华山松针叶基因组DNA不同提取方法比较

以华山松(Pinus armandi)针叶为实验材料,分别采取经典CTAB法、简易CTAB法、改良CTAB法和Zigenhagen法提取华山松基因组DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计分析、标准差和标准误、卡方检验和SPSS软件分析。通过对实验数据进行卡方检验,所有数据的差异是由DNA提取方法所引起的,不是偶然误差造成的。对(OD260-OD320)/(OD280-OD320)的标准差和标准误分析表明:改良CTAB法的标准差和标准误最小,经典CTAB法次之,再其次是简易CTAB法,说明改良CTAB法稳定性最好,数据精确度最好。通过紫外分光光度计和SPSS分析,经典CTAB法存在RNA污染,(OD260-OD320)/(OD280-OD320)的比值大于1.90,简易CTAB法和Zigenhagen法存在少量蛋白质污染,(OD260-OD320)/(OD280-OD320)的比值小于1.80,而改良CTAB法(OD260-OD320)/(OD280-OD320)的比值是1.855,接近理论值(1.80),且标准差和标准误最小,数据稳定性和精确性最好,提取DNA纯度最好。     

平菇DNA不同提取方法比较

以野外采集的平菇为样本,经菌丝培养后,用FDEB法、FDEB-CTAB法、改良CTAB法和改良SDS法提取DNA,并进行琼脂糖凝胶电泳检测、紫外分光光度计分析和标准差及标准误分析,结果表明:FDEB法提取的平菇DNA产率最高,但存在较严重RNA的污染,标准差和标准误比较大,稳定性差;改良CTAB法综合效果不错,提取稳定性高;改良SDS法提取的平菇DNA的纯度最好,标准差和标准误最低,提取效果稳定性最好,但产量相对较低;FDEB-CTAB法提取平菇DNA,去多糖的效果很好,标准差和标准误适中,但产量较低。综合以上结果,改良CTAB法提取蘑菇DNA综合效果最好。     

两种方法提取杏基因组DNA的比较

以改良CTAB法和改良SDS法提取辽杏等6个杏品种的基因组DNA。经检测,结果表明:两种方法均可提取到较高质量的杏基因组DNA,可用于SSR-PCR扩增,满足后续分子生物学研究需要。改良CTAB法提取的各品种DNA产率和纯度具有更高的稳定性,因此,更适用于杏基因组DNA的提取。     

核桃不同时期叶片及不同组织RNA提取方法筛选

目的 针对核桃组织中富含多酚、多糖及黄酮类物质含量较高的特点,筛选经济高效、适合核桃不同发育时期叶片及不同组织总RNA的提取方法。 方法 以核桃幼嫩、成龄和衰老叶片为材料,分别采用改良硼砂—CTAB法、改良硼砂—CTAB—异丙醇法、改良SDS法、改良Trizol法Ⅱ以及试剂盒法进行总RNA的提取。以筛选与优化的改良硼砂—CTAB法、改良硼砂—CTAB—异丙醇法分别提取核桃胚、叶柄、韧皮部、雄花的总RNA,并对RNA产量、纯度、电泳图谱和RT-PCR进行分析。 结果 5种方法都可获得核桃总RNA,其中,改良硼砂—CTAB法能够从幼嫩叶片、成龄叶片、叶柄和雄花中获得质量高、完整性好的总RNA,28S rRNA亮度约为18S rRNA的2倍,A260/A280介于1.9～2.1之间,A260/A230大于2.0,且总RNA质量浓度可达1 185.2 ng·μL−1;改良硼砂—CTAB—异丙醇法则适合衰老叶片、胚和韧皮部的提取,总RNA质量浓度可达1 019.0 ng·μL−1。通过RT-PCR在不同组织中均能扩增出核桃18S rRNA和翻译起始因子（JreIF1A）片段。 结论 改良硼砂—CTAB法和改良硼砂—CTAB—异丙醇法相比其他3种方法更易排除蛋白质、酚类等杂质干扰,对于不同时期不同组织均有更好的适用性,提取所获得的总RNA纯度和浓度完全符合后续的分子生物学试验要求。     

