江苏地区猪圆环病毒2型流行病学调查

应用复合PCR方法,对江苏地区的162份可疑病料进行了检测,结果72份病料为PCV2阳性,17份为PCV1阳性,其中7份同时感染PCV1和PCV2。从发病时间看,以9~11月发病最多,阳性率高达54.67%。样品较多的保育猪和育肥猪的阳性率分别是26.03%和68.12%。通过流行病学调查,表明该病已在江苏地区呈流行趋势。同时对18头PCV2阳性猪病料的心、肝、脾、肺、肾、脑、腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结、扁桃体进行PCV2检测,结果有7头PCV2阳性猪的各个脏器都能检测出PCV2;在这些脏器中,肺、腹股沟淋巴结、扁桃体的检出率都为100%,较其他受检脏器更适合作为PCV2的检测样品。     

2021—2022年南京市野猪中8种病毒感染情况及PCV2全基因组遗传进化分析

野猪是多种重要动物疫病的天然宿主,为了解2021—2022年期间南京市野猪疫病感染情况、基因型及遗传变异特征,为野猪疫病的防控提供科学依据,在江苏省南京市共采集30头野猪的76份样品,其中30份全血样品、30份血清样品、6份粪便样品和10份组织样品(心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏组织的混合样品)用于开展猪瘟病毒(CSFV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、口蹄疫病毒(FMDV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的病毒核酸及抗体检测。不同样品PCR检测结果显示,30头野猪中有12头PCV3阳性,阳性率为40%;PCV2阳性率为6.7%;其余病原核酸检测均为阴性。在PCV2检测阳性的野猪样品中成功获得2条PCV2全基因组序列,且均属于PCV2d基因亚型。血清抗体检测结果显示,野猪PCV3、PCV2、PRV gB、PRRSV、PEDV和FMDV A型抗体阳性率分别为53%、30%、30%、3.3%、3.3%和6.7%;所有野猪CSFV、ASFV、PRV gE抗体和FMDV O型抗体检测均...     

猪圆环病毒3型PCR检测方法的建立及其应用

根据Gen Bank登录的猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)全基因组序列设计并合成了一对特异性引物,经条件优化,建立了检测PCV3的PCR方法,扩增片段大小为932 bp;最低的质粒检测浓度为10 copy/μL;对猪圆环病毒1型、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒的核酸进行扩增,均无PCV3目的条带出现;随机抽取扩增的16份临床病猪样品目的条带进行TA克隆后测序,结果显示均为PCV3特异性目的片段,16株PCV3江苏毒株扩增序列与已报道的PCV3/US/SD2016和PCV3/CN/Hubei-618基因序列同源性分别为98.4%~99.6%、99.0%~99.8%,而16个毒株之间的同源性为98.3%~100%。利用所建立的PCR方法检测了2014~2017年间收集的江苏省临床病猪样品938份、健康猪样品500份,PCV3的阳性检出率分别为6.93%和0.6%;其中,2014年病猪样品中的阳性率为1.92%,后呈逐渐上升的趋势,2017年达到12.67%。本研究表明,建立的PCR方法特异、敏感,可以用于临床PCV3的检测;PCV3在江苏省猪群2014年已有感染,并呈逐年升高的趋势,应予以重视。     

河南地区猪圆环病毒3型的PCR检测

为调查河南地区猪圆环病毒3型(PCV3)的感染情况及流行特点,对2015—2017年河南不同地区猪场采集的152份临床样品进行PCR检测PCV3。结果显示,152份临床样品中检测到46份PCV3,阳性率为30.26%(46/152),在开封、新乡、鹤壁等7个地市均检测出PCV3,说明PCV3在河南省部分地区存在并且已呈现流行趋势;152份临床样品中有105份样品PCV2为阳性,阳性率为69.08%,且所有PCV3阳性样品均可检测出PCV2,推测PCV3与PCV2的共感染可能广泛存在。本研究对河南省猪圆环病毒病的防控提供基础信息。     

新疆6个地区规模化猪场猪圆环病毒3型感染调查和基因分析

用PCR/RT-PCR方法对新疆6个地区449份猪全血或组织样品进行病毒核酸检测,在PCV3检测为阳性的样品中选取2株克隆测序验证并分析其基因序列.结果各地区均检测到PCV3,阳性率为8.1％～16.0％,平均阳性率为14.5％(65/449),其中PCV3单独感染率为33.8％(22/65);PCV3+PRRSV感染...     

