暗纹东方鲀芳香化酶基因的结构及表达分析

性腺型芳香化酶基因是一种调节雌雄激素平衡的基因。为初步探究暗纹东方鲀性腺型芳香化酶基因在性腺发育和性别分化过程中的作用,通过RACE及荧光定量PCR技术,成功克隆出暗纹东方鲀性腺型芳香化酶基因的cDNA全长序列,共1786 bp,编码514个氨基酸,与红鳍东方鲀及星点东方鲀同源性最高。氨基酸序列分析显示,该基因编码的蛋白是一种稳定的亲水性蛋白,但不存在信号肽序列;性腺型芳香化酶含有38个磷酸化位点、4个N-糖基化位点、2个跨膜保守结构域;其氨基酸序列在哺乳动物和鱼类中均十分保守,且含有跨膜区、Ⅰ-螺旋区、Ozol′s肽区、芳香化酶特异性保守区和亚铁血红素结合区等功能保守区。表达分析显示,暗纹东方鲀性腺型芳香化酶基因主要在肌肉和卵巢中表达,其次在其他组织中也有少量表达,而且在幼鱼不同发育期卵巢中的表达量呈现出逐渐升高再降低的表达趋势,在精巢中则基本不表达。研究结果表明,性腺型芳香化酶基因很可能参与了暗纹东方鲀雌鱼性腺分化后卵巢的发育、雌性特征的维持和其他组织的发育等过程。     

暗纹东方鲀心型脂肪酸结合蛋白H-FABP基因克隆与表达分析

为深入了解心型脂肪酸结合蛋白(heart-type fatty acid-binding protein,H-FABP)的结构与功能,采用RACE技术克隆得到暗纹东方鲀H-FABP的全长cDNA序列,共772 bp,开放阅读框为402 bp,编码133个氨基酸。生物信息学分析表明,暗纹东方鲀H-FABP基因具有一个脂质转运蛋白家族保守结构域和多个蛋白激酶磷酸化位点。NJ法系统进化分析显示,暗纹东方鲀与红鳍东方鲀亲缘关系最近,其次是鲈形目。经荧光定量PCR检测,H-FABP基因在暗纹东方鲀所有被检测的组织中都有表达,其中肝脏中的表达量最高,其次为肌肉和心脏,预示H-FABP主要参与脂肪酸氧化分解过程。为探究豆油作为脂肪源的可行性,采用不同比例(0、25%、50%和75%)豆油替代鱼油的饲料投喂初始体质量为(8.31±0.20)g的暗纹东方鲀8周。结果显示,全鱼油组肝脏中H-FABP基因的表达量显著高于50%豆油组和75%豆油组,但与25%豆油组无显著性差异,且随着饲料中豆油比例的增加,暗纹东方鲀肝脏中H-FABP基因的表达量呈下降趋势。研究表明,富含n-3多不饱和脂肪酸的鱼油可以促进脂肪酸氧化分解,能预防脂肪肝。因此,为不影响暗纹东方鲀肝脏脂肪代谢,饲料中豆油替代鱼油的比例应控制在50%以下。     

暗纹东方鲀Hepcidin基因的扩增及序列分析

利用聚合酶链式反应,首次从暗纹东方纯基因组DNA中扩增Hepcidin基因的部分序列,序列分析表明,不同鱼类之间的Hepcidin基因DNA序列之间的遗传距离为0.33～1.08,所获得的Hepcidin序列,为进一步研究暗纹东方纯中Hepcidin基因的作用机制提供了基础。     

暗纹东方鲀线粒体COIII克隆及序列分析

克隆并测定了暗纹东方鲀线粒体基因组(m tDNA)含完整的细胞色素氧化酶亚基Ⅲ(CO III)及其下游70 bp的tRNAG ly序列。CO III基因编码框包含786个核苷酸,编码262个氨基酸的蛋白质。鱼类CO III的序列组成对A T核苷酸的偏倚程度比较低。通过暗纹东方鲀与GenBank中8个目12种鱼类的CO III序列同源性比较,显示暗纹东方鲀与这些鱼类的CO III基因具有较高的同源性。根据暗纹东方鲀与鲀目其他5种鱼的CO III基因序列所建立的进化树,与传统的分类地位相吻合。推定的tR-NA的二级结构具有典型的三叶草型结构。根据CO III序列构建的分子进化树分析,认为在采用线粒体基因序列进行分子进化分析时,应综合考虑物种遗传变异的特点。     