从白刺老干中提取高纯度DNA的方法

采用CTAB法、SDS法和匀浆CTAB法对白刺越冬老干进行基因组DNA提取,通过琼脂糖凝胶电泳及分光光度计对DNA纯度进行检测,结果表明,用常规的CTAB法和SDS法提取DNA纯度低,匀浆CTAB法得到高纯度的DNA,其OD260/OD280值为1.873～1.923。     

不同提取方法的铁线莲属叶片总DNA提取效果

以铁线莲属植物的叶片为材料,采用CTAB-SDS法、简易CTAB法、改良CTAB法等3种提取方法,比较耗时、纯度、得率、浓度和质量等指标,以期为铁线莲属植物叶片总DNA的提取筛选适宜方法.结果表明,在纯度和浓度方面CTAB-SDS法＞简易CTAB法＞改良CTAB法,在节省提取时间方面改良CTAB法＞CTAB-SDS法＞简易CTAB法.以CTAB-SDS法所提取的9种铁线莲DNA为模板,进行PCR扩增,CTAB-SDS法提取的DNA得率高、质量好,PCR扩增成功率也较高.综合比较,采用CTAB-SDS法进行铁线莲属叶片总DNA提取效果更佳.     

不同化学类型樟树叶片总RNA提取方法比较

采用SDS/酸酚法、Trizol试剂法、常规CTAB法及改良的CTAB法,分别提取5种化学类型樟树叶片总RNA,并对提取效果进行了比较分析。结果表明:Trizol法难以提取樟树叶片总RNA,得率很低;SDS/酸酚法和常规CTAB法得到的RNA存在DNA污染,富含蛋白、多糖、多酚等杂质;这3种方法均不适于富含多糖多酚类物质的樟树叶片总RNA的提取。改良的CTAB法能够提取得到樟树5种化学类型叶片总RNA,且在操作过程中,异樟比油樟和脑樟更易提取。此法能有效去除多糖和蛋白,提取得到的RNA 28S和18S rRNA条带清晰,OD260/OD280值为2.0左右,平均产率分别为115.8μg/g FW。经RT-PCR检测,所得总RNA质量高、完整性好、成功率高,可以满足下一步实验的要求,可作为樟树叶片总RNA提取的首选方法。     

枣花蕾总RNA提取方法的比较

为了探究枣花蕾总RNA提取的最优方法,以沾化冬枣的花蕾为材料,利用改良CTAB法、Trizol法和2种RNA提取试剂盒(PureLinkTMRNA小提试剂盒和北京奥莱博生物技术有限公司提供的植物RNA提取试剂盒)分别提取花蕾的总RNA,并对RNA浓度和电泳图谱进行比较分析,利用奥莱博生物技术有限公司提供的植物RNA提取试剂盒法可提取到纯度较高,完整性好的总RNA,并可用于Northern杂交、cDNA文库构建和半定量RT-PCR等分子生物学试验。     

不同提取缓冲液对三尖杉DNA 提取质量的影响

采用CTAB法研究不同提取缓冲液对三尖杉DNA 提取质量的影响。结果表明：提取三尖杉DNA的最佳缓冲液所含物质及浓度为100 mmol·L-1TrisHCl pH 8.0+0.14 mol·L-1NaCl+2%CTAB+20 mmol·L-1EDTA +2%β 巯基乙醇。采用改进的CTAB法提取了15个三尖杉优树样品的DNA,提取的DNA质量均较高,可以满足分子标记分析的要求。     

枣RNA提取方法的比较

为给在分子水平上对枣进行研究提供参考,通过采用分光光度法和琼脂糖凝胶电泳法检测提取样品,比较CTAB-异丙醇法、CTAB-LiCl法、Trizol-异丙醇法和Trizol-LiCl法等4种RNA提取方法对枣RNA提取的影响。结果表明,CTAB-异丙醇法提取的枣RNA纯度和完整度均较高,杂质较少,DNA残留少,降解不明显,可以用在枣枝条韧皮部、果实、嫩叶和老叶等器官和组织的RNA提取上,应用该方法所提取的RNA可以作为cDNA合成和基因克隆的模板。     

