小麦醇溶蛋白基因的HPCE和A—PAGE染色体定位及其比较分析

利用高效毛细管电泳（ＨＰＣＥ）技术分离中国春醇溶蛋白获得了４５个不同组分（峰或峰肩），通过过中国春第１，４，６，７部分同源群染色体ＮＴ系和ＤＴ系的ＨＰＣＥ分析，确定了各个醇溶蛋白组分的编码基因所在染色本臂，结果显示，全部蛋白组分均由第１，部６部分同源染色体短臂上的基因编码（即Ｇｌｉ－１和Ｇｌｉ－２位点），其中Ｇｌｉ－Ａｌ，Ｇｌｉ－Ｂ１和Ｇｌｉ－Ｄ１分别编码５，１０和１２个组分Ｇｌｉ－Ａ２，Ｇｌｉ－     

中国小麦品种醇溶蛋白Gli-1和Gli-2编码位点等位基因组成分析

利用酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE)方法,鉴定分析了我国部分重要小麦品种或种质醇溶蛋白Gli-1和Gli-2编码位点等位基因组成特点.36个品种的研究结果表明,我国小麦品种在醇溶蛋白几个主要位点上均存在较大的变异度,Nei氏遗传变异系数(H)达0.775.6个位点一共检测到59个不同的醇溶蛋白等位基因,其中出现频率较高的有8个等位基因,即Gli-B2g(55.56 %)、Gli-D1k(50 %)、Gli-A1a(33.33 %)、Gli-A2f(30.56 %)、Gli-B1b(22.22 %)、Gli-D1f(22.22 %)、Gli-B2b(22.22 %)和Gli-D2g(22.22 %).国外品种中很少的4个等位基因(Gli-D1f、Gli-A2f、Gli-B2g和Gli-D2g)在我国具有较高的频率.可作为1BL/1RS易位标记的Gli-B1l等位基因在中国品种中的频率较高.另外,还发现一些优质醇溶蛋白等位基因(如Gli-B1b、Gli-B2c、Gli-A2b等)在我国品种中出现的频率很低,这可能是中国小麦品种品质普遍较差的一个原因.     

GnRH－A诱导泰和鸡母鸡排卵的生殖内分泌机制

本试验研究了促性腺激素释放激素类似物───［Ｄ－Ｌｅｕ￣６，Ｐｒｏ￣９］－ＧｎＲＨＮ－乙酰胺（ＧｎＲＨ－Ａ）诱导泰和鸡母鸡排卵的生理效应，藉此探讨其生殖内分泌机制。结果表明：（１）ＧｎＲＨ－Ａ具有显著刺激母鸡生殖器官发育的效应，导致母鸡卵巢、输卵管以及肝重增加（Ｐ＜０．０１），但对鸡体重没有显著的影响（Ｐ＜０．０５）；产蛋停止前１周施用ＧｎＲＨ－Ａ可维持母鸡正常产蛋的生殖生理状态。（２）ＧｎＲＨ－Ａ给药后最初２０ｄ诱发出两个鸡血浆促黄体生成素（ＬＨ）释放峰，处理组（ＧｎＲＨ－Ａ组）血浆ＬＨ浓度在此期间显著高于对照组（Ｐ＜０．０１）；然而与对照组相比较，处理组鸡血浆促卵泡素（ＦＳＨ）却没有明显变化（Ｐ＜０．０５）。（３）鸡血浆孕酮（Ｐ４）浓庆在施用ＧｎＲＨ－Ａ后明显上升，显著高于尚处休产期的对照组（Ｐ＜０．０１）。与此相反，给药后的囊初８ｄ内，鸡血浆雌二醇（Ｅ２）浓度明显降低，虽然随后略有回升，但仍低于对照组（Ｐ＜０．０１）。据此可以认为，ＧｎＲＨ－Ａ诱导卵巢和输卵管发育与鸡血浆ＬＨ、Ｐ４以及Ｅ２浓度变化密切相关，ＧｎＲＨ－Ａ是一种有效的制剂，可应用于诱导卵巢和输卵管发育及换羽前产蛋力的改善     

