青海省藏羊感染皮蝇蛆调查及其虫种鉴定

为了解青海省藏羊感染皮蝇蛆状况及感染种类,本研究在3个地区调查了476只藏羊,对2株感染藏羊皮蝇蛆和4株感染牦牛皮蝇蛆的线粒体CO1基因种属特异性序列进行比较研究。结果表明:14只羊感染了皮蝇蛆,感染率为2.9%,总瘤胞数为27个,平均感染强度为1.9个;并扩增其长度为688 bp的序列,克隆后测序,将其序列与GenBank中的牛皮蝇、纹皮蝇蛆和中华皮蝇蛆序列进行聚类分析,结果显示青海省感染藏羊的皮蝇蛆与感染牦牛的果洛株、民和和黄南株在线粒体CO1基因片段聚类分析进化树和同源性比较中,与牛皮蝇位于同一个进化树分支上,基因片段同源性大于99%,为牛皮蝇;感染牦牛的海晏株和贵南株在线粒体CO1基因片段聚类分析进化树和同源性比较中,与中华皮蝇位于同一个进化分支上,基因片段同源性大于99%,为中华皮蝇。几个皮蝇蛆分离株种内变异率小于1%,种间变异率大于8%。     

驯鹿的皮蝇蛆线粒体CO1基因序列分析

利用分子生物学技术对内蒙古驯鹿未定种皮蝇蛆线粒体CO1基因种属特异性序列进行了研究.DNA核苷酸测序结果证实:该种皮蝇线粒体CO1种属特异性基因UEA7到UEA10特殊目标编码区域片段长度约为689 bp;种系发生进化树和同源性分析显示其与鹿皮蝇法国株同源性非常接近,因此确定内蒙古地区感染驯鹿的皮蝇蛆为鹿皮蝇(Hypo...     

驯鹿狂蝇(Cephenemyia trompe)线粒体COI基因序列研究

利用分子生物学技术对驯鹿狂蝇蛆及其成蝇（Ccphenemyia trompe）的线粒体COI基因种属特异性序列进行了研究。DNA核苷酸测序结果证实：中国内蒙古株驯鹿狂蝇蛆（C.trompe CIML）及其成蝇（C．trompe CIMA）线粒体COI种属特异性基因片段长度约为672bp～676bp。种系发生进化树分析显示：第三期幼虫与成蝇两者在核苷酸碱基序列上存在一定差异；它们与同种不同挪威株（C．trompel同源性较为接近：与同属不同种（C．stimulator和C．ulrichii）同源性稍差；与不同属种的羊狂蝇（Oestrusovis）同源性较远，狂蝇科不同属间序列差异明显，差异性在18．6％～23％之间；鹿蝇属不同种间差异性在1．9％～9．9％之间：驯鹿狂蝇不同株间差异性为0．9％。说明生物线粒体COI基因核苷酸序列在一定程度上．可反映出种属及株间在进化上的差异性。     

兔裸皮蝇对宿主高原鼠兔生理和个性特征的影响

以高原鼠兔(Ochotona curzoniae)为研究对象,比较感染与未感染兔裸皮蝇(Oestromyia lep-orina)的鼠兔生理特征(体重、束缚下的呼吸率和心率、体重矫正的静止代谢率、粪便皮质醇浓度)和个性特征(冒失性、温顺性、探索性)及其关联性.结果 表明:与未感染皮蝇的鼠兔相比,感染皮蝇的鼠兔体重、呼吸...     

日本大耳白兔TLR3部分cDNA克隆及mRNA在组织中的分布

采用RT—PCR技术从日本大耳白兔的脾脏组织克隆出兔的Toll样受体基因3（命名为。TLR3），并对其mRNA在兔的17种组织中的分布情况进行了检测。结果显示，RTLR3核苷酸序列与GenBank中登载的穴兔（Oryctolagus cuniculus）TLR3序列（登录号：NM_001082219）相似性为100％；兔的胸腺、脾脏、睾丸等14种组织中检测出TLR3 mRNA的转录产物，而在骨骼、胃和皮肤中未能发现。推导的氨基酸序列同源性比对表明，兔TLR3与人、野猪、牛、猫、褐鼠等动物的同源性最高，为80％-85％；与原鸡同源性次之，为61％；与草鱼、绿河豚等同源性在45％～48％之间；系统进化树分析表明，兔TLR3与马的亲缘关系最接近，与猪、人／绵羊、牛、猩猩／猫的亲缘关系依次渐远，与鼠的亲缘关系最远。可见，TLR3在不同种属动物及不同组织中所起的作用具有生物多样性。     

