野牛草ISSR分子标记体系的优化及遗传多样性分析CSCD

本研究以L_(9)(3^(4))正交实验为基础,对野牛草(Buchloe dactyloides)的ISSR分子标记体系中各因素的最佳用量进行优化,主要包括Taq PCR Mix、引物、模板DNA及引物的退火温度。确定的最佳10μL体系为:5.0μL Mix、40 ng DNA模板、0.6μL引物(1.0μmol/L)及ddH_(2)O补齐。最佳扩增条件为94℃预变性3 min;94℃变性30 s,48℃退火30 s,72℃延伸10 min,共34个循环;72℃延伸10 min;4℃保存。对收集到的39份野牛草资源的遗传多样性进行分析,UPGMA聚类将所有材料分为两大类,其中21号材料和天津滨海国际机场候选雌性野牛草材料的亲缘关系最近,可以作为后续材料扩繁和生产的种质资源。本研究中ISSR体系的探索与优化、遗传多样性分析为野牛草遗传多样性分析工作提供了依据。     

野牛草种子休眠原因分析

以＂中坪一号＂野牛草〔Buchloe dactyloide（Nutt.）Engelm〕为试验材料,通过硝酸钾、赤霉素引发试验、种子解剖、电镜扫描、能谱分析等手段,分析限制野牛草试验材料发芽率低下的原因。种子引发试验参照碱蓬（Suaeda glauce Bge.）种子解除休眠的赤霉素（GA3）和硝酸钾（KNO3）浓度,分设0.5%硝酸钾和20,40,60,100 mg/kg赤霉素等处理。结果表明：野牛草种子休眠类型属机械休眠与生理休眠同时存在,且生理休眠占主导地位的综合休眠;野牛草种球外部的颖苞对种子的强烈束缚引起了机械休眠,而生理后熟是野牛草种子生理休眠的直接原因;赤霉素对休眠程度较深的去颖苞种子引发效果最好,且以60mg/kg浓度为最佳。     

野牛草种子休眠原因分析

以中坪一号野牛草[Buchloe dactyloide(Nutt.) Engelm]为试验材料,通过硝酸钾、赤霉素引发试验、种子解剖、电镜扫描、能谱分析等手段,分析限制野牛草试验材料发芽率低下的原因.种子引发试验参照碱蓬(Suaeda glauce Bge.)种子解除休眠的赤霉素(GA3)和硝酸钾(KNO3)浓度,分设0.5%硝酸钾和20,40,60,100 mg/kg赤霉素等处理.结果表明:野牛草种子休眠类型属机械休眠与生理休眠同时存在,且生理休眠占主导地位的综合休眠;野牛草种球外部的颖苞对种子的强烈束缚引起了机械休眠,而生理后熟是野牛草种子生理休眠的直接原因;赤霉素对休眠程度较深的去颖苞种子引发效果最好,且以60 mg/kg浓度为最佳.     

野牛草种子休眠原因分析

以＂中坪一号＂野牛草（Buchloe dactyloide（Nutt.）Engelm）为实验材料,通过硝酸钾、赤霉素引发实验、种子解剖、电镜扫描、能谱分析等手段,分析限制野牛草试验材料发芽率低下的原因。种子引发试验参照碱蓬（SuaedaglaucaBge.）种子解除休眠的赤霉素（GA3）和硝酸钾（KNO3）浓度,分设0.5%硝酸钾和20 mg/kg4、0 mg/kg、60mg/kg、100 mg/kg赤霉素等处理。结果表明：野牛草种子休眠类型属机械休眠与生理休眠同时存在,且生理休眠占主导地位的综合休眠;野牛草种球外部的颖苞对种子的强烈束缚引起了机械休眠,而生理后熟是野牛草种子生理休眠的直接原因;赤霉素对休眠程度较深的去颖苞种子引发效果最好,且以60 mg/Kg浓度为最佳。     

奶牛乳腺蛋白组分析中蛋白质分步提取方法的建立

全息蛋白质样品提取是蛋白组研究的先决条件,采用3种溶解性质不同的裂解液分步提取奶牛乳腺蛋白组,分别进行双向聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,PDQUest 7.4分析凝胶图谱,发现其与常规方法相比,具有蛋白质提取率高、双向电泳(2-DE)分辨率高等优点。     

桑树树液蛋白质的双向电泳分析

应用 Ｉ Ｅ Ｆ 和 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 双向电泳技术,分析了桑树（ Ｍｏｒｕｓ） 树液蛋白质的电泳图谱。结果表明,供试栽培品种的蛋白质谱比较相似,相似系数在０７２ ～１００ 之间;品种间存在１４ 个共有组分,占检测组分总数的５１９ ％ ;桑树栽培种与野生种的差异比较显著。     

