甲烷氧化菌的筛选与生理特性研究

[目的]筛选一株甲烷氧化菌,并对其生理特性进行研究。[方法]从河南新乡卫河沿岸土壤中分离筛选甲烷氧化菌,对其碳源利用及生长性能进行研究。[结果]该菌能以甲烷为唯一碳源生长,为革兰氏阴性菌,生长周期为7 d。该菌也能利用葡萄糖、蔗糖、麦芽糖,并发现甲醇这一中间代谢产物对甲烷氧化菌的生长有明显的促进作用。[结论]甲烷氧化菌是一种高效降解甲烷的细菌,因此可以应用于微生物处理甲烷或煤层附着瓦斯,为微生物治理煤矿瓦斯、保护大气环境提供基础。     

一株低温产甲烷菌的分离和鉴定

利用厌氧培养箱法,从大伙房水库冬季湖底淤泥中分离到一株低温产甲烷菌LN-c1,直径0.7 ～1.0 μm,长1.0～1.6 μm,无鞭毛不运动,单生、对生或聚生.能利用H2/CO2、甲醇、乙酸,对氨苄青霉素、红霉素、卡那霉素、利福平均有一定的抗性.最适生长温度20℃,最适盐浓度0.5％ -0.8％,与标准Methanocorpusculum labreanum Z的相似性为99％.     

一株广谱性农药降解菌的分离与鉴定

从杭州农药厂废水排放口污泥中分离到１株能降解部分拟除虫菊酯和一硫代磷酸酯类杀虫剂的广谱性降解菌ＹＦ１１．该菌球杆状，大小（１．５￣１．７）μｍ×（２．５￣２．８）μｍ，革兰氏阴性，４根周生鞭毛。菌落圆形，边缘整齐，表面光滑，凸状隆起。生长最适温度３０℃，最适ｐＨ７．０￣７．５，好氧，氧化酶阳性，能利用蔗糖、阿拉伯糖、山梨糖、乳糖、七叶灵、果糖等，但不能利用淀粉和核糖、ＤＮＡ中Ｇ＋Ｃ含量为６１．７ｍ     

一个厌氧甲烷氧化菌菌株的分离、纯化和特征研究

首次报道浙江象山市郊青紫泥水稻田土壤中一个能厌氧氧化甲烷的细菌菌株AMOB3的分离、纯化及其部分生理生化特性.该菌株革蓝氏染色阴性,细胞极小,仅(0.3～0.5) μm×(0.7～0.8) μm,在厌氧滚管琼脂上可形成细小透明直径约为0.2 mm的菌落.能较好地利用甲烷和甲醇,但仅微弱利用甲酸.电镜显微表明细胞具有周生于胞质的与好氧性甲烷氧化菌相同的囊膜结构.试管培养时该菌株的甲烷氧化活性为2.4 nmol/mL.Cu2+、Mo6+、Mn4+等离子可提高该菌株氧化甲烷的能力,但Cr3+具有抑制作用.经将菌株AMOB3的特性与现有报道的好氧性甲烷氧化菌比较,认为这是一个不同于现有甲烷氧化菌的新种.     

一株高纤维素酶活力纤维素分解菌的分离与鉴定

从腐烂朽木及附近土壤筛选分离到一株高纤维素酶活性的纤维素分解菌CDY-3,经初步鉴定其为芽孢杆菌属菌株。pH5时,该菌羧甲基纤维素酶活性最高达14.59IU,对滤纸有较强的降解能力。生理生化特性表明该菌最适生长条件为30℃,pH7。     

Anammox反应器中氨氧化菌的分离鉴定及特性研究

从Anammox反应器污泥中分离了6株好氧氨氧化菌，并对其中的N1菌株进行了生物学特性研究，试验证实该菌株具有厌氧氨氧化能力。     

开菲尔粒中一株醋酸菌的分离鉴定

[目的]从开菲尔粒中分离并鉴定醋酸菌,为研究醋酸菌在开菲尔饮品发酵及开菲尔粒形成机理提供理论及技术基础。[方法]将开菲尔粒粉碎后制备成不同稀释浓度的菌悬液,涂布于筛选培养基上,37℃条件下培养7d,挑选单菌落进行形态观察、生理生化试验,并扩增其16SrRNA基因,测序鉴定。[结果]筛选到一株醋酸菌——KAB7。[结论]根据该菌形态观察、生理生化试验结果以及16SrRNA测序比对,鉴定为巴氏醋杆菌巴氏亚种。     