暗纹东方鲀常见疾病及防治方法

暗纹东方鲀（Fugu obscurus（Abe））俗称河豚,由于其肉质细腻鲜美,被誉为长江“三鲜”之一,在我国华东地区有食用河豚的传统,市场前景看好。江苏中洋集团自1995年开始养殖暗纹东方鲍,已有十多年的历史,现已发展为全国最大的暗纹东方纯养殖基地,拥有国家级暗纹东方纯良种场,国家质量技术监督局授予南通地理标志性产品。经过多年的养殖,对于暗纹东方纯常见疾病及防治有独特的方法,现将在河豚养殖中的常见病害的流行与防治进行总结,供参考。     

暗纹东方鲀卵巢氨基酸组成分析

本文采用美国WatersHPLCPicoTagTM氨基酸分析技术对暗纹东方卵巢的氨基酸组成进行了分析。结果表明暗纹东方卵巢含有18种常见氨基酸,其中含有人体必需氨基酸8种,占氨基酸总量的38．61％,谷氨酸含量最高．占总量的12．58％。     

暗纹东方鲀TGF-β1基因的克隆、表达特征及生长性状相关SNP位点筛选

为探究暗纹东方鲀(Takifugu fasciatus)TGF-β1基因与其生长性状的关联及作用,采用RACE技术克隆了暗纹东方鲀TGF-β1基因,分析了其基因结构与表达特征,并通过直接PCR扩增法对TGF-β1基因进行多片段比对,在此基础上筛选出与生长性状相关的SNP位点。研究发现TGF-β1基因cDNA全长共2 217 bp,包含5′UTR 51 bp, 3′UTR 1 014 bp, ORF 1 152 bp,编码383个氨基酸。氨基酸序列比对分析表明,暗纹东方鲀TGF-β1基因与红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)同源性最高(92.82%)。进化树分析表明,暗纹东方鲀TGF-β1基因编码氨基酸序列与红鳍东方鲀聚为一支,与鲈形目鱼类亲缘关系最近(68.46%～73.33%)。qRT-PCR检测显示,TGF-β1基因在暗纹东方鲀8种不同组织(心脏、肝脏、脑、脾脏、肾脏、肌肉、中肠和鳃)都有表达,其中肾脏表达量最高,心脏和脾脏表达量次之。通过SNP位点不同基因型与个体生长性状的相关性分析,发现TGF-β1上的SNP g. 3908 C>A位点与暗纹东方鲀多项生长性状...     

暗纹东方鲀仔鱼对药物的耐受性研究

采用急性攻毒的方法,对暗纹东方鲀仔鱼进行硫酸铜、硫酸铜与硫酸亚铁合剂和福尔马林等3种水产养殖常用驱虫药物的毒性试验。结果表明：暗纹东方鲀仔鱼对3种药物敏感的大小顺序为：硫酸铜与硫酸亚铁合剂〉硫酸铜〉福尔马林;暗纹东方鲀仔鱼对硫酸铜合剂的敏感性最高,安全浓度小于0．05mg／L;对硫酸铜的安全浓度为0．21mg／L,24小时半致死浓度分别为1．03mg／L和1．25mg／L。暗纹东方鲀仔鱼对福尔马林的敏感性相对较低,浸洗浓度至少可达20mg／L。     