基于双向电泳结合质谱分析燕麦种子萌发过程蛋白的变化

为分析燕麦(Avena sativa L.)种子蛋白质在萌发过程中的变化,探求燕麦种子吸胀萌发的机理。采用双向电泳结合基质辅助激光解析飞行时间质谱的方法对燕麦品种白燕2号种子吸涨萌发0 h和25 h的蛋白质进行了分离和鉴定。结果表明:燕麦种子蛋白在吸水萌发25 h后18个蛋白点的表达发生了显著变化;这些蛋白质点经质谱分析并搜索NCBI数据库,有10个蛋白点得到明确鉴定,其中7个蛋白质点表达量在燕麦种子萌发后下降,3个表达量增加。差异表达的蛋白质包括12s球蛋白、种子贮藏球蛋白和醇溶燕麦蛋白-3等蛋白。这些蛋白表达量的变化与燕麦种子萌发进程有关,为进一步从蛋白质水平来探索燕麦种子萌发机理提供了理论依据。     

内蒙古绒山羊皮肤蛋白质双向电泳条件优化及图谱建立

试验旨在建立内蒙古绒山羊皮肤蛋白质双向电泳图谱。采用液氮研磨法提取蛋白质,通过双向电泳技术对蛋白质进行分离,分别对不同的蛋白质沉淀方法、上样量和SDS-PAGE凝胶浓度进行比较。结果显示,使用2-D Clean-up试剂盒处理、上样量为20 μg、采用10%的SDS-PAGE凝胶浓度时可获得重复性好和分辨率高的双向电泳图谱,便于后续的内蒙古绒山羊皮肤差异蛋白质组学分析。     

黄花苜蓿双向电泳体系的建立

通过对传统的双向电泳技术进行改进和优化,建立适合分析黄花苜蓿蛋白组学研究的双向电泳体系.结果表明,使用改进方法后所获得的双向电泳图谱稳定性和重复性较好,分辨率较高,经银染后可分辨出400多个蛋白点,其等电点主要分布于pI 5～7,分子量主要分布于10～150kDa;经考马斯亮蓝染色后可分辨出800多个蛋白点,其等电点主要分布于pI 5～7,分子量主要分布于10～150kDa.     

60Coγ射线辐照野牛草干种子的细胞学效应

通过5种不同剂量的⁶⁰Coγ射线对野牛草(Buchloe dactyloides(Nutt) Engelm.)种子的辐射诱变效应研究表明,γ射线辐照能抑制野牛草根尖细胞的有丝分裂.随γ射线辐射剂量的增加,根尖细胞有丝分裂指数呈下降趋势.γ射线辐照能诱发根尖细胞的染色体畸变和核畸变,产生桥、染色体断片、粘连染色体、游离染色体、落后染色体、单微核、双微核、多微核、小核等多种畸变类型.在0～2000 Gy 范围内,随剂量的增加各种畸变率不断提高,至2000Gy 辐照剂量时,各畸变率达到最大.     

赤霉素和生长素浸种对野牛草种子萌发及幼苗生长生理的影响

为研究外源激素对野牛草(Buchloe dactyloides)种子破除休眠和幼苗生长生理的作用,本研究分别设置3个浓度的赤霉素(GA3)和生长素(IAA)对野牛草进行浸种处理,浸种后进行发芽试验,对浸种后种子的萌发及幼苗生长情况、非结构性碳水化合物和内源激素进行测定。结果表明,1)赤霉素浸种可以有效增强野牛草种子发芽力,提高发芽势、发芽率、发芽指数和种子活力指数,其中,2 000mg·L-1的赤霉素处理效果最显著(P0.05);适当浓度的生长素浸种可以有效增强野牛草种子的生活力。2)赤霉素处理有助于野牛草幼苗地上部的生长;生长素处理对野牛草幼苗地下部和根冠比有显著(P0.05)的增强作用,其中较低浓度(250mg·L-1)处理效果最明显。3)1 500mg·L-1赤霉素与450mg·L-1生长素浸种均可显著(P0.05)提高野牛草幼苗可溶性糖与淀粉的积累。4)较高浓度的外源赤霉素和生长素浸种处理会使野牛草幼苗内源生长素、赤霉素、脱落酸(ABA)含量上升,其中,2 000 mg·L-1的赤霉素和450mg·L-1的生长素浸种效果最佳。综上所述,打破野牛草种子休眠、促进地上部生长及其幼苗内源赤霉素含量的最佳试剂和浓度为2 000 mg·L-1的赤霉素,增加可溶性糖和淀粉在野牛草幼苗期积累的最佳试剂和浓度是1 500mg·L-1的赤霉素;促进野牛草幼苗地下部生长的最佳试剂和浓度是250mg·L-1的生长素,增加野牛草幼苗内源生长素和脱落酸含量的最佳试剂和浓度是450mg·L-1的生长素。     

