气肿疽梭菌菌体抗原分析

[目的]了解气肿疽梭菌的抗原特性。[方法]对气肿疽梭菌标准菌株(C54-1)的菌体抗原进行提纯过柱,通过制备小鼠免疫血清及免疫印迹技术进行了反应原性试验。[结果]气肿疽梭菌的菌体抗原有8条蛋白带,电泳图谱上分别出现了与之相对应的条带,分子质量分别为93、72、56、46、38、26、15、11 kD,其中第2(72 kD)、5(38 kD)、6(26 kD)峰的抗原表现出明显的特异性。用酶联免疫印迹技术分析气肿疽梭菌分泌蛋白的抗原组分,气肿疽梭菌感染小鼠的血清能与抗原组分蛋白发生反应,其中72、38、26 kD蛋白带显色最深。[结论]为气肿疽梭菌的深入研究提供了理论依据。     

气肿疽梭菌细胞毒素CctA基因的克隆及生物信息学分析

根据GenBank中气肿疽梭菌细胞毒素CctA基因的参考序列,采用PCR方法扩增细胞毒素CctA基因。在将该基因进行克隆和测序后利用生物信息学方法,对细胞毒素CctA蛋白的理化性质、结构功能域、蛋白质二级结构和三级结构及抗原表位等重要参数进行了预测和分析。结果表明:与参考序列(JQ692583)相比,存在3处突变,核苷酸序列的同源性和氨基酸序列的同源性均为99.4%;CctA蛋白的理论等电点为8.00,不存在跨膜区和信号肽序列,二级结构以β-折叠和无规则卷曲为主,主要有4个抗原表位区域。本研究为CctA蛋白功能的深入研究提供了参考,并为气肿疽梭菌单克隆抗体的制备及合成肽疫苗的研发奠定了基础。     

气肿疽梭菌pVAX1-NagH基因核酸疫苗的免疫效果评价

为检测气肿疽梭菌中NagH基因的核酸疫苗的免疫效果,在成功构pVAX1-NagH真核表达重组质粒后,将其转染至Vero细胞,通过间接免疫荧光方法对重组体进行鉴定.鉴定成功后,大量提取重组体质粒,对BALB/c小鼠进行免疫,免疫方法为肌肉注射.设置pVAX1-NagH核酸疫苗组、载体对照组以及PBS阴性对照组.对小鼠采血...     

利用SOE-PCR与TD-PCR技术对气肿疽梭菌FliA（C）-NanA融合基因扩增方法的构建

[目的]构建联合表达气肿疽梭菌的鞭毛蛋白与分泌蛋白神经氨酸酶的方法,用以制备气肿疽生物工程亚单位疫苗.[方法]根据已公布的气肿疽梭菌FliA（C）和NanA序列设计引物,联合使用SOE-PCR与TD-PCR技术,建立融合基因FliA（C）-NanA的扩增方法.[结果]试验成功扩增出了融合基因FliA（C）-NanA.[结论]SOE-PCR方法无需在引物设计中加入酶切位点进行连接,降低了试验成本,且2个基因间未加入其他核酸序列,避免了表达出影响免疫效果的蛋白;TD-PCR的应用节省了试验时间,避免了筛选退火温度的繁琐步骤,解决了基因丢失的问题.     

利用SOE-PCR与TD-PCR技术对气肿疽梭菌FliA(C)-NanA融合基因扩增方法的构建

[目的]构建联合表达气肿疽梭菌的鞭毛蛋白与分泌蛋白神经氨酸酶的方法,用以制备气肿疽生物工程亚单位疫苗。[方法]根据已公布的气肿疽梭菌FliA(C)和NanA序列设计引物,联合使用SOE-PCR与TD-PCR技术,建立融合基因FliA(C)-NanA的扩增方法。[结果]试验成功扩增出了融合基因FliA(C)-NanA。[结论]SOE-PCR方法无需在引物设计中加入酶切位点进行连接,降低了试验成本,且2个基因间未加入其他核酸序列,避免了表达出影响免疫效果的蛋白;TD-PCR的应用节省了试验时间,避免了筛选退火温度的繁琐步骤,解决了基因丢失的问题。     

