胃-胰蛋白酶水解蜂王浆主蛋白制备血管紧张素转化酶抑制肽工艺的优化

采用胃-胰蛋白酶水解蜂王浆主蛋白(MRJPs),对底物浓度、pH值、酶作用时间和蛋白酶浓度对水解效果的影响进行单因素分析,然后通过正交试验对胃-胰蛋白酶共同作用的酶解工艺进行优化;最后采用超滤分离技术对王浆主蛋白水解产物(H-MRJPs)进行分离,以制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽。结果表明:优化的酶解工艺为37℃恒温、质量比为1%的胃蛋白酶(pH=2.0)和胰蛋白酶(pH=7.5)各水解2h;在最佳工艺条件下,MRJPs水解度为28.7%,总氮回收率为35.5%;通过SDS-PAGE电泳未检测到MRJPs水解产物(H-MRJPs)含有明显的蛋白条带;采用超滤法对H-MRJPs分离得到分子质量范围为<1、1～5和>5ku的3类血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽,其ACE半抑制质量浓度(IC50)分别为0.33、0.61和1.09mg.mL-1,即以分子质量<1ku的产物活性最强。该结果为利用王浆主蛋白开发降压功能食品提供了科学依据。     

胃蛋白酶水解草鱼鱼鳞制备胶原肽的工艺优化

以草鱼鱼鳞为材料,研究蛋白酶种类、酶解条件对鱼鳞酶水解的水解度、氮收率和凝胶强度的影响,并采用正交试验对鱼鳞胶原肽制备工艺进行优化,以获得较高凝胶强度的鱼鳞胶原肽.结果表明:在胃蛋白酶、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶4种蛋白酶中,采用胃蛋白酶水解鱼鳞胶原蛋白时氮收率较高,且水解产物具有凝胶形成能力;酶解条件对鱼鳞胶原蛋白的水解度、氮收率和凝胶强度均有显著影响;胃蛋白酶在底物质量分数为5%、起始pH值为4.0、加酶量为140 U/g、水解温度为65℃条件下,水解鱼鳞120 min,鱼鳞水解产物的凝胶强度和氮收率都较好,其中水解度为1.46%、氮收率为64.38%、凝胶强度为2 051 g.     

双酶水解黄粉虫蛋白制备生物活性肽的工艺优化

【目的】对胰蛋白酶与碱性蛋白酶Alcalase双酶组合水解黄粉虫蛋白制备生物活性肽的工艺进行优化,为获得高活性黄粉虫蛋白多肽及有效利用黄粉虫蛋白提供科学依据。【方法】以水解度和酸溶性肽得率为指标,研究了酶解时间、酶活比、料液比、加酶量、pH和酶解温度6种因素对酶解反应的影响。在此基础上设计了3因素(加酶量、pH和酶解温度)3水平的响应面试验。【结果】胰蛋白酶与碱性蛋白酶Alcalase双酶水解黄粉虫蛋白的最佳酶解条件为:酶解时间120 min,酶活比1∶1,料液比1∶3,加酶量23.41 mg/g,pH 8.77,酶解温度53.41℃。【结论】利用优化双酶水解条件制得的低分子多肽的水解度高达21.61%,酸溶性肽得率为92.09%。     

制备米糠蛋白降血压肽最佳用酶的筛选

试验以筛选制备米糠蛋白降压肽最佳用酶为目的。选用碱性蛋白酶、碱性蛋白酶Alcalase 2.4 L、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、蛋白酶K和双酶复合水解米糠蛋白,以血管紧张素转化酶（ACE）抑制率为主要指标,筛选出制备米糠蛋白降压肽的最佳用酶。结果表明,米糠降压肽ACE抑制率的大小与酶的种类及配比有关,筛选出碱性蛋白酶Alcalase为试验用酶,在酶解温度45℃,加酶量3 000 U.g-1,酶解pH8.5,米糠蛋白底物浓度3%酶解2 h时达到最大抑制率为71.1%。     