暗纹东方鲀渗透压调节相关基因响应盐度变化的表达特征

为了探索暗纹东方鲀(Takifugu obscurus)响应盐度变化的渗透压调节机制,本研究将淡水养殖的幼鱼转移至盐度34的海水中进行盐度适应,检测了盐度适应不同时间(1、2、3、5、7、10和14 d)后,Na⁺和Cl^–转运蛋白(NHE1)、Na⁺和葡萄糖转运蛋白(SLC5A1、SLC5A2)、Mg²⁺转运蛋白(SLC41A1、TRPM6、TRPM7)、Ca²⁺转运蛋白(Atp2b2)、SO₄^2–转运蛋白(SLC13A1、SLC26A1)以及水通道蛋白(AQP1、AQP10)这11个渗透压调节相关基因在肾脏和肠道中的表达变化情况。研究结果显示,暗纹东方鲀适应盐度变化的14 d中,NHE1、SLC5A2、SLC41A1、SLC26A1、AQP15个基因的表达变化极其显著,在肾脏中的表达显著升高,最高表达水平可以达到淡水组的30～100倍;但在肠道中,除SLC26A1的表达仍呈上升趋势外,其他4个基因的表达均出现显著的下降,最低下降了4...     

暗纹东方鲀烂尾病防治药物的筛选

本文采用纸片法研究了暗纹东方鲀烂尾病病原菌对２０ 种药物的敏感性,病原菌对呋喃妥因、环丙沙星、诺氟沙星高度敏感,采用药液浸浴和药饵投喂相结合的方式治疗效果显著。     

暗纹东方鲀胚胎发育的观察

采用连续观察法对暗纹东方鲀(Takifugu Obscurus)人工授精的受精卵的发育进行观察,详细记录了暗纹东方鲀胚胎发育各阶段的形态特征。结果显示:经人工催产所获得的暗纹东方鲀受精卵为圆形,鹅黄色且透明,平均卵径为1.118~1.274 mm,受精卵在水温21℃±0.5℃下,受精3h10min后开始第1次卵裂,受精后40 h30 min开始形成器官,受精后131 h 15 min开始孵出仔鱼。刚孵出的仔鱼全长(2.550±0.675)mm,肌节26~28对,卵黄囊大而侧扁,长径为(1.014±0.075)mm,短径为(0.904±0.095)mm。整个胚胎发育过程可划分为33个时期。     

暗纹东方鲀血细胞发生的观察

通过对暗纹东方鲀(Takifugu obscurus)血液涂片及头肾、体肾、脾脏和肝脏四种脏器印片的光镜观察,发现血细胞的发育大致经过三个阶段,即原始阶段、幼稚阶段、成熟阶段。实验对不同发育阶段的红血细胞、淋巴细胞、单核细胞、粒细胞进行了观察和测量,并对暗纹东方鲀血细胞的发生过程做了初步探讨。实验结果表明暗纹东方鲀血细胞的发育主要在头肾和体肾,肝脏印片未观察到原始造血细胞,提示肝脏可能不是暗纹东方鲀的造血器官。     

暗纹东方鲀集约化养殖中的几种常见疾病的诊断、治疗及防治

本文报道了1995～1998年间作者在暗纹东方鲀集约化养殖中,对小瓜虫病、鲀异钩虫病、指环虫病、车轮虫病及细菌性疾病进行的诊断、治疗及防治方法,同时描述了各病的典型症状。本文为鉴别、治疗、防范暗纹东方鲀鱼病提供了依据,在集约化养殖中具有一定的应用价值。     

暗纹东方鲀幼鱼发育及工厂化育苗的研究

描述了暗纹东方鲀的幼鱼发育及工厂化育苗的技术和方法，包括鱼池、鱼苗的形态特征、水质管理、饵料、疾病防治等。观察和记录了幼鱼发育的形态特征。培育10～15d仔鱼从内源性营养向外源性营养过渡是危险期，养殖后期要避免鱼电苗互残。充足而适口的饵料，合理的密度，及时分养，保持良好的水质是提高苗种成活率的关键。     