土壤中甲烷氧化菌种群数量及其与甲烷氧化活性的关系

采用Hungate厌氧滚管计数技术和气相层析仪检测土样甲烷含量,研究分析了不同植被下黄松泥土壤中甲烷氧化菌种群的数量变化和土壤的甲烷氧化活性.结果表明不同植被下的黄松泥土壤中甲烷氧化菌种群数量在107～108cfu/g干土之间,变化范围不超过2个数量级.水稻田土壤和水稻分蘖期土壤中的甲烷氧化菌种群数量明显高于其它植被下土壤的甲烷氧化菌种群,但相互之间无显著性差异,而它们的甲烷氧化速率却差异显著.土壤中甲烷氧化菌种群数量对土壤氧化甲烷速率有影响但不显著.在氧化甲烷活性很低的土样中加入外源甲烷,可刺激土壤中的甲烷氧化菌增殖,并可诱导甲烷氧化速率达到最大值,但不同植被的土壤达到氧化甲烷最大速率所需的诱导时间不同.不同植被土壤间的甲烷氧化最大速率略有差异,以水稻田土壤为大.     

2株石油降解菌的分离鉴定

为了筛选高效石油降解菌株,通过富集驯化培养,从江汉油田石油污染土样中筛选能以石油为唯一碳源生长的菌株。经过划线培养获得单菌落,并通过形态观察、生理生化及分子生物学分析对菌株进行了初步鉴定和系统分类。结果分离获得2株石油降解效率较高的菌(分别记为G-40和G-94),初步鉴定G-40为侧孢芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus),G-94为热带假丝酵母菌(Candida tropicalis)。     

一株喹啉降解菌的分离与鉴定

为了研究石油污染土壤中含氮杂环化合物的降解情况,本文采用选择性富集培养的方法.以喹啉作为目标污染物,从45份石油污染土壤样品中,分离得到155株降解喹啉污染物的高效降解菌株,其中降解效率最高的-株喹啉降解菌命名为Q5,在72h内对于浓度为500 mg·L-1喹啉的降解率达到72.6%.并通过形态学、生理生化试验和16S rDNA序列比对分析对Q5进行了鉴定.结果表明,株菌Q5为革兰氏阳性菌,在LB平板上菌落呈圆形,边缘整齐,乳白色,表面光滑,有黏稠感,是发酵乳酸杆菌(Lactobacillus),属酵母菌,与Lactobacillus fermentam同源性最高,为99.6%.     

奶牛布鲁氏杆菌的分离与鉴定

[目的]为布鲁氏杆菌的分离与鉴定提供依据。[方法]时某奶牛场进行布病调查,采集血清、血液、牛奶等样品通过硫化氢产,生试验、染料抑菌试验和热凝集试验进行布鲁氏抒菌的分离与鏊定。[结果]21份牛奶样品在浓度10％CO2培养葙中培养至第4天时,有5份培养基上生长出30～50个0．05～2．00mm大小无色、闪光圆形、湿润、隆起的可疑小菌落。硫化氢产生试验结果表明,5个菌株均可产生硫化氢;染料抑菌试验结果表明,5个菌株确为布鲁氏杆菌;热凝集试验结果表明,该5菌株未发生变异;PCR检测结果表明,相对应的牛奶检测呈阳性。[结论]初步鉴定从布病可疑阳性牛分离出的5个菌株为牛布鲁氏杆菌。     