苄嘧黄隆及甲黄隆的气相色谱分析方法研究

本文研究了苄嘧黄隆和甲黄隆的气相色谱分析方法。采用（１）５％ＯＶ－１０１／Ｃｈｒｏ－ｍｏｓｏｒｂＧＡＷＤＭＣＳ（０．２５～０．１８ｍｍ）；（２）５％新戊二醇己二酸聚酯／ＣｈｒｏｍｏｓｏｒｂＧＡＷＤＭ－ＣＳ（０．２５～０．１８ｍｍ）的两条色谱柱，邻苯二甲酸二戊酯为内标，氢火焰离子化检测器，标准偏差（ＳＤ）≤０．０６４％，变异系数（ＣＶ）≤２．１％，平均回收率为９６．７％～９８．８％。     

苜蓿细胞悬浮培养与耐受高浓度PEG变异体的筛选

本文对紫花苜蓿的细胞悬浮培养、悬浮细胞系的建立、离体辐射效应和高浓度ＰＥＧ耐受性变异体的筛透进行了研究。结果表明：１．高浓度的２，４．Ｄ（５～１０ｍｇ／Ｌ），低浓度的ＡＢＡ（０．１～２ｍｇ／Ｌ），高浓度的蔗糖（６％～９％），较高的离子强度，以及逐步缩短继代时间，均有利于胚性悬浮细胞系的快速建立。相反，细胞分裂素，高浓度的ＮＨ和ＧＡａ的存在，不利于悬浮系的建立。细胞分裂素（４ＰＵ３０，ＫＴ或ＢＡ）可促进细胞的团聚，不利于细胞的分散。此外，低浓度的２，４－Ｄ，４ＰＵ３０（或ＢＡ，ＫＴ）和ＡＢＡ的配合使用，在悬浮培养基中可形成大量的体细胞胚。２．辐射处理悬浮细胞的最适剂量为２０～６０Ｇｙ。３．未经改造的初期悬浮培养物远较悬浮细胞系对高水势敏感。４．胚性悬浮细胞系经２０Ｇｙ的γ射线处理，筛选出了对１５％ＰＥＧ水势（约－１１巴）耐受性的克隆６个，并获得了一批再生植株，从２０％ＰＥＧ（约－１５巴）筛选出１个抗性克隆。抗性细胞系对高浓度ＰＥＧ和ＮａＣｌ产生的水势在细胞水平表现出很强的抗性。     

马哈利樱桃PGIP基因克隆及全序列测定

以马哈利樱桃（Ｐｒｕｎｕｓ ｍａｈａｌｅｂＬ．）基因组ＤＮＡ为模板,用ＰＧＩＰ（多聚半乳糖醛酸酶抵制蛋白）基因保守序列为引物进行ＰＣＲ扩增,得到长度约为１．２ｋｂ的目的片段,将其克隆到ｐＵＣｍ－Ｔ载体上,进行序列测定,结果表明,目的片段全长１１９２ｂｐ,由２个外显子和１个内含子构成,外显子总长９９６ｂｐ,编码３３０个氨基酸,与杏的ＰＧＩＰ基因ｍＲＮＡ序列、编码的氨基酸序殓同源性分别达到９４．１％、     

辐照小麦花粉的诱变效应

应用５Ｇｙ、１０Ｇｙ、２０Ｇｙ和３０Ｇｙ６０ＣｏΥ射线辐照４个小麦品种（品系）的成熟花粉,研究其杂交当代籽粒的发育,Ｍ１的生理损伤及Ｍ２的诱变效应。结果表明,１０Ｇｙ辐照小麦成熟花粉的诱变效果好;在Ｍ１中,１０Ｇｙ处理的出苗率为１７．１％￣７０．２％,成株率一船达４０％左右;在Ｍ２中,突变性状有株高、穗长、熟期、颖壳颜色、芒性和育性等。用１０Ｇｙ辐照５４３６８小麦的花粉后自交,早熟突变高达５８．７     

