5例疑似高致病性猪蓝耳病疫情的诊断

对5例疑似高致病性猪蓝耳病疫情进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒（Nsp21594-1680变异株）RT—PCR检测、猪瘟病毒抗原检测和猪传染性胸膜肺炎抗体检测,结果4例疫情为猪瘟,仅1例疫情为高致病性猪蓝耳病。     

高致病性猪蓝耳病的实验室诊断

采用猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因RT-PCR检测方法和猪繁殖与呼吸综合征病毒变异毒株试剂盒检测方法,对六盘水市钟山区某猪场发生的一起疑似高致病性猪蓝耳病进行实验室诊断,确诊为由猪繁殖与呼吸综合征病毒变异毒株引起的高致病性猪蓝耳病。     

高致病性猪蓝耳病病原核酸的RT-PCR检测

对高致病性猪蓝耳病病毒（PRRSV）Nsp2基因缺失变异特征,设计特异性引物,建立RT—PCR方法,对疑似高致病性猪蓝耳病病例进行病原核酸检测,并对扩增所得片段进行克隆测序,通过序列分析以验证RT—PCR扩增的特异性。结果表明：发病猪为高致病性猪蓝耳病病毒感染,建立的RT-PCR方法能够鉴别诊断经典猪蓝耳病和高致病性猪蓝耳病感染。     

高致病性猪蓝耳病的防控

高致病性猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸综合征病毒的变异株引起的一种急性、高致死性传染病。通过对高致病性猪蓝耳病的发病情况、发病特点、流行病学、临床症状与病理变化的阐述,提出了防控该病的具体措施,以期为高致病性猪蓝耳病的防控提供可靠的参考依据。     

高致病性猪蓝耳病防治策略探讨

高致病性猪蓝耳病属于一种急性疫病,是猪在繁殖过程中跟呼吸综合征病毒变异株引发的一种高致死性疾病,高致病性猪蓝耳病首例是发生在2006年,当时高致病性猪蓝耳病的出现对我国的生猪产业造成了巨大的影响.本文分析了高致病性猪蓝耳病的防治问题,重点探讨了高致病性猪蓝耳病的防治策略.     

高致病性猪蓝耳病的防控

高致病性猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸综合征病毒的变异株引起的一种急性、高致死性传染病.通过对高致病性猪蓝耳病的发病情况、发病特点、流行病学、临床症状与病理变化的阐述,提出了防控该病的具体措施,以期为高致病性猪蓝耳病的防控提供可靠的参考依据.     

猪繁殖与呼吸综合征血清流行病学调查

猪繁殖与呼吸综合征（又称蓝耳病,PRRS）,在上世纪80年代后期首次在欧洲和美国出现,两种毒株具有不同的抗原性,90年代初出现在我国,危害我国养猪业。2006年5月底开始,从江西省开始的高致病性猪蓝耳病席卷全国,在我国只发现和分离到美洲株蓝耳病病毒,当前流行的高致病性猪蓝耳病病毒也是美洲株。猪繁殖与呼吸综合征会引起猪繁殖问题、呼吸系统问题和轻度的神经症状,     

猪蓝耳病病毒感染野猪病例的实验室检测

应用猪蓝耳病、猪瘟RT-PCR检测试剂盒对疑似猪蓝耳病病毒、猪瘟病毒混合感染野猪病料进行检测,并对阳性材料进行病原特征基因序列测定与分析,结果显示:送检病料存在猪蓝耳病病毒感染,但不存在猪瘟病毒感染;对猪蓝耳病病毒流行株NPS2基因分析表明,野猪源蓝耳病病毒NPS2基因与家猪源同源性达95.2%以上,是存在基因缺失的高致病性猪蓝耳病病毒。研究结果说明,高致病性猪蓝耳病病毒可引起野猪发病,应采取相应疫苗免疫进行防控。     