酒泉市猪圆环病毒2型和3型的流行病学监测和分析

为掌握酒泉市五个农业县猪圆环病毒2型（PCV2）和3型(PCV3)流行情况,在辖区内不同区域、不同养殖规模、不同生长阶段的19个规模化养殖场、38个散养户、4家屠宰场采集血清样品230份、粪便样品250份、猪肺脏、扁桃体、颌下淋巴结等组织样品220份,进行PCV2和PCV3核酸检测,检出阳性样品138份,阳性率为21.23%,PCV2的阳性率为15.54%,PCV3的阳性率为5.69%,表明PCV2的流行比PCV3更普遍、阳性感染率更高,但在不同区域、不同规模猪场的危害程度和流行情况存在一定的差异。规模养殖场的总体阳性感染率明显低于散养户,保育猪的感染率高于其他生长阶段的生猪。本次实验对酒泉市猪场PCV感染综合防控提供技术支撑,为科学养猪产生积极影响。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株与猪瘟病毒等混合感染的调查与分析

从华南地区PRRSV变异株(NSP21 594-1 680 bp缺失)核酸阳性的23个规模场、42个个体养殖场和15个散养户,随机采集发病、同群猪血清197份、组织样品115份,调查猪群个体感染PRRSV变异株情况,并对PRRSV变异株核酸阳性样品进行CSFV、PRV、PCV2、SIV检测,调查PRRSV变异株混合感染情况.结果表明:312份样品中224份PRRSV变异株核酸阳性,阳性率71.79%;PRRSV变异株核酸阳性样品中CSFV、PRV、PCV2核酸阳性样品分别为12份、2份,35份,阳性率分别为5.35%、0.89%、15.6%;80个场(群)均未检测到SIV核酸的存在.25个场(群)存在病毒混合感染,其中PRRSV变异株/CSFV、PRRSV变异株/PRV、PRRSV变异株/PCV2二重感染和PRRSV变异株/CSFV/PCV2、PRRSV变异株/PRV/PCV2三重感染猪场(群)百分率分别为5%、1.25%、21.25%和2.5%、1.25%.PRRSV变异株(NSP21594-1680变异)是造成猪场(群)重大损失的直接原因,并可与CSFV、PRV、PCV2等病毒出现混合感染,与PCV2混合感染比率较高.     

河北省猪群中检出猪圆环病毒3型

猪圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV3)为新发传染病病原。2016年美国首次报道了该病的发生与流行。为了解PCV3在我国猪群中的分布与流行状况,本研究建立了PCV3 PCR检测方法。敏感性和特异性试验结果表明,该方法对PCV3的最低核酸检出量为38 pg,可扩增出284 bp的特异性片段。利用建立的PCR方法对从河北省猪场收集的168份疑似样品进行检验,检出阳性样本9份,表明河北猪群存在PCV3感染。     

青海贵德地区猪圆环病毒2型感染调查

为了解青海贵德地区猪群中猪圆环病毒2型(PCV2)的感染状况,本研究应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对采自该地区2个猪场的73份血清样品进行了PCV2抗体检测,采用荧光PCR技术对45份猪病料样品进行了PCV2病毒核酸检测。结果显示:PCV2抗体检测的平均阳性率为95.89%,猪病料PCV2病毒核酸检测的阳性率为100%。     

云南省新发猪圆环病毒3型感染状况调查与全基因进化分析

为了解猪圆环病毒3型(PCV3)在云南省不同地区猪群中的流行情况,针对PCV3基因保守区域设计特异性引物,优化反应条件,建立PCR快速检测方法,并采用该方法对采自云南省不同地市431份样品进行检测,将获得的部分毒株全基因序列进行遗传进化分析。结果显示:本研究成功建立了一种快速、特异和灵敏的PCV3检测方法;云南省12个地(市)29县(区)中,8个地(市)12个县(区)检测出阳性样品;431份样品中有43份PCV3阳性样品,阳性率为9.98%;获得的3株PCV3全基因组序列与参考毒株之间的核苷酸同源性为98.6%~99.5%,进化树显示3株云南毒株形成一个小的进化分支,属于PCV3a基因型。本研究结果表明,PCV3在云南省多个地区呈一定的流行趋势,流行毒株以PCV3a基因型为主,有必要进一步开展云南地区PCV3流行病学调查,并提出防控对策。     

某规模化猪场猪舍环境中猪圆环病毒3型的检测与分析

猪圆环病毒3型(PCV3)是危害我国养猪业的重要病原之一。为探索猪场环境因子与PCV3传播的相关性,揭示实际生产周期中的PCV3传播规律和环境关键风险控制点,在内蒙古自治区某规模化猪场,筛选5个有临床流行病学意义的猪舍,按照实际生产周期,分3批次共采集75份不同类型的环境样品,利用荧光定量PCR方法进行PCV3检测,分析不同生产阶段在不同类型环境样品中的PCV3分布情况。结果显示:在5个猪舍3批次采集的75份不同类型环境样品中,PCV3阳性率为60.00%;5个猪舍不同类型环境样品,在进猪前3 d检测均为PCV3阴性,在进猪后约15 d检测均为PCV3阳性,4个猪舍在进猪后约30 d检测均为PCV3阳性;5个猪舍的垫子、料槽、风机和漏粪板样品中病毒含量均较高。结果表明:5个猪舍流行的PCV3并非由进猪之前(空舍时期)的环境消毒不彻底所致,而可能与引进猪只的健康状况、生产管理等相关;猪舍内的垫子、料槽、风机和漏粪板等可能是PCV3传播中的关键环境风险控制点。本研究从环境控制的角度,提出了PCV3传播中的关键环境风险控制点,为PCV3感染的精准防控提供了参考。     