奶牛子宫内膜炎血常规分析及病原分离鉴定

为探讨血常规检验在奶牛子宫内膜炎临床诊断中的意义,分析了患病奶牛的血常规数据,同时分离鉴定其子宫内病原微生物。结果表明,与正常奶牛的血常规数据相比,患病奶牛的白细胞计数极显著增高(P0.01);中性粒细胞百分比和中性粒细胞绝对值均极显著增加(P0.01),淋巴细胞百分比极显著降低(P0.01),说明患病组奶牛可能患有由细菌感染引起的子宫内膜炎。经过纯化鉴定,从患牛子宫内分离出15种(54株)细菌,其中,主要为大肠杆菌和金黄色葡萄球菌,其次是奥斯陆莫拉菌和蜡样芽孢杆菌,且以混合感染为主。     

奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定及耐药性分析

为弄清中国不同地区奶牛乳房炎主要病原菌种类、分布情况及其药物敏感特性,并为奶牛乳房炎的综合防治提供依据,对在内蒙古、甘肃、四川和上海4地部分奶牛场采集的472份临床型或亚临床型乳房炎乳样进行细菌分离鉴定,并对主要病原菌进行药敏试验。结果表明,检测奶样中检出细菌482株,其中金黄色葡萄球菌149株,占30.91%;表皮葡萄球菌91株,占18.88%;无乳链球菌60株,占12.45%;停乳链球菌60株,占12.45%;乳房链球菌35株,占7.26%;大肠杆菌33株,占6.85%。各个地区优势菌群存在差异,药敏试验结果也不相同,分离出的细菌绝大部分对环丙沙星、左氟沙星、氧氟沙星和先锋霉素V高度敏感,但对青霉素、红霉素和万古霉素有较强耐药性。     

STR基因座在奶牛个体识别中的应用

通过分析2份冷冻精液样本和4头可疑种公牛血样的BM1862、BM2113、BM720和TGLA122 STR基因座遗传多样性,旨在判断该2份冷冻精液的种公牛来源,为建立奶牛个识别方法奠定基础。结果表明,应用STR基因座对个体进行识别,鉴别能力达0.9999。说明四个STR基因座可以用于冻精质量监测或奶牛个体识别和亲子鉴定。     

STR基因座进行奶牛个体识别的应用

 通过分析2份冷冻精液样本和4头可疑种公牛血样的BM1862、BM2113、BM720和TGLA122 STR基因座遗传多样性，旨在判断该2份冷冻精液的种公牛来源，为建立奶牛个识别方法奠定基础。结果表明，应用STR基因座对个体进行识别，鉴别能力达0.9999。说明四个STR基因座可以用于冻精质量监测或奶牛个体识别和亲子鉴定。     

牛源非典型分枝杆菌的分离与鉴定

对我国东北和华北地区牛群中非典型分枝杆菌的感染情况进行了调查,从５２头结核（副结核）菌素变态反应阳性及可疑牛的１４２份巴结等材料和在屠宰场预备屠宰的２００头猪（肉）牛（其中８头结核菌素变态反应阳性或可疑）的５６９份淋巴结材料中分离出２０株分枝杆菌。经鉴定牛分枝杆菌３株,非典型分枝杆菌１７株。非典型分枝杆菌进一步被鉴定为：瘰疠分枝杆菌５株,偶发分枝杆菌４株,鸟－胞内分枝杆菌复合物４株,副结核分枝杆菌     

黄牛狂犬病病毒的分离和鉴定

应用鼠脑传代,从具有神经症状的病牛脑组织中分离获得5株病毒,经电子显微镜观察呈典型弹状病毒样粒子.用抗狂犬病毒CVS(狂犬病毒Ⅰ型代表株)免疫血清作ELISA检测及小鼠中和试验,证明分离株病毒为狂犬病毒.用狂犬病相关病毒Lagos bat(狂犬病毒2型)、Mokola(狂犬病毒3型)和Duvenhage(狂犬病毒4型)免疫血清对分离株病毒作交叉中和试验,结果发现分离株病毒与Duvenhage有较密切的抗原联系.而与Lagos bat及Mokola病毒没有抗原联系.用自制狂犬病毒“核蛋白”单克隆抗体作夹心间接ELISA检测分离株病毒的感染鼠脑均呈阳性反应,5株病毒与CVS及其互相之间没有明显差异.结论认为,由河南省黄牛分离的病毒为狂犬病毒.     