酶解工艺对海带酶解液抑制血管紧张素转化酶活性的影响

为明确海带对血管紧张素转化酶活性的抑制作用,通过单因素试验和响应面优化试验,探讨不同纤维素酶添加量和酶解时间对海带浆抑制血管紧张素转化酶活性的影响。结果表明:采用纤维素酶对海带浆进行酶解,建立了海带酶解液血管紧张素转化酶(ACE)活性抑制率Y与纤维素酶添加量X₁、酶解时间X₂的数学模型:Y=-114.273 04+0.005 72X₁+1.491 99X₂-3.33333×10^-7X₁X₂-2.552 00×10^-7X₁²-0.004 47X₂²,得到优化酶解条件为:海带经切分匀浆后,在pH 6.0、添加纤维素酶11 060 U·g^-1、在室温条件下酶解169 min,所得酶解液对ACE活性的抑制率可达到41.43%左右。试验可知海带酶解液对血管紧张素转化酶(ACE)活性具有较高的抑制作用。     

鲤鱼鱼鳞蛋白的酶解制备工艺及其抗氧化活性

[目的]确定鲤鱼鱼磷蛋白的酶解制备工艺,并分析所得的鱼磷抗氧化肽的抗氧化性能。[方法]以鲤鱼鱼鳞为原料,选用胰蛋白酶考察其加酶量、反应温度、酶解时间、pH、底物浓度等因素对鱼鳞蛋白水解程度的影响,用单因素及正交试验的方法优选出鱼鳞蛋白酶解的最佳条件并测定其抗氧化活性。[结果]试验得到鲤鱼鱼磷抗氧化肽酶法制备的最佳工艺条件为pH 8.4、酶解温度45℃、加酶量4000 U/g、酶解时间3 h、底物浓度15%,此条件下得到的鱼磷抗氧化肽水解度较佳(29.97%),抗氧化能力较好。[结论]胰蛋白酶有溶解鲤鱼鱼鳞蛋白的能力,并且酶解产物的抗氧化活性与水解度有关。     

醋蛋中ACE抑制肽的分离及其活性保护的研究

ACE抑制肽在体内稳定性的研究对于其功能活性的保护具有重要意义。采用凝胶色谱层析法对经酶解后的醋蛋液进行分离纯化,收集具有较高抑制活性的多肽组分。再将其与卵磷脂结合形成复合物,目的是利用卵磷脂的乳化性保护多肽活性。利用FT-IR、XRD对复合物的结合效果进行验证分析,结果发现卵磷脂与活性肽结合后,活性肽的ACE抑制活性在体外模拟前后相较于未经结合处理得到明显的升高。红外光谱研究发现复合物中活性肽与卵磷脂发生相互作用。通过XRD进一步验证并推断是活性多肽被卵磷脂吸收后以无定形或分子态的形式存在。因此,可认为经过卵磷脂复合的多肽可以很好保留ACE抑制活性且可以降低其被胃肠道酶降解的风险。     

超声辅助酶法制备草鱼鱼鳞胶原蛋白肽

通过单因素试验分别考察了不同蛋白酶、底物浓度、加酶量、缓冲液pH、水解温度、水解时间、超声功率和超声时间对鱼鳞水解物DPPH自由基清除率的影响,并经正交试验对水解工艺进行优化.结果表明:最优制备工艺参数为:碱性蛋白酶、底物浓度10％、加酶量9000U/g、缓冲液pH 11.0、水解温度50℃、水解时间3.0h、超声功率300W、超声时间25min,在该工艺参数下制备的鱼鳞胶原蛋白肽的DPPH自由基清除率为61.4％.     

双酶水解法制备大豆多肽的研究

[目的]研究酶解法制备微苦大豆多肽的新方法,为其在食品和药品领域的广泛应用提供参考。[方法]选择Alcalase蛋白酶和Flavourzyme酶对大豆分离蛋白进行分步水解。采用单因素分析法和正交试验设计,研究pH值、温度、酶浓度和底物浓度等因素对Alca-lase蛋白酶水解效果的影响,确定其最佳的水解条件。并且,对Flavourzyme酶的脱苦作用进行了研究。[结果]Alcalase蛋白酶水解大豆分离蛋白的最佳水解条件是pH值8.0,温度60℃,酶浓度1000U/g、底物浓度3%,水解时间2h,此时的大豆分离蛋白水解度可达46.13%。Flavourzyme酶可明显降低大豆多肽的苦味。[结论]采用Alcalase蛋白酶和Flavourzyme酶分步酶解法制备的大豆多肽无明显苦味,可被广泛应用于食品生产中。     

