鹅源新城疫病毒感染鹅的组织学变化研究

自1997年以来,在江苏省苏南、苏北许多地方的鹅群中流行一种以消化道呈糠麸样并有溃疡、胰腺肿胀且表面有灰白色点状坏死灶为特征的具有高度发病率和死亡率的鹅病。目前此病在山东、福建、安徽、浙江、上海、四川、吉林、江苏等全国大部分地区大面积流行,     

蛋鸡感染新城疫病毒后输卵管组织中病毒分布与炎症相关细胞因子mRNA的表达

通过间接免疫荧光(IFC)和实时荧光定量PCR(real-time PCR)方法研究了蛋鸡感染新城疫病毒(NDV)后输卵管组织中病毒分布及炎症相关细胞因子mRNA的表达变化。结果表明,NDV可在输卵管组织中复制,证明感染成功,NDV感染引起蛋鸡输卵管膨大部和子宫部IL-2、IL-6、IL-1β、IFN-β、CXCLi1、CXCLi2及CCR5mRNA mRNA表达上调;在感染120h后,膨大部IL-2、IFN-β和IL-1βmRNA表达达到峰值,分别为健康对照组的137倍、95.1倍和15.9倍;子宫部在感染第9天达到峰值,分别为36.2倍、59.9倍和10.3倍。在感染前3d,IFN-αmRNA在膨大部的表达为下调的趋势,而从感染第5天开始上调;而子宫部IFN-α的mRNA表达均上调。NDV感染后趋化因子CXCLi1、CXCLi2及CCR5mRNA的在膨大部和子宫部表达均上调,其中膨大部CXCLi1、CXCLi2和CCR5mRNA上调的最高值分别为20.5倍、78.3倍和22.1倍;其在子宫部分别上调5.5倍、64.3倍、25.5倍。总的来说,NDV能感染蛋鸡输卵管组织并引起IL-2、IL-6、IL-1β、IFN-β、CXCLi1、CXCLi2及CCR5mRNA表达上调,这些细胞因子mRNA表达的上调可能与输卵管炎症的发生有关。     

ND野毒感染病鸡MDA含量和SOD活性研究

对22日龄健康AA肉鸡和新城疫野毒（NDN）感染肉鸡组织中丙二醛（MDA）含量和超氧化物化酶（SOD）活性研究结果显示：ND野毒感染病鸡心、肝、肾等组织MDA含量和SOD活性发生明显改变。结果提示,自由基参与了ND发生发展怕致病过程,在NDV诱导的细胞凋亡过程中自由基可能起关键作用。     

牛结节性皮肤病病毒感染MDBK细胞后转录组差异表达分析

旨在探索牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus,LSDV)与宿主细胞的相互作用,采集了具有典型临床症状的牛皮肤病变组织,接种MDBK细胞进行病毒分离,采用透射电镜观察病变组织及病毒感染后的MDBK细胞,同时对感染后24 h的MDBK细胞进行转录组学分析,筛选差异表达基因并将其按功能分类,分...     

企鹅新城疫强毒人工感染北京雏鸭的研究

以分离鉴定的企鹅新城疫强毒（ＰＮＤＶ）经静脉注射、肌肉注射和洋鼻点眼等途径分别人工感染７日龄和１４日龄的北京雏鸭,结果只有静脉注射组雏鸭发病死亡,其致死率分别为１００％和５０％,且自死亡雏鸭脑组织中均可重新分离到ＰＮＤＶ。而肌肉注射组雏鸭和滴鼻点眼组雏鸭于接毒后１４天内均未表现任何异常,但可诱导产生较高效价的特异性抗体,然而抗体效价在短时间内迅速下降,且春脑和脾脏中均未分离到ＰＮＣＶ。试验结果表明北京鸭对ＰＮＤＶ的易感性不强,即使经静脉注射静致死率也随着日龄的增大而降低;而经肌肉注射或滴鼻点眼途径均未能使北京雏鸭发病,且其脑和脾脏的带毒时间不超过１４天。     