人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)转基因小鼠的建立

利用小鼠乳清酸蛋白（ＷＡＰ）基因的调控序列指导人Ｇ－ＣＳＦ基因所构建的融合基因,注射小鼠受精卵,ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析表明,获得了人Ｇ－ＣＳＦ转基因小鼠,整合率为２．３７％,这一模型的建立为转基因大动物生产提供了资料和方法。     

四川小麦品种贮藏蛋白位点及SSR分析*

利用种子贮藏蛋白和SSR标记研究了四川近20多年育成的小麦(Triticum aestivum)品种第1和第6同源群染色体的蛋白基因位点及遗传多样性。结果表明：供试的47个小麦品种共检测出47条醇溶蛋白条带，其中39条具有多态性，占82．98％；高分子量(HMW)谷蛋白亚基共出现7种亚基和11种亚基组合，表明四川主栽小麦品种在醇溶蛋白位点上存在广泛的变异，而HMW谷蛋白亚基遗传基础较狭窄。SSR结果表明，在21个位点中有8个(38．1％)位点具多态性，共检测到19个等位变异，供试品种在：DNA水平上存在一定的变异。聚类分析表明：两种标记均可将供试品种(包括中国春)分为三大类。通过Mantel检测，两种标记的分析结果间有显著的相关性，反映了在蛋白质和DNA水平上的结果可以互相补充，增加可靠性。     

小麦根质膜微囊的制备及水分胁迫对~(45)Ca~(2+)转运活性的影响

利用蔗糖密度梯度离心法制备小麦根质膜微囊,研究结果表明,郑引１号小麦根质膜Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ潜在活性为２４％,内翻外型质膜囊泡占７６％,－１．０ＭＰａ ＰＥＧ胁迫处理２４ｈ,两种定向的小麦根质膜Ｃａ６２＋－ＡＴＰａｓｅ活性均增加,正常水分条件下和ＰＥＧ胁迫处理后,ＥＧＴＡ对该酶活性抑制率分别为６２％和５３％,内翻外型质膜微囊对放射性核素＾４５Ｃａ＾２＋的转运量分别为２２．０９ｎｍｏｌ／ｍｇ ｐｒ     

生长因子对卵母细胞体外成熟及早期胚胎体外发育的影响

为了探讨生长因子（ＥＧＦ，ＰＤＧＦ）对牛卵母细胞体外成熟与早期胚胎体外发育的影响，本研究进行了两个实验。实验１：在卵母细胞体外成熟（ＩＶＭ）中，将卵母细胞平均随机的放入表皮生长因子浓度为０，２．５，２５，５０μｇ／Ｌ的成熟培养液和对照组中。实验２：在早期胚胎体外培养（ＩＶＣ）过程中，将受精卵平均随机分配入５个不同培养液的处理组：（１）ＴＣＭ－１９９＋１０％阉公牛血清（ＳＳ）；（２）ＴＣＭ－１９９＋ＥＧＦ＋ＰＤＧＦ；（３）ＴＣＭ－１９９＋ＥＧＦ；（４）ＴＣＭ－１９９＋ＰＤＧＦ；（５）ＴＣＭ－１９９＋无生长因子、其中ＥＧＦ：５０μｇ／Ｌ，ＰＤＧＦ：０．１μｇ／Ｌ。２，３，４，５组有０．１％ＰＶＡ和０．３％ＢＳＡ，并与颗粒细胞单层协同培养。卵母细胞的体外成熟（ＩＶＭ）、体外受精（ＩＶＦ）和早期胚胎体外培养（ＩＶＣ）的方法与Ｌｕ等（１９８７）报道的相同。结果表明：浓度为５０μｇ／Ｌ的处理组分裂率与对照组无差异（８９．０％，９２．４％，Ｐ＞０．０５），而浓度为０，２．５，２５μｇ／Ｌ的处理组分裂率均显著低于对照组（７８．６％，８２．３％，８４．３％，Ｐ＜０．０５），在囊胚率和第７ｄ一级胚胎率上各组均无差异。ＥＧＦ在体     