酶法水解非洲鲫鱼蛋白的优化工艺研究

以水解度和感官评价为指标,通过单因素和正交试验筛选酶法水解非洲鲫鱼的最佳工艺.结果表明:鲫鱼蛋白的较优水解酶为木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶,其中,木瓜蛋白酶对鲫鱼蛋白的较优水解条件是:60℃、pH6.0、料液比1∶5(w/v)、酶用量5%(w/w)、水解4.0 h;碱性蛋白酶的较优水解条件是:酶用量5%、料液比1∶3、65℃p、H 8.0、水解4.5 h;而双酶水解的优化工艺是碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶按1∶3(w/w)混合同时水解,酶用量为5%、料液比1∶5、55℃p、H 8.0、水解4.0 h,水解度最高达30.94%,制得的水解液清亮透明,气味较好,基本没有腥味和苦味.     

草鱼鱼鳞抗氧化肽的酶法制备及其抗氧化稳定性研究

【目的】采用碱性蛋白酶水解草鱼鱼鳞制备抗氧化肽,并探讨其稳定性。【方法】运用单因素及正交试验对酶解条件进行优化,并进行体外抗氧化活性的测定,对酶解得到的抗氧化肽进行体外模拟胃肠消化实验。【结果】在优化工艺条件下,鱼鳞酶解液中羟自由基清除率为88.71%;其体外抗氧化能力随肽质量浓度增大而增大,在浓度为0.5 mg/m L时,鱼鳞抗氧化肽清除DPPH自由基能力达到Vc的81.1%;对超氧阴离子自由基清除率为98.97%。在胃肠消化前4 h内抗氧化活性较稳定,之后随时间延长抗氧化稳定性显著下降。【结论】在酶解草鱼鱼鳞的较佳工艺条件:温度60℃、料液比1∶15、加酶量800 U/g、时间3 h下,碱性蛋白酶水解草鱼鱼鳞制备的抗氧化肽具有良好的抗氧化活性及稳定性。     

乳酪蛋白源抗高血压活性肽的制备及其生理活性

本文研究乳酪蛋白源抗高血压活性肽(Antihypertensive peptides of casein)的制备及其在体内与体外对高血压的影响.乳源酪蛋白酶解产物经过大孔树脂DA201C脱盐处理,并采用RP-HPLC的分离纯化,检测了脱盐酶解产物与活性肽产物对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制活性,并用活性肽产品与酶解物灌胃SHR,观察SHR血压的影响.结果显示,活性肽(02mg·mL-1)与酶解产物(1 mg·mL-1)对ACE的活性有很强的抑制作用,抑制率分别为75.5%、80.1%;活性肽(5 mg·kg-1)与酶解产物(500mg·kg-1)均对自发性高血压大鼠(SHR)有较显著的降血压作用.     

酶法水解玉米蛋白工艺条件的优化

通过对中性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶复合酶来水解玉米蛋白粉制备多肽的工艺进行了研究,试验以水解度(DH%)为指标,确定了复合酶解的最佳工艺条件.结果表明:复合酶(中性蛋白酶和木瓜蛋白酶)比例为2:1,底物浓度为10%,pH为7.5,温度为45℃,在此条件下酶解2h,玉米蛋白的水解度达到15.36%.     

酶解蛋清粉制备蛋清蛋白肽工艺条件研究

研究碱性蛋白酶水解制备蛋清蛋白肽的工艺条件。通过单因素试验及正交试验,确定最佳工艺条件底物溶液为5%蛋清粉、加酶量7000U·g^-1底物、底物溶液pH值8.5,酶解温度55℃,水解时间5h,水解度为83.16%。     

双酶水解麦胚制备抗氧化肽的工艺优化

以麦胚为原料,制备具有抗氧化活性的麦胚肽。对碱性蛋白酶Alcalase 2.4 L与胰蛋白酶双酶组合酶解麦胚的工艺进行优化。以水解度和1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基清除率为考察指标,探讨酶与底物浓度的比值([E]/[S])、酶降温度和酶解时间对制备麦胚抗氧化肽工艺的影响,采用Box-Behnken中心组合设计和响应面法(RSM)优化了麦胚双酶水解的工艺条件。结果表明:双酶水解麦胚制备抗氧化肽的工艺条件为底物浓度10.0%、碱性蛋白酶与胰蛋白酶酶活比1∶1、[E]/[S]为0.041 3、酶解温度50.3℃、酶解时间2.03 h、pH8.0。验证试验表明,在此条件下,麦胚水解度和抗氧化肽对DPPH自由基清除率分别为16.65%和50.16%;其抗氧化活性小于10 mg/ml VC。     

