的DNA进行PCR扩增,获得1.7kb的携带有外源目的基因片段。收集纯化的重组病毒CEF细胞,用H9亚型禽流感病毒多克隆血清作一抗,碱性磷酸酶标记的鸡IgG为二抗进行Western blot检测,结果表明重组痘病毒能在体外的CEF细胞表达HA糖蛋白。