小麦杂种优势群研究：I.利用RAPD标记研究小麦品种间遗传差异

选用我国的３８个冬小麦品种（系）和２个加拿大春小麦品种（系），利用ＲＡＰＤ标记进行小麦基因型之间分子标记遗传差异研究，探讨分子标记在建立小麦杂种优势种中的应用。利用５９个随机引物对４０个小麦基因型ＰＣＲ扩增结果表明，其中２９个引物（占４９％）扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分离表现多态性，这２９个引物共扩增出１６８条带，其中７８条带（占４６．６％）具有多态性，每个引物可扩增１￣６条多态性带，平均２．７条带     

草莓主栽品种Tudla遗传转化体系的建立

本研究建立起农杆菌介导的草莓主栽品种Ｔｕｄｌａ的转化体系,获得了转化植株,试管苗叶片与携双元载体ｐＭＯＧ４１０的农杆菌菌株ＥＨＡ１０５共培养３天,共培养后叶片在附加止那霉素４０ｍｇ．Ｌ＾－１的再生培养基（ＭＳ＋ＴＤＺ２．０ｍｇ．Ｌ＾－１＋ＩＢＡ０．１ｍｇ．Ｌ＾－１）上选择培养４周后,外植株再生出明显可见的转化芽,转化芽再生频率达４．５％,转化芽在附加卡那霉素２５ｍｇ．Ｌ＾－１草莓继代培养基上分化成     

播期对小麦籽粒储藏蛋白及加工品质的影响

为明确播期对四川中、弱筋小麦储藏蛋白组分和加工品质的影响,以指导该地区专用型中、弱筋小麦生产,本试验以4个中、弱筋小麦品种为材料,设置早播（B1）、中播（B2）和晚播（B3）3个处理开展两年两点试验。结果表明,随着播期的推迟,中、弱筋小麦品种的谷蛋白、醇溶蛋白组分含量在崇州点增加,而仁寿点总体呈先降后升的变化趋势;储藏蛋白组分比例在不同品种间变化差异较大。两种筋型小麦的粗蛋白、湿面筋含量和沉降值在早播和晚播时高于中播,形成时间、稳定时间、粉质质量指数在晚播时高于早、中播,弱化度在崇州点随播期推迟显著降低,在仁寿点则先降后升。相关性分析表明,谷蛋白大聚合体（GMP）、高分子量谷蛋白亚基（HMW-GS）和总谷蛋白（Glu）含量与加工品质性状相关性较强。主成分分析表明,HMW-GS、ω-醇溶蛋白（ω）、总醇溶蛋白（Gli）含量和高/低分子量谷蛋白亚基比（H/L）、（α/β-醇溶蛋白）/Gli[(α/β)/Gli]可概括蛋白组分的主要变化信息;沉降值、稳定时间、粉质质量指数、形成时间、湿面筋含量可概括加工品质性状的主要变化信息。综合来看,四川麦区中筋小麦适当推迟播期、弱筋小麦适当提前播期可使小...     

Frankia共生固氮基因的分离与克隆

利用ＤＮＡ－ＤＮＡ杂交方法，分离细枝木麻黄的Ｆｒａｎｋｉａ菌株Ｃｏ０１的ｎｉｆ克隆ｐＣｃ１ＧＸ，赤杨内生菌株Ａｔ４的ｎｉｆ克隆ｐＡｔ１ＧＸ及沙棘的ＦｒａｎｋｉａＨｒ１８的ｎｉｆ克隆ｐＨｒ１８ＧＸ、ｐＨｒ１１－③ＧＸ。用基因功能互补法，从Ｆｒａｎｋｉａ菌株Ａｔ４的基因文库中分离到二个可能可互补豌豆根瘤菌ｎｏｄ基因功能的克隆ｐＡｔ２ＧＸ、ｐＡｔ３ＧＸ，并制作了ｐＡｔ２ＧＸ、ｐＡｔ３ＧＸ的亚克隆，予进一步实验，获得充分的证据证明ｐＡｔ２ＧＸ、ｐＡｔ３ＧＸ是否带有Ｆｒａｎｋｉａ菌株Ａｔ４的ｎｏｄ基因．     