超声波辅助酶法制备绿豆ACE抑制肽的工艺研究

【目的】确定绿豆ACE抑制肽的最佳制备工艺,以及最佳工艺条件下所得ACE抑制肽的抑制率。【方法】以绿豆为原料,采用超声波辅助酶法制备绿豆ACE抑制肽,通过单因素试验研究超声波处理时间、加酶量、水浴温度、超声波功率、酶解时间对蛋白水解度和所得ACE抑制肽的抑制率的影响。在单因素试验的基础上,利用响应面分析法优化超声波辅助酶法制备绿豆ACE抑制肽的工艺,并确定最佳工艺条件下ACE抑制肽的抑制率。【结果】超声波辅助酶法制备绿豆ACE抑制肽的最佳工艺条件为:超声波处理时间20min、水浴温度55℃、超声波功率155W、加酶量5%、酶解时间2h,在此条件下实际得率可达到89.27%。【结论】在优化的最佳工艺条件下,所得ACE抑制肽的抑制率可达89.27%,较传统酶法制备的绿豆ACE抑制肽提高了9%。     

双酶直接酶解米糠制备短肽的工艺优化

 【目的】建立在中低温度下直接酶解米糠制备短肽的优化工艺。【方法】采用二次回归正交旋转组合设计优化直接酶解米糠制备短肽的工艺条件,其中总糖含量测定采用蒽酮比色法,水解度（degree of hydrolysis,DH）采用pH-stat法,蛋白质回收率采用凯氏定氮法。【结果】确定直接酶解米糠制备短肽最佳工艺条件为：米糠先经糖酶（viscozyme）反应2 h去除糖类杂质,然后用碱性蛋白酶（alcalase）和胰蛋白酶双酶水解,最适pH 8.2,温度45℃,alcalase与胰蛋白酶酶活比59﹕41,总酶活5 750 U/g底物,水解时间3 h。在此条件下,DH为23.04%,蛋白质回收率为84.33%,酸溶性多肽（TCA-SN）为68.40%,短肽分子量主要集中在1 000 D以下。【结论】在中低温和偏中性（pH 8.2）条件下,采用碱性蛋白酶和胰蛋白酶双酶直接酶解米糠制备短肽,与先提取蛋白后酶解制备短肽的方法相比,具有操作步骤简单、蛋白质利用率高等特点,是一种制备米糠肽的新途径。     

酸酶复合法优化鱼鳞胶原蛋白的提取工艺

以鱼鳞为原料,经过粉碎、脱杂蛋白、脱矿物质等预处理,采用酸酶合解法提取胶原蛋白。结果表明,以0.1 mol/L Na Cl脱杂蛋白,0.3 mol/L EDTA脱矿物质,柠檬酸和胃蛋白酶为提取介质有利于胶原蛋白的提取;影响鱼鳞胶原蛋白提取效率的主要因素分别为柠檬酸浓度、酶用量、提取时间,为保证蛋白质不变性,最佳的提取工艺,柠檬酸浓度为3%、酶用量为鱼鳞质量的7%、提取时间6 h、提取温度25℃(室温),此时羟脯氨酸的提取量为2.395μg/g。表明采用酸酶复合法进行胶原蛋白的制备,不仅可以保证胶原蛋白的完整性,还有助于提高其产率。     

长牡蛎蛋白双酶水解工艺及其产物的抗氧化活性

使用中性蛋白酶和胰蛋白酶双酶水解长牡蛎(Crasostrea gigas)蛋白,采用单因素试验分析了水解时间、pH和酶用量比对水解度的影响,并在此基础上设计正交试验优化酶解的工艺条件,并测定了酶解产物的还原能力和对DPPH自由基的清除能力.结果表明,中性蛋白酶和胰蛋白酶双酶水解牡蛎蛋白的最佳工艺条件为酶解时间3h、pH 7、U中性蛋白酶∶U 胰蛋白酶=1∶3,此时水解度为27.09％;酶解产物具一定的还原能力并对DPPH自由基有较强的清除作用.