四川省PPV与PCV2的病原流行病学调查

从四川省21个规模化猪场采集样品273份,利用PCR方法检测并分析了猪细小病毒和猪圆环病毒的感染及混合感染情况,结果共检出PPV病原阳性样品47份（占17．22％）;PPV阳性猪场8个（占38．1％）;种猪的感染率较高,仔猪感染率相对较低;检出PCV2病原阳性样品143份（占52．38％）,PCV2阳性猪场18个（占85．7％）;PCV2感染随猪年龄的增长而升高;检出PPV和PCV2混合感染样品29份（占10．62％）;同时存在PPV和PCV2的猪场6个（占28．7％）,混合感染主要集中在母猪和保育仔猪阶段。仅有3个猪场未检出PPV和PCV2病原,占14．3％。该结果说明PPV与PCV2及其混合感染在四川省流行广泛,对养殖业构成了较严重的危害。     

鉴别猪圆环病毒2型和3型双重TaqMan MGB探针FQ-PCR检测方法研究

建立一种快速、特异鉴别检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的双重TaqMan MGB探针FQ-PCR方法,本研究以PCV2的Rep蛋白和PCV3的Cap蛋白基因作为靶基因,各设计1对特异性引物和1条TaqMan MGB探针,经优化各反应条件和进行敏感性、特异性、重复性和干扰性试验,建立鉴别检测PCV2/PCV3的双重FQ-PCR方法。结果显示：该方法可特异性扩增PCV2、PCV3核酸,与猪伪狂犬病病毒(PRV)等8种病原及阴性对照无交叉反应,特异性较强;对PCV2和PCV3阳性质粒标准品的最低检出限均可达10 copies/μL,敏感性较高;PCV2/PCV3批内/批间重复试验变异系数(CV)值均在3%以下,表明方法稳定性、重复性较好;干扰性试验表明在两种病毒阳性质粒起始模板相差较大时该方法不会影响对其中任一病毒核酸的检出和准确定量。对42份临床疑似PCV感染样品检测结果与PCV2 、PCV3基因测序结果符合率100%。本研究建立的双重FQ-PCR方法具有敏感性高达10 copies/μL、特异性强、在同一反应体系中能同时快速鉴别检测PCV2、PCV3等优点,可用...     

广西猪圆环病毒2型及3型的流行病学初步调查

为了解广西近年来猪圆环病毒2型(PCV2)、圆环病毒3型(PCV3)的感染现状,本研究采集2020年-2022年来自广西养殖场、生猪屠宰场及无害化处理点的样品,采用实时荧光定量PCR方法进行检测。结果表明,1408份样品中,有731份PCV2阳性样品,阳性率为51.92%,471份PCV3阳性样品,阳性率为33.45%,有353份样品PCV2、PCV3均阳性,混合感染率25.07%。PCV2、PCV3普遍分布在广西14个地市,各地市感染程度存在较大差异。养殖场、屠宰场及无害化处理点PCV2、PCV3风险较高,风险由低到高依次是养殖场、屠宰场及无害化处理点。从不同类型样品携带病毒的情况来看,淋巴结和脾脏最高,脐带次之,精液未检测出阳性。这些结果可为我区PCV2、PCV3的流行情况分析、采样监测及防控提供依据。     

湖南省部分地区病猪和屠宰猪群猪圆环病毒感染状况调查

为了解湖南省猪圆环病毒（PCV）流行情况,采用荧光PCR方法,对来自湖南省14个市州的821份临床病料和屠宰场猪淋巴结样品进行PCV1、PCV2、PCV3和PCV4荧光PCR检测。结果显示：在821份样品中,PCV阳性检出率为88.06%（723/821）,阳性检出率由高到低依次为PCV2（81.49%）、PCV3（33.98%）、PCV1（8.04%）和PCV4（1.10%）;278个样品存在两种及以上的PCV混合感染,以PCV2+PCV3混合感染最多,占82.01%;在地域分布上,PCV1、PCV2、PCV3在湖南省各地区均有分布,而PCV4分布范围较小,感染率低。结果表明,湖南省内PCV流行较为普遍,4种基因型病毒都存在,但以PCV2流行最为广泛,需要加强防控。     