新城疫病毒HI抗体效价与流行株感染排毒之间的相关性

为了分析免疫鸡群中新城疫强毒感染流行的原因,明确抗体效价与流行株感染排毒率之间的关系,本研究以LaSota为抗原制备新城疫灭活疫苗,并以0.02mL和0.4mL的量分别免疫3周龄的SPF鸡10只。免疫后7、14、21d分别测定免疫鸡血清中的抗体HI效价。免疫后21d以基因Ⅶd亚型新城疫流行株JS5/05进行攻毒,攻毒后每天观察试验鸡的临床症状,并于攻毒后3、5、7d采集试验鸡的喉气管与泄殖腔棉拭样品进行病毒分离,结果显示,免疫3周后0.02mL和0.4mL疫苗免疫组鸡的血清HI抗体平均效价分别为5.4log2和8.2log2;0.02mL免疫组在攻毒后的排毒率达到100%,且排毒时间较长,而0.4mL免疫组在攻毒后的排毒率明显降低,且排毒时间较短。上述结果表明新城疫抗体效价与流行株感染排毒率之间存在明显的负相关。     

鸡新城疫、大肠杆菌与葡萄球菌混合感染的诊治

黑龙江勃利地区某养鸡场 ,1998年 6月 15 0 0只罗曼褐色雏鸡发生了以呼吸困难、排绿色或黄白色稀便 ,关节肿大、跛行等为主要症状的传染病。 10天内死亡 2 34只 ,死亡率达 15 .6 %。根据流行病学 ,临床症状、剖检变化及试验室检验 ,确诊为鸡新城疫、大肠杆菌与葡萄球菌混合感染 ,经综合防治该场鸡的病情得到控制 ,现报告如下。1　发病情况该场从某孵化场购入鸡雏 ,网上育雏 ,喂自配混合饲料 ,间断用卡那霉素饮水。 7日龄时用鸡新城疫Ｌ系、传支 12 0二联苗滴眼滴鼻 ,14日龄时用鸡传染性法氏囊弱毒苗饮水首免 ,2 1日龄时法氏囊饮水二兔 ,2 5…     

金银花复方制剂对新城疫病毒感染雏鸡免疫器官淋巴细胞增殖功能的影响

为探索金银花复方制剂对新城疫病毒(NDV)感染雏鸡免疫功能的影响,应用细胞培养技术及MTT法,对感染NDV雏鸡、金银花复方制剂治疗雏鸡的胸腺和脾脏T细胞,法氏囊和脾脏B细胞增殖功能进行检测。结果发现,在NDV感染初期,NDV感染组雏鸡免疫器官T、B细胞增殖功能与对照组雏鸡相比明显降低,后期有所恢复,表明NDV感染使雏鸡免疫器官淋巴细胞数量减少,抑制了雏鸡的免疫功能;金银花复方制剂治疗组雏鸡免疫器官T、B细胞增殖功能从病毒感染后第3天起不同程度地高于NDV感染组雏鸡,并且后期接近对照组雏鸡水平,表明金银花复方制剂能通过刺激雏鸡免疫器官淋巴细胞的增殖,增强机体的免疫功能。     

鸭源新城疫病毒F基因在昆虫细胞中的表达和鉴定

为在昆虫细胞中表达鸭源新城疫病毒(NDV) F蛋白,本试验首先根据鸭源NDV F基因序列设计引物,PCR扩增出F基因,将其克隆至杆状病毒表达载体pFastBac1,获得重组转座载体pFastBac-F,将其转化到大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组杆状病毒穿梭质粒rBacmid-F,在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBac-F。Western blotting、间接免疫荧光试验结果均显示表达的重组蛋白能与鸭抗NDV阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。结果表明鸭源NDV F蛋白在昆虫细胞中获得了成功表达,为鸭新城疫的预防控制奠定了基础。     