暗纹东方鲀非01霍乱弧菌的鉴定及毒力基因检测

在对养殖暗纹东方病害调查中,从呈典型症状病鱼腹腔和肠道粘液中分离到2株（J-1和H-3）菌株,经生化特性和血清型鉴定为非01群霍乱弧菌(Non-01 Vibrio cholerae)。注射、创伤和浸泡3种方式进行人工感染试验表现出较强的致病性,出现症状与自然发病鱼相同。为进一步确认分离菌株的分类地位,使用P1、P2引物,以非01群霍乱弧菌N92001菌株和01群霍乱弧菌N16961菌株为对照,对分离菌株进行PCR扩增,得到451bp的DNA片段。根据现有霍乱弧菌肠毒素ctxA基因序列设计引物P3,P4,以N16961菌株为阳性对照,PCR扩增结果均得到大小为400 bp的DNA片段。在对H-3菌株的扩增片段进行纯化、克隆和测序,得到407bp序列,该菌株与N16961菌株中肠毒素ctxA基因序列的完全一致,证实该片段源于ctxA基因。进一步说明从暗纹东方体内分离到的J-1和H-3菌株具有霍乱肠毒素ctxA,有一定的致病力。     

暗纹东方鲀的一种病毒性疾病

发病暗纹东方鲀以体表和内脏出血为主要症状,死亡率可达80%以上.显微镜检查体表、鳃丝及肠腔未见寄生虫.病鱼的肝脏和血液中未能分离到病菌.经电镜检查,在肝脏组织中发现大量球形或多角形病毒颗粒,核衣壳直径约85 nm,双层衣壳,病毒核心直径50～60 nm,无囊膜,未见包涵体.病毒颗粒常聚集成团,呈晶格状排列,聚集团外有包膜,有的病毒颗粒分散于细胞中.病毒的形态结构及大小与呼肠孤病毒相似.对该病的防治方法作了讨论.     

养殖型暗纹东方鲀生长与发育特性

观测养殖型暗纹东方鲀，获得4个年龄组的生长数据和解剖资料。拟合出雌、雄的体长体重关系和生长方程，分析其肥满度、胸腹围特点以及性腺和肝脏发育特点。结果显示，养殖型暗纹东方鲀雌雄体长生长规律相似；但体重在2．5龄前雄鱼生长速度大于雌鱼，2．5龄后则相反。养殖暗纹东方鲀体型比野生暗纹东方纯肥胖。体重／体长和肥满度皆大于野生型。研究还发现，养殖暗纹东方鲀性腺发育不良和肝脏脂肪变性发生率高，且两者的发生存在一定关系，致使全人工育成的成鱼繁殖难以成功。     

暗纹东方鲀线粒体DNA控制区结构和系统发育分析

以暗纹东方(Takifugu fasciatus)肝脏线粒体DNA为模板,参照GenBank中红鳍东方(Takifugu rubripes)线粒体DNA序列设计合成特异引物进行PCR扩增,获得了暗纹东方线粒体DNA控制区基因(818 bp)及5′端上游的tR-NAPro基因(71 bp)的全序列。控制区碱基组成为T32.2%,C 19.1%,A35.6%,G13.2%。对照其他已报道的鱼类控制区结构,对暗纹东方控制区的结构进行了分析,识别了其终止序列区、中央保守区和保守序列区,找到了终止相关的序列TAS以及保守序列(CSB1,CSB2,CSB3)。CSB1、CSB2序列相对保守,TAS与其回文基序可形成稳定的茎环结构,成为H-链复制延伸时的终止识别位点。同时运用DNA分析软件对暗纹东方与GenBank中其他10多种鱼类的mtDNA控制区序列进行比对,并选取东方属的7种鱼类mtDNA控制区序列构建分子系统树。结果显示控制区基因较适于科鱼类中同属不同种的系统发育分析。     

光照强度对暗纹东方鲀稚鱼摄食的影响

在0～1000lx光照范围内,对不同光照强度下暗纹东方鲀稚鱼摄食量进行了测定,稚鱼在500lx时摄食强度最大,其次为300、700lx,摄食率在500lx时最高,并在5min时达到最大值,40～60min时段摄食效率最低接近停食。     

体重对暗纹东方鲀摄食影响的研究

利用室内养殖实验研究了暗纹东方鲀的体重与摄食率的关系以及其日粮的变化规律。结果表明,随着体重由12．3g增加到213．2g,摄食率由12．6％下降到2．6％,由于暗纹东方鲀属于偏肉食性鱼类,其日粮变化一般以2天为一个周期呈振荡型变化。