牛肠毒素性产气荚膜梭菌的分离及鉴定

对黑龙江省3个地区牛场疫牛进行临床诊断，剖检结果为小肠出血性肠炎和心内外膜严重出血等症状，进行了细菌的分离培养、涂片镜检、生化试验和动物感染试验。结果表明：分离菌株均为革兰氏阳性粗短杆菌，严格厌氧，在血平板上具有双溶血环，能发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和暴酵牛乳，肠毒素检测试验阳性，厌气肉肝汤培养物0．2mL小白鼠尾静脉注射，2～10h可使其致死。试验结果表明3个分离株均为产气荚膜梭菌。     

牛气肿疽的诊断与防治措施

牛气肿疽属于牛群易感病,一旦牛感染该病,致死率非常高,容易造成养殖户巨大的经济损失,养殖户需要重视牛气肿疽病防治工作,积极学习牛气肿疽病的诊断方法与防治措施,以形成对该病的有效控制,防止该病的传播与流行,实现自身养殖收益.     

鹿魏氏梭菌分离鉴定及部分生物学特性的研究

对猝死鹿脏器中分离的２４株魏氏梭菌进行研究表明：８７．５％（２１／２４）分离株为血清Ａ型,１２．５％（３／２４）分离株为血清Ｃ型。经毒力测定,筛选出了３株产毒素强的菌株,该项研究为魏氏梭菌疫苗研制奠定了基础。     

浅谈牛气肿疽的防治

气肿疽病俗称黑腿病或呜疽,是反刍动物的一种急性性败血性传染病,以夏季多发,呈地方性流行．因治疗不及时死亡率较高。针对新厂乡牛气肿疽病发病、流行特点及危害等情况的分析,提出相应的防治措施。     

乳酸粪肠球菌的分离鉴定与系统进化分析

分离鉴定一株疑似乳酸粪肠球菌.通过对表型特性包括培养特性、形态学观察、生化试验等鉴定,同时结合16S rDNA系统进化分析;结果该株革兰氏阳性菌能在10℃和45℃生长.接触酶阴性,发酵葡萄糖产酸不产气,可生长于6.5%NaCl和pH9.6的环境等,16S rDNA系统进化分析与粪肠球菌有最高同源性.结论表明分离株为乳酸粪肠球菌.     

纤维素降解细菌的分离、鉴定及其系统发育分析

采用选择性培养基从不同地区土壤中筛选得到具有纤维素分解能力的菌株共65株,从中选取纤维素降解能力较高的细菌1株并对其进行表型、生理生化和分子鉴定。结果表明株菌NJ2-008属于不动杆菌属（Acinetobacter）,与乙酸钙不动杆菌（Acinetobacter calcoacetirum）的序列相似度达98%。     

一株高耐镉菌株的分离、鉴定及系统发育分析

采用梯度浓度驯化方法,从极度重金属污染环境的土壤中取样分离、纯化1株具有较强镉耐受性的菌株(编号为LY29-1-5)。经菌落、菌体形态观察、生理生化及系统发育分析,该菌株初步鉴定为大肠杆菌(Escherichia coli)。该菌株能耐受镉离子的最高浓度为15 mmol/L,在最低抑制浓度试验中,该菌株对铅、铜、锌也表现出了一定的耐受性。     