鸡新城疫病毒LaSota株在BHK-21细胞上增殖条件的优化

本研究旨在对鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)LaSota株在BHK-21细胞上的增殖条件进行优化,为实现应用细胞系生产NDV提供参考。在确定BHK-21细胞TPCK-胰酶耐受浓度的基础上,在培养基中添加不同浓度的TPCK-胰酶、新生牛血清及调节不同pH,通过对细胞培养液细胞半数感染量(TCID₅₀)的测定,确定最适胰酶浓度、血清浓度及pH;通过固定接毒量而添加不同数量细胞或固定细胞数量而接种不同量的病毒,确定最适细胞量及接毒量;将BHK-21细胞接种NDV LaSota株后,通过测定不同时间细胞上清液TCID₅₀绘制增殖曲线,确定最佳收毒时间;应用转瓶对该病毒进行扩大培养,并进行TCID₅₀、鸡胚半数感染量(EID₅₀)与血清凝集价(HA)的测定。结果显示,NDV LaSota株在BHK-21细胞上增殖的最适TPCK-胰酶浓度为3μg/mL,最适接毒量为10^6.375 EID₅₀,细胞数量为1×10~6个,培养基pH为7.2,且可用无血清培养基进行培养,BHK-21细胞接种NDV LaSota株后最佳收毒时间为34～36 h。应用BHK-21细胞采用转瓶培养的方式对NDV LaSota株进行增殖,结果显示,细胞培养液TCID₅₀值为10^7.0/0.1 mL,EID₅₀为10^7.5/0.1 mL,HA效价为1∶256。因此,应用以上条件增殖培养NDV LaSota株,完全适用于该病毒的规模化生产,且符合现行的兽医生物制品与检验制造规程。     

Expression and Identification of F Gene of Duck Newcastle Disease Virus in Insect Cells

In order to express the F protein of duck Newcastle disease virus (NDV) in insect cells,one pair of specific primers was designed according to the published genome sequences of duck NDV to amplify F gene by PCR,the amplified fragment was cloned into baculovirus expression vector pFastBac1.Then the recombinant vector pFastBac-F was transformed into E.coli DH10Bac competent cells,and the positive recombinant bacmid rBacmid-F was screened according to the resistance and blue-white plague screening.rBacmid-F was transfected into Sf9 insect cells by liposome,once the cytopathic effect was found,the rBac-F could be aquired.The results of Western blotting and indirect immunofluorescence test showed that the recombinant proteins could be recognized by positive serum,indicating that the protein had good reactiongenicity.These results suggested that F protein of duck NDV had been successfully expressed in insect cells,which laid the foundation for the prevention and control of duck Newcastle disease.     

新城疫病毒分子生物学研究进展

新城疫(Newcastle Disease,ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的一种急性、高度接触性禽类传染病,被世界动物卫生组织(OIE)定为法定必报传染病,我国也将其列为一类动物疫病,本文从新城疫病毒的形态及分子结构、致病力的分子基础、分子流行病学特征和基因工程疫苗等分子生物学相关研究进展进行了综述。     

新城疫病毒在肿瘤治疗中的研究进展

新城疫病毒(NDV)是一种新兴的肿瘤生物治疗因子,反向遗传学操作技术的成熟使其在肿瘤治疗中的应用研究越来越深入。NDV能够通过其直接的溶瘤作用杀死肿瘤细胞,也可通过感染自体肿瘤细胞制成疫苗对患者进行主动特异性免疫治疗。但直接溶瘤效应会对患者产生一定的负面影响,自体肿瘤疫苗的免疫治疗也不能彻底杀死肿瘤细胞。目前,以NDV为复制型病毒载体的肿瘤基因治疗已成为该病毒肿瘤生物治疗的研究热点,这种基因治疗方法被认为是人类征服癌症的潜在手段。论文综述了NDV在肿瘤治疗中的研究与应用,对其溶瘤及抗肿瘤免疫学机制进行了分析,并对NDV作为载体的肿瘤基因治疗前景进行展望。     