12份野牛草材料蒸散量及抗旱性的研究

在不同水分条件下研究了12份野牛草材料的蒸散量与抗旱性,结果表明:水分充足条件下各材料间除T09蒸散量较高外,其他材料差异不显著(P0.05);水分胁迫的前18d,材料间有显著或极显著差异(P0.05或P0.01),并且随着胁迫时间延长各材料蒸散量、土壤含水量、叶片相对含水量均呈下降趋势,游离脯氨酸、丙二醛和相对电导率则为增加趋势;蒸散量与各抗旱指标间均显著或极显著相关;通过聚类分析,将12份野牛草划分为3个抗旱级别,即较强抗旱材料T01,中度抗旱材料T02、T03、T04、T05、T06、T07、T10和T11,较弱抗旱材料T08、T09和T12。     

超薄层等电聚焦电泳技术检验燕麦种子的真实性

利用种子醇溶蛋白超薄层等电聚焦电泳(UTLIEF)技术对青海和河北省燕麦属(Avena spp)16个品种真实性进行了比较分析.结果表明,参试样品的种子醇溶蛋白UTLIEF电泳图谱共分离出34条不同迁移率的谱带;依据蛋白电泳图谱等电点(PI值)为4.8、6.55、6.9、7.7、8.4和8.6等位置谱带的有无以及数目,可鉴别16个参试样品中的13个样品;对同一样品的整粒种子、1/2粒和1/4粒种子,以及人工老化处理获得的同一样品不同发芽率的种子进行超薄层等电聚焦电泳,结果表明破损程度到1/2粒种子和不同生活力种子甚至死种子对电泳鉴定结果基本没有影响.     

中国苜蓿地方品种种子贮藏蛋白标记：遗传多样性的研究

利用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ方法对中国１８个地方苜蓿品种和北美９个苜蓿基本种质来源的代表品种,各选２０粒种子进行贮藏蛋白分析。结果表明,苜蓿品种内和品种间均具明显的多态性,但采用混合样分析则掩盖了品种内的多态性。     

克隆植物野牛草对异质营养的表型可塑性响应

本实验以匍匐茎型克隆植物野牛草为材料,通过测定其在同质营养和3个斑块尺度的异质营养条件下生长指标、形态指标和叶绿素荧光参数的变化,研究野牛草对异质营养的表型可塑性反应。野牛草在尺度为25 cm×25 cm异质营养条件下会产生更多的分株、丛和分枝,积累更多的生物量,具有较高的F_v/F_m和Φ_PSⅡ,生长状况要好于其他营养条件,但根系长度和间隔子长度并没有明显的变化。结果表明,生理整合调控了野牛草的表型可塑性,提高了母株的叶绿素荧光特性,增加了克隆分株对养分的吸收、利用能力,使野牛草在异质营养条件下的生长状况好于同质营养条件,特别是在尺度为25 cm×25 cm的异质营养条件下效果更为明显。     

家蚕蛋白质双向电泳的样品制备方法

进行蛋白质组研究的关键是要尽可能完整地获得一个基因组在一个生物体或一个组织器官的特定时期表达的蛋白质的种类和数量 ,双向电泳技术是分离组织和器官蛋白质的核心技术 ,而蛋白质样品的制备是双向电泳的基础。以家蚕胚胎、中肠、皮肤、丝腺等组织器官为材料 ,采用磷酸缓冲液或Tris HCl缓冲液抽提蛋白质样品 ,用 6种不同的蛋白质溶解缓冲液溶解蛋白质 ,经蛋白质双向电泳和蛋白质图像软件分析 ,结果表明用磷酸缓冲液抽提、蛋白质溶解缓冲液E溶解是制备家蚕蛋白质双向电泳样品的较好方法。蛋白质磷酸抽提缓冲液 (PBS)的组成为 :32 5mmol/LK2 HPO4,2 6mmol/LKH2 PO4,4 0 0mmol/LNaCl,pH 7 6。蛋白质样品溶解缓冲液E的组成为 :8mol/L尿素 ,2mol/L硫尿 ,4 %CHAPS ,2 0mmol/LTrisbase,30mmol/LDTE ,2 %Pharmalyte(pH 3～ 10 )。     

利用双向电泳技术分析山羊精子冷冻前后蛋白组的差异

建立稳定的山羊精子蛋白质双向电泳的技术平台,对精子上样量、蛋白质提取方法、二维电泳程序等相关技术都进行了优化,得到了相对清晰的冻精和鲜精的二维电泳图谱,并运用ImageMaster TM 2D Platinum软件进行了分析。结果表明：通过改进的热Trizol法提取山羊精子蛋白,当取精子3×10^7、上样量为150μL时能取得较好的电泳图谱,鲜精的蛋白位点重复性较高的有650个±10个,冻精的蛋白位点重复性较高的有600个±10个。冷冻导致精子蛋白丢失约50个,而且冻精多表现为大分子量蛋白的丢失,大部分分布于60～100kb之间,其中60～80kb之间蛋白丢失约18个,80～100kb之间蛋白丢失近20个,12～60kb之间蛋白丢失近12个。实验初步探明了山羊精子融冻前后精子的蛋白变化规律,为进一步了解精子冷冻损伤的确切机理奠定了基础。