一株絮凝剂产生菌TS-1的分离与鉴定

[目的]筛选鉴定出高絮凝活性的微生物絮凝剂产生菌。[方法]通过培养基培养分离纯化出高絮凝活性的菌株并通过培养特征观察和生理生化特征测定鉴定筛选出的菌株。[结果]通过用稀释涂布平板法和平板划线法从土壤中分离、纯化和初筛后,从供试土样中共分离到14株具有絮凝性能的细菌,经复筛后得到5株絮凝活性较高（絮凝率〉70%）的絮凝剂产生菌,其中1株经多次传代培养后絮凝活性仍很稳定（絮凝率始终〉90%）,其标记为TS-1。TS-1菌为具有荚膜的革兰氏阳性杆菌,并且菌体内无类脂物质如聚β-羟基丁酸。TS-1为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）,故将该菌定名为Bacillus TS-1。[结论]该试验筛选出的菌株可用于淀粉工业废水的絮凝处理和生化处理。     

犬瘟热病毒贵州株CDV-GZ1的分离与鉴定

为丰富我国犬瘟热病(CD)的流行病学资料,同时为CDV贵州分离株主要抗原基因及结构研究奠定基础,对贵阳市某宠物医院犬瘟热病毒金标卡检测呈阳性病死犬的肝脏、肺脏、淋巴结等组织,取适量经混合研磨过滤后,同步接种于Vero传代细胞上进行病毒分离培养,并对该分离毒株进行理化特性、电镜形态、血清学和核酸检测等系列鉴定。结果表明:在Vero细胞上盲传至第6代时稳定出现特征性的CPE,该毒株为RNA囊膜病毒,电镜下可见胞浆包涵体、病毒粒子呈晶格状排列,病毒可被犬瘟热阳性血清中和,分离病毒为犬瘟热病毒并被命名为CDV-GZ1株。     

一株絮凝剂产生菌TS-1的分离与鉴定

[目的]筛选鉴定出高絮凝活性的微生物絮凝剂产生菌。[方法]通过培养基培养分离纯化出高絮凝活性的菌株并通过培养特征观察和生理生化特征测定鉴定筛选出的菌株。[结果]通过用稀释涂布平板法和平板划线法从土壤中分离、纯化和初筛后,从供试土样中共分离到14株具有絮凝性能的细菌,经复筛后得到5株絮凝活性较高（絮凝率〉70%）的絮凝剂产生菌,其中1株经多次传代培养后絮凝活性仍很稳定（絮凝率始终〉90%）,其标记为TS-1。TS-1菌为具有荚膜的革兰氏阳性杆菌,并且菌体内无类脂物质如聚β-羟基丁酸。TS-1为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）,故将该菌定名为Bacillus TS-1。[结论]该试验筛选出的菌株可用于淀粉工业废水的絮凝处理和生化处理。     

高效产脂肪酶菌株C1的分离鉴定与酶学性质研究

采用平板筛选的方法从油菜地土壤中分离到一株高效产脂肪酶菌株C1,通过生理生化实验及16S rDNA序列分析鉴定为Burkholderia cepacia。研究其酶学性质,得出该菌脂肪酶的最适温度为65℃,最适pH为8.0,具有优良的耐温性和pH稳定性;对正己烷、乙醇耐性较好,对乙腈和乙酸耐性较差;K+、Mg2+对其酶活性有明显促进作用,Ca2+、Cu2+对其酶活性有严重抑制作用。     

苯胺降解菌的分离鉴定及其降解特性研究

通过驯化培养,从活性污泥中分离出一株高效苯胺降解菌,命名为菌株AN5.对该菌株进行了鉴定及降解特性研究.结果表明,分离菌株呈革兰氏染色阳性,细胞为球状或短杆状,菌落颜色呈橙红色.菌株AN5除可降解苯胺外,还可以苯酚、苯甲酸、萘为惟一碳源生长.它的部分长度16S rDNA序列分析表明,分离菌株AN5与嗜吡啶红球菌(Rhodococeus pyriainivorans)的16S rDNA序列具有99%相似性.实验采用PAUP 4.0软件包最大似然法对该菌株与相关菌进行系统发生分析.菌株AN5耐受苯胺的最高浓度可达5 000 mg·L-1.投加蛋白胨可以加速菌株对苯胺的降解.代谢机理研究证实, 菌株AN5在邻苯二酚-1,2-双加氧酶作用下经邻位裂解途径降解苯胺.