宁夏肉牛皮肤病原真菌的分离与鉴定

【目的】从患真菌性皮肤病肉牛的毛发、皮屑、痂皮等病料样本中分离皮肤病原真菌并对其进行种属分类鉴定,为牛真菌性皮肤病的诊断及防治提供参考依据。【方法】无菌采集宁夏地区患皮肤病肉牛的毛发、皮屑、痂皮,将病料样本置于载玻片上,滴加10% KOH溶液1滴,静置5 min后进行镜检观察;将病料样本接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）中进行真菌的分离、纯化培养,对分离的真菌用乳酸酚棉兰染液进行染色观察,根据真菌形态学特征对其进行初步分类;用分离的真菌制备浓度为1×10⁸ cfu·mL^-1的孢子悬液涂抹健康ICR小鼠皮肤,根据其致病性筛选病原真菌;提取病原真菌DNA,对其内部转录间隔区（ITS）进行PCR扩增并测序,登录NCBI GenBank数据库,对病原真菌ITS序列进行同源性比较并构建系统发育树,根据其同源性比较及系统发育分析结果,结合真菌形态学特征对病原真菌作出种属分类鉴定。【结果】病料中含真菌菌丝及链状厚垣孢子,毛发中存在大量小分生孢子;从病料样本中共分离、纯化到23株真菌,分属于毛癣菌属（Trichophyton）、曲霉属（Aspergillus）、横梗霉属（Lichtheimia）、链格孢属（Alternaria）、镰刀菌属（Fusarium）、附球菌属（Epicoccum）、毛霉菌属（Mucor）;小鼠皮肤感染试验表明,分离的毛癣菌属真菌NXGY1、NXGY2具有较强的致病性,试验组小鼠均出现瘙痒、皮屑增多、形成结痂、脱毛等临床症状;毛癣菌属NXGY1、NXGY2 的ITS序列长度大小分别为660、662 bp,其同源性比较及系统发育分析结果表明,NXGY1、NXGY2与疣状毛癣菌(Trichophyton verrucosum)同源性高达99% ,在系统发育树上属于同一分支,遗传距离最近。【结论】根据真菌形态特征及系统发育分析结果,鉴定分离的肉牛皮肤病原真菌NXGY1、NXGY2为疣状毛癣菌(T. verrucosum)。     

牛源鲍曼不动杆菌的分离鉴定

牛源鲍曼不动杆菌属于机会性致病细菌,不仅感染动物,还可通过接触传播感染人,引起严重的医源性感染。为了预防人畜感染鲍曼不动杆菌,并为治疗提供理论依据,本实验鉴定了海南省东方市某牛场病死牛致病菌,深入探究该牛场牛病死具体原因,对该患病牛肺脏组织进行采集,分离纯化致病菌株,通过16S rDNA及生化鉴定等方法确定致病菌遗传背景,同时测定该致病菌对6周龄昆明小鼠的半数致死量及其药物敏感性。实验结果表明:该致病菌株与鲍曼不动杆菌的同源性高达99.8%;对实验小鼠体致病力强,对半数致死量为8.89×107 CFU·mL?1;药物敏感试验表明,该菌株对羧苄青霉素、氧氟沙星、环丙沙星敏感。     

黑龙江某规模化场奶牛急性乳房炎病原分离鉴定与药敏实验

2016年5月,黑龙江省某规模化牛场爆发急性乳房炎,为确诊其病因,无菌采取10份乳样进行细菌的分离鉴定,并对分离菌株进行培养特性检查、生化试验鉴定和药敏试验。经检查10份乳样中大肠杆菌单独感染1例,葡萄球菌单独感染1例,链球菌单独感染1例,葡萄球菌和链球菌混合感染4例,葡萄球菌和酵母菌混合感染2例。该研究为该牛场奶牛乳房炎的病因分析和防治提供了指导。