不同方法提取三种生态型沙地云杉总DNA的比较

沙地云杉为内蒙古特有树种,干旱适应性强,是我国西部重要造林树种。在长期适应干旱生态条件的过程中沙地云杉形成了紫果型、绿果型和红果型3种生态型。前期研究证明:紫果型沙地云杉有更强的抗旱能力,绿果型抗旱能力弱,红果型处于二者之间,是一个比较典型的过渡类型。本文从分子生物学的角度,详细叙述了沙地云杉总DNA的提取过程、方法,并对已知的植物DNA提取方法作了针对性的改良;对实验过程提取DNA的影响作了分析。为今后针对进行沙地云杉的植物基因研究和生物工程打下基础,对扩大沙地云杉造林面积和西部大开发的生态环境建设具有重要的指导意义。     

华山松种源选择研究

三峡地区通过对全国10省(区、市)35个华山松种源选择及中试研究,迄今已有26a,取得了结果,为在种子调拨范围和方向上发展华山松提供了科学依据。在三峡地区第1次取得了华山松种源选择的大量系统数据,确定了三峡地区适宜种源。最适宜三峡山区造林的是重庆城口的种子,比本省巴东种源材积提高60.1%,比平均值材积提高22.3%。     

高质量丝栗栲基因组DNA的提取方法

为了促进丝栗栲分子生物学的研究,采用尿素法、柠檬酸钠法、改良CTAB法和SDS法4种方法提取丝栗栲叶片基因组DNA,并对提取效果进行了比较和分析。结果表明,改良CTAB法较适合丝栗栲基因组DNA提取,其提取的DNA产率高,凝胶检测条带整齐清晰,杂质少、无明显降解,OD260/OD280比值在1.8左右;而尿素法难以提取基因组DNA,SDS法提取的DNA得率较低,柠檬酸钠法有蛋白质、多糖等杂质污染均不太适用丝栗栲基因组DNA提取。采用改良CTAB法提取得到丝栗栲幼叶、老叶、嫩芽和幼茎基因组DNA,产率分别为177.3、167.1、242.0和156.7μg/g。酶切分析也证明,改良CTAB法提取的不同组织DNA适用于进行后续分子生物学研究。     

大叶栎总DNA两种提取方法的比较

对大叶栎的总DNA两种提取方法进行对比试验,从外观、浓度、A260/A280、A260/A230、电泳检查和ISSR扩增对所提取到的DNA进行对比,结果显示用改良CTAB法提取的DNA在各方面都达到ISSR扩增的要求,是大叶栎总DNA提取的较好方法。     

相思基因组DNA提取及其RAPD初步分析

以马占相思、大叶相思、厚荚相思幼苗的叶片为材料,采用SDS法、改良SDS法和改良CTAB法进行了基因组DNA的提取并对DNA提取方法作了比较,结果表明改良CTAB法提取效果最好。同时利用改良CTAB法提取出的DNA为模板进行了RAPD分析,鉴别了不同树种之间的多态性。其中有11个引物共扩增出117条谱带,树种间多态性比率为54.7%,遗传多态性明显高于种内。     

松树种子胚乳DNA的抽提与分析

运用改良SDS(十二烷基硫酸钠)法,从马尾松、黄山松、黑松等松树种子胚乳中提取到较高纯度的DNA,并对其纯度、浓度及产率进行了分析.经RAPD检测表明,DNA扩增效果良好,完全能满足常规DNA实验的要求,为针叶树种等其它小粒种子DNA的提取提供了经济、快速、可靠的实验方法.     

华山松主要病虫害综合治理研究

为了解决林业生产中华山松主要病虫害（华山松疱锈病、华山松腐烂病、华山松木蠹象、华山松球蚜）综合治理的技术难题，首次提出了华山松主 虫害综合治理技术。该技术以华山松为保护对象，以4种主要病虫害为治理对象，做好预测预报，采取以预防为主，营林技术措施为基础，生物防治为主导，在阈值原理调控下，科学地采取生物、物理、化不防治等治理措施，逐渐增加华山松森林生态系统的生物多样性，使其结构逐渐趋向合理，最终达到华山松主要病虫害的可持续控制和华山松森林生态系统的持续平衡发展，为华山松生产谋取最大的效益。