雏鸡感染马立克氏病病毒后免疫器官组织抗体生成细胞的变化

以马立克氏病病毒（ＭＤＶ）感染１日龄肉用雏鸡，在感染后５、２５、４５ｄ采取法氏囊、脾脏、盲肠扁桃体和哈德尔腺，用彩色免疫金银染色法检查免疫器官组织中ＩｇＧ、ＩｇＭ和ＩｇＡ抗体生成细胞数量的动态变化。结果：ＭＤＶ感染雏鸡的法氏囊、脾脏和哈德尔腺中以ＩｇＧ抗体生成细胞居多，ＩｇＧ、ＩｇＭ和ＩｇＡ抗体生成细胞均较正常对照鸡显著减少；盲肠扁桃体中以ＩｇＡ抗体生成细胞居多，ＩｇＡ、ＩｇＧ和ＩｇＭ抗体生成细胞数量显著低于正常对照鸡。由此表明，ＭＤＶ感染鸡全身免疫器官和消化道、呼吸道局部粘膜体液免疫机能明显抑制。     

Velogenic Newcastle Disease Virus in Captive Wild Birds

Newcastle disease virus (NDV) was isolated from the faeces of seven different species of clinically healthy captive wild birds. All seven NDV isolates were characterized as velogenic, based on the mean death time in embryonated hens' eggs and the intracerebral pathogenicity index in day-old chicks. Three of the isolates were placed in group C₁ based on the reactions with monoclonal antibodies. The role of captive wild birds in the epidemiology of Newcastle disease is briefly discussed.     

鸡新城疫病毒抗原超滤技术研究

应用分子筛过滤技术超滤浓缩鸡新城疫病毒,并就ＮＤＶ抗原量对鸡免疫应答的和了动态研究,试验结果显示,将ＮＤＶ对外开放尿囊毒浓缩４倍体积,ＨＡ效价提高了２个滴度,病毒回收率达１００％;病毒活性亦未发生改变。免疫１１天后,ＮＤ浓缩苗和ＮＤ－ＩＢＤ二联苗组鸡的ＮＤ－ＨＩ抗体水平远远高于免疫对照组,差异极显著。结果表明,所建超滤技术适用于ＮＤＶ怕的浓缩应用;适量增另ＮＤＶ怕量能够加快鸡的体液免疫应答,增强鸡     

抗NDV F蛋白单克隆抗体在鹅源新城疫病毒感染快速检测中的应用

自1997年以来,鹅源新城疫病毒(GNDV)的感染已经成为养鹅业最重要的疾病之一.本研究以抗新城疫病毒融合蛋白单克隆抗体为介导,建立了快速检测鹅源新城疫病毒感染的间接免疫荧光技术(IFA).所建立的方法特异性强,与传染性法氏囊病病毒、马立克氏病病毒及小鹅瘟病毒等均不出现交叉反应;用100 TCID50 GNDV感染鸡胚成纤维细胞,结果显示在感染后18h就可以检测到GNDV.与技术要求高、操作繁琐的RT-PCR以及病毒分离鉴定相比,IFA检测鹅源新城疫病毒感染具有快速、简单、特异等优点,具有很好的应用前景.     

一起鸡新城疫的诊断及强弱毒株鉴别的研究

某鸡场鸡群中出现以神经症状、产蛋下降、畸形蛋增多和呼吸困难、腹泻等为主要特征的疾病,对发病鸡场进行实地走访并采集发病鸡病料。根据临床症状,病理剖检及实验室细菌学、血清学、病毒学检测,鉴定该鸡场发生新城疫疫情,并继发鸡群大肠杆菌感染;通过实时荧光RT-PCR检测,对该病毒进行强弱毒株的鉴别,显示该鸡场发生的新城疫是由新城疫中强毒株引起的。     

中药大黄体外抗新城疫病毒活性试验

为了筛选出有效的防治新城疫的中草药,采用鸡胚接种试验,对大黄煎煮液的体外抗新城疫病毒活性进行了测定,结果表明,中药大黄在体外对新城疫病毒具有较好的抑制作用。