西宁市猪圆环病毒2型感染的流行病学调查

用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测了西宁市8个规模养殖场和部分散养户的161份猪血清样品的猪圆环病毒2型（PCV2）抗体。结果显示，所有被检猪场均有PCV2抗体阳性猪存在，161份血清样品中PCV2抗体阳性率为86．95％。从上述样品中随机抽取28份样品，用PCR方法检测了PCV2ORF1基因；结果，从13份血清中扩增到了特异性PCV2ORF1基因，阳性率为46．42％。证实，西宁市猪场和散养猪群中存在PCV2感染。     

猪细环病毒和猪圆环病毒2型混合感染状况的调查

为分析我国猪细环病毒(TTSuV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的共感染情况,利用所设计的TTSuV(TTSuV1、TTSuV2)和PCV2特异性引物对我国29个省市采集的猪群血清样品同时进行PCV2和TTSuV(TTSuV1、TTSuV2) PCR检测,分析混合感染情况.结果所检测的1898份样品中,TTSuV阳性为1103份(58％),PCV2阳性为435份(23％).阳性样品中呈混合感染的有275份(14％),其中TTSuV1和PCV2为249份(13％),TTSuV2和PCV2为200份(10％),均为阳性的有174份(9％).调查结果显示,我国猪群中TTSuV和PCV2混合感染现象较为普遍,对地区性分布特征和饲养模式等影响因素的分析表明TTSuV和PCV2混合感染情况存在地区性差异(P＜0.01),但饲养模式并不是共感染的关键因素.     

PMWS患病猪群中PCV2与CSFV、PPV、PRRSV混合感染的调查

应用套式PCR方法对采自辽宁、河北、河南、湖北、湖南、山东、浙江、福建和广西9个省份的733份临床发病猪肺脏和淋巴结样品进行了PCV2的检测,然后对鉴定为PCV2阳性的283份病料再分别进行PRRSV、PPV和CSFV的检测,以确定猪群中PCV2与CSFV、PRRSV和PPV双重感染情况,结果表明:CSFV、PRRSV和PPV阳性样品分别为74份、94份和46份,阳性率分别为26.1%、33.2%和16.3%。表明这些地区发病猪群中PCV2与这三种病毒的双重感染普遍存在,其中以PCV2和PRRSV的双重感染较为突出;但在河北和湖北两省,则以PCV2与CSFV的双重感染为主。     

PCV2和PCV3双重纳米PCR方法的建立及初步应用

本研究旨在建立一种同时检测猪圆环病毒2型（PCV2）和猪圆环病毒3型（PCV3）的双重纳米PCR（nano-dPCR）方法,同时应用该方法对PCV2和PCV3进行检测。参考GenBank中登录的PCV2和PCV3型基因序列分别设计特异性引物,对nano-dPCR的反应条件进行优化;同时考察所建立的nano-dPCR检测方法的特异性和敏感性。结果显示,所建方法的特异性和敏感性良好,对PCV2和PCV3两种病毒的最低核酸检测量分别为93.2和91.6拷贝/μL,其敏感性比普通PCR高100倍。应用该方法对送检的265份临床样本进行检测,结果显示,PCV2和PCV3在猪群中存在普遍感染,PCV3和PCV2的阳性率分别为16.6%和14.7%,混合感染阳性率为6.8%。临床样品的检测结果表明,本试验建立的nano-dPCR方法为PCV2和PCV3早期感染进行快速、敏感鉴别诊断提供了新方法。     

屠宰生猪肺脏健康状况评估及主要病原的检测

肺部感染引发的不同程度的肺脏病变在屠宰生猪的宰后检验中常有发现。本试验对某规模化生猪养殖企业屠宰生猪连续10周采集肺脏,每次取约300份肺脏,共3 000份肺脏进行健康评价,并每次选择8份病变肺脏(共80份)进行猪呼吸道疾病常见病原的核酸检测,通过分析可能引起屠宰生猪肺部感染的病原,以期为生猪的疾病防控、动物产品安全评估提供基础资料和参考。结果显示,3 000份肺脏中评估为健康的有1 822份,占60.7%(1 822/3 000);病变肺脏有1 178份,占39.3%(1 178/3 000);病变类型主要为炎症、肉变。80份病变肺脏中猪圆环病毒2型(PCV2)核酸阳性有16份,副猪嗜血杆菌(HPS)阳性有39份,猪链球菌(SS)阳性有36份,猪肺炎支原体(Mhp)阳性有4份;PCV2与Mhp、HPS、SS混合阳性率分别占到PCV2阳性数量的12.5%、56.25%、81.25%;未检测到猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪流感病毒(SIV)、巴氏杆菌(Pm)和猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)等病原。本次评估结果表明,屠宰生猪肺脏病变比例较高,引起肺脏发生病变的呼吸道病原主要为HPS、SS、Mhp和PCV2,且以和PCV2的混合感染居多。