花药辐射技术在小麦单倍体育种中的应用

对５个小麦品种（系）进行１２次花药辐照离体培养试验。结果表明，小麦花药培养前用０．５￣１Ｇｙ＾６０Ｃｏ γ射线预处理，有利于提高出愈率和绿苗分化率。用于诱变的辐照剂量以２Ｇｙ较为合适。     

指导的基因在动物乳腺特异性表达载体的构建

为了实现外源蛋白质在动物乳腺中特异性表达,采用ＰＣＲ法扩增了ＢＬＧ ３’端含第６,７外显子及ｐｏｌｙ（Ａ）加尾信号下游约２００ｂｐ的０．８７ｋｂ片断。以山羊ＢＬＧ ５’的３．２ｋｂ（含第１,２外显子）启动子,山羊ＢＬＧ ３’０．８７ｋｂ序列,鸡α－珠蛋白基因簇π基因上游的－２．４￣－５．３ｋｂ ＨｉｎｄⅢ序列,绿色荧光蛋白ＧＦＰ及原核载体ｐＧＥＭ－７ｚｆ构建了ｐＧＥＭ－７ｚｆ－ＧＦＰ－ＭＡＲ－５’     

^14C—高效唑的制备

高效唑的化学名称为（Ｅ）－１－（４－氯苯基）－４，４－二甲基－２－（１，２，４－三唑－１－基）戊烯醇－３。其＾１４Ｃ标记化合物制备方法：先由Ｂａ＾１４ＣＯ３制成＾１４Ｃ－甲酸钠，后者在真空多支管中转移制成＾１４Ｃ－甲酸，再与重碳酸氨基遥反应得＾１４Ｃ－氨基三唑，经脱氨得＾１４Ｃ－１，２，４三唑，进而＾１４Ｃ－唑酮，进而＾１４Ｃ－Ｅ－Ｅ烯酮，后者转位制成＾１４Ｃ－Ｅ烯酮，再经还原而得＾１４Ｃ－高效唑     

丝羽乌骨鸡MHC-B-LIIB(β1外元)序列多态性分析

本实验采用ＰＣＲ－ＲＦＬＰｓ的方法来研究丝羽乌骨鸡ＭＨＣ－Ｂ－ＬＩＩＢ（β１外元）序列的分子遗传多态性。实验证明：四种限制酶在Ｂ－ＬＩＩＢ（β１外元）的３０５ｂｐ片段上都存有多态位点。综合四种酶切情况，共检测到９种基因型。Ｘ＾２适合性检验表明：ＨｈａＩ、ＥｃｏＲＶ、ＸｂａＩ位点已经达到Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡状态（Ｐ〉０．０５）。而ＨａｅⅢ位点未能达到Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡状态。     

绿色荧光蛋白标记可移动载体质粒的构建及其在嗜水气单胞菌的表达

以多寄主可移动载体质粒ｐＳＵＰ１０１１为基础载体,构建了绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）标记的重组质粒,通过细菌接合,将重组质粒转移到嗜水气单胞菌Ｊ－１中。经紫外光检测和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析,证实重组粒在该 可表达ＧＦＰ。在无选择压力的培养条件下,２４小时后,重组质粒的稳定率在７２．２％,３６小时后,稳定率在５０％。显示ＧＦＰ作为报告基因在嗜水气单胞菌致病机理研究的应用前景。