高致病性猪蓝耳病流行特征及防控要点

高致病性猪蓝耳病是由猪蓝耳病病毒变异株引起的一种急性高致死性传染病,为有效预防该病的发生和流行,现将有关该病的流行特征及防控要点阐述如下。     

高致病性猪蓝耳病的特点及其防治技术

高致病性猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株引起的一种免疫抑制性疾病。该病传播迅速,分布广泛,能引起严重经济损失。在总结猪高致病性蓝耳病的病原学特点、流行特点、临床症状、病理变化特点的基础上,提出高致病性猪蓝耳病的防治方法:增强生猪的特异性抗病力;加强母猪、断乳仔猪、保育仔猪、育肥猪的保健;提高猪场的管理水平。在治疗高致病性猪蓝耳病时还需预防继发感染并对症治疗;减少应激并正确使用各类药物。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量RT-PCR和RT-LAMP快速检测方法的建立

猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）是世界各地重要猪病毒性病原之一,每年给养猪业造成重大损失。本试验建立了应用TaqMan-LNA的荧光定量RT-PCR和逆转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)2种PRRSV检测方法。结果表明荧光定量RT-PCR和RT-LAMP检测下限分别为10²和10¹ 拷贝数/μL,都具有良好的特异性。临床样本检测结果同样表明2种方法都具有良好的特异性和灵敏度。本试验所建立的TaqMan-LNA荧光定量RT-PCR和RT-LAMP可有效的应用于PRRSV的检测。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

为建立一种快速、灵敏、简便的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）早期检测方法,本研究利用逆转录环介导恒温扩增技术（RT-LAMP）,针对PRRSV的ORF5基因片段设计了4条引物,利用Bst DNA聚合酶在65 ℃恒温条件下进行逆转录扩增,通过1.0%琼脂糖凝胶电泳和加入SYBR Green Ⅰ染料肉眼判断结果,建立了PRRSV RT-LAMP检测方法。结果表明,该检测方法具有良好的特异性,与其他常见病毒如猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒等无交叉反应,较普通RT-PCR灵敏性高100倍。采用RT-LAMP和RT-PCR分别对10份临床样本同时进行检测,符合率为100%。因此,本研究建立的RT-LAMP是一种可适用于临床PRRSV检测的快速、简单、灵敏、特异的检测方法。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒M基因RT-LAMP检测方法的建立

本研究根据GenBank中登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)M基因保守序列6个特异性部位设计了 2对引物,建立了PRRSV的环介导逆转录等温检测方法。结果表明,该方法灵敏度比RT-PCR高100倍;全部反应可在1 h内完成并可得到其特有的阶梯状条带,而且猪圆环病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒的扩增结果均为阴性;在反应体系中添加SYBR GREENⅠ染料后,可通过肉眼观察有无荧光而直接判定结果。该方法灵敏度高、特异性好,可作为猪繁殖与呼吸综合征病毒的快速诊断方法。     

猪繁殖与呼吸综合征RT-LAMP检测方法研究

应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),利用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N蛋白)ORF7基因保守序列的6个区域设计2对特异引物,经反应体系、反应条件优化及敏感性和特异性试验,建立了PRRSV RT-LAMP检测方法。研究结果表明,该检测方法不需要复杂仪器,仅用一台普通恒温水浴锅,在等温条件(63 ℃)保温1 h,即可完成核酸扩增反应,加入核酸染料SYBR GreenⅠ后,用肉眼即可对试验结果进行准确判定,为田间和基层部门检测猪繁殖与呼吸综合征病毒提供了一种廉价、简便、快速、敏感、特异的新方法。     

PRRSVNsp9蛋白基因的RT—LAMP检测方法的建立

根据GenBank中登录的PRRSVNsp9基因序列,应用PrimerExplorerV4软件,在该基因序列中选取保守区设计了4条RT—LAMP引物,旨在建立1种针对Nsp9蛋白基因的逆转录环介导等温扩增（RT-LAMP）的快速检测方法。采用引物分组扩增的方法对引物进行了检测,以确保引物的可靠性。对反应体系、温度以及时间进行了优化,检测了该方法的特异性和灵敏度。结果表明,该方法在等温条件下只需50min就能检测出结果。与RT-PCR方法相比,在判定检测结果时不需要借助昂贵仪器设备,具有高特异性、高灵敏度、操作简便快速等特点,适合于临床检测的应用。     

欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光RT-PCR检测方法的建立

根据欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因序列,设计E1和E6 2套PCR引物和TaqMan荧光探针,建立E1和E6荧光RT-PCR方法,用于检测PRRSV。反应条件优化后,用10倍倍比稀释的质粒DNA、cDNA进行PCR扩增以检测其灵敏度,同时对猪瘟(CSFV)、猪伪狂犬(PRV)等7种病毒进行特异性检测。结果显示,建立的E1和E6荧光RT-PCR可以检出欧洲型PRRSV,敏感性依次为616和216个拷贝的PRRSV重组质粒DNA,而CSFV等非PRRSV均为阴性。建立的E1、E6荧光RT-PCR具有快速、灵敏、准确、低污染等优点,可作为检测欧洲型PRRSV的技术储备。     

不同引物RT-PCR方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的比较研究

用3对分别针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF7、ORF5和ORF5的PCR引物N1/N2、AdGP5.1/AdGP5.2和RFLP5.1/RFLP5.2进行RT-PCR,检测PRRSV,从其敏感性、特异性和临床样品检出率等方面进行比较,在此基础上进一步建立一步法RT-PCR检测方法。结果显示:3对引物对PRRSV均有很高的特异性;应用N1/N2引物病毒最低检测量为7.9 TC ID50,而AdGP5.1/AdGP5.2引物和RFLP5.1/RFLP5.2引物PCR最低检测量为79 TC ID50;运用N1/N2、AdGP5.1/AdGP5.2和RFLP5.1/RFLP5.2引物分别进行RT-PCR扩增检测临床样品,PRRSV检出率分别为28/48、27/48和25/48,且用AdGP5.1/AdGP5.2和RFLP5.1/RFLP5.2引物检测的阳性样品,用N1/N2引物检测也都呈阳性。运用N1/N2引物,通过一步法RT-PCR成功地从PRRSV S1株中扩增出374 bp的目的基因片段。结果表明,用N1/N2引物扩增PRRSV目的基因,其敏感性和临床样品检出率更高,更适合临床样品PRRSV的检测。     

猪瘟病毒RT—LAMP实验诊断初报

为了探索猪瘟病毒诊断的新方法,本研究采用环介导等温扩增法（RT-LAMP）与RT—PCR方法分别对随即采样的80份猪瘟疑似病料进行猪瘟病毒实验室诊断及对比研究。结果表明RT-LAMP与RT—PCR检测得出的阳性率分别为38．75％和36．25％。RT—LAMP检测方法更加灵敏、特异、快速,可用来检测猪瘟病毒,在等温条件下进行,不需要复杂的仪器,操作简单,整个扩增反应可在1h内完成,为临床检测猪瘟病毒提供了一个快速简便的分子生物学方法。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒通用型实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

根据GenBank登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）北美型毒株和欧洲型毒株N蛋白基因保守序列,设计1对特异性引物和1条探针,以ABI公司PRRSV RNA为标准品,优化了PRRSV实时荧光定量RT-PCR检测方法,25μL反应体系引物prrsv-f/prrsv-r（20μmol/L）各0.5μL,探针prrsv-p（10μmol/L）0.5μL为反应最佳工作浓度,标准曲线Ct值和模板启始浓度的log值之间具有良好的线性相关性。特异性、敏感性和重复性检测结果显示,该方法能特异的检测PRRSV北美型毒株和欧洲型毒株,与其他主要猪病病原检测无交叉反应;针对PRRSV RNA标准品检测,灵敏度可以达到10拷贝;重复性检测Ct值变异系数为0.74%～1.52%。用建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法,对40份临床样品检测,与商品化试剂盒检测结果完全一致。