皮蝇Hypodermin A基因的克隆及表达质粒构建

参照牛皮蝇Hypodermin A（HA)基因的核苷酸序列．设计一对引物．以皮蝇总RNA为模板进行RT--PCR扩增牛皮蝇HA基因．将扩增基因进行克隆测序。序列分析表明．所克隆获得的基因与GenBank中已经登录的核苷酸和氨基酸的同源性分别为97．2％和99．3％。同时．将该基因与表达载体PGEX-4T-1连接．构建并获得阳性重组表达载体。     

家蚕追寄蝇线粒体DNA细胞色素b基因及其侧翼tRNA基因的克隆与序列结构和进化分析

家蚕追寄蝇(Exorista sorbillans)为双翅目、寄蝇科、追寄蝇属昆虫,寄生家蚕后引起多化性蚕蛆病。研究家蚕追寄蝇的系统进化关系,有助于探讨其寄生机制。采用PCR技术扩增了家蚕追寄蝇的线粒体DNA(mtDNA)片段,序列分析结果表明:克隆的mtDNA片段大小约1.5 kb,包括完整细胞色素b基因(cyto b)及其侧翼tRNA-Leu基因序列,序列结构与其它21个昆虫物种的同源片段序列结构基本一致,说明线粒体DNA基因排列和基因结构的保守性;家蚕追寄蝇mtDNA的Cyto b蛋白和tRNA-Leu基因的二级结构符合功能大分子的空间结构特征,维持一定的保守进化;双翅目昆虫不同蝇类mtDNA中的cyto b基因、tRNA-Leu基因序列的同源性高,可保证构建蝇类系统发生树的准确性。基于包括家蚕追寄蝇在内的12个双翅目昆虫、5个鳞翅目昆虫、4个鞘翅目昆虫、1个直翅目昆虫的mtDNA cyto b基因编码氨基酸序列的进化分析表明:双翅目中蝇类的进化次序依次为狂蝇科、果蝇科、寄蝇科、蝇科、丽蝇科,寄蝇科与蝇科和果蝇科之间的进化距离较近;鳞翅目处于种系发生树分叉的起点,起源最早,双翅目处于种系发生树分叉的最末端,起源最晚。     

兔出血症病毒CD株衣壳蛋白(VP60)基因的克隆、核酸及氨基酸序列比较分析

以兔出血症病毒 CD株人工感染家兔 ,发病死亡后 ,取肝脏匀浆 ,用 Trizol试剂从匀浆上清中提取病毒 RNA。根据 Gen Bank已发表序列保守区设计并合成引物 ,采用 RT- PCR方法扩增了 RHDV衣壳蛋白 VP6 0基因。将所扩增片段克隆到 p MD18- T载体上 ,并进行了序列测定 ,测序结果表明 ,CD株 VP6 0基因全长 174 0 bp。该序列与已发表的其他分布于世界各地的 14株 RHDV序列进行了比较和基因进化树分析。无毒株与各强毒株之间的同源性为 85 .3%～86 .5 % ,强毒株间的同源性较高 ,为 92 .1%～ 10 0 %。根据进化树可把强毒株分为 2大群 ,一群为 CD株、Iowa2 0 0 0株、0 0 - 139株、99- 0 5株 ,其余的为另一群。进一步细分 ,还可以分为 4个亚群和 7个组。但毒株之间的地域性差异并不明显。同时根据 15株 RHDV VP6 0基因的核苷酸序列推导了其所编码的氨基酸序列 ,并进行氨基酸序列的比较和亲水性、柔性区、抗原性和表面结构的比较分析。结果显示 ,各毒株氨基酸之间的的同源性在 90 .5 %～ 10 0 %之间 ,其中无毒株与各强毒株之间的同源性为 90 .5 %～ 91.9% ,强毒株间的同源性在 95 %～ 10 0 %之间 ;氨基酸变异分析未发现突变造成的 VP6 0蛋白高级结构的根本性变化     

藏羚羊中华皮蝇蛆的分子生物学鉴定

利用分子生物学技术对藏羚羊感染的中华皮蝇的线粒体COI基因种属特异性序列进行了研究.利用PCR方法扩增出长度为688 bp的序列,经TA克隆后测序,测序结果表明与中华皮蝇、牛皮蝇和纹皮蝇的相似性分别为99.1%、91.4%、93.6%,确定为中华皮蝇,证实藏羚羊中存在中华皮蝇的侵染,从而扩大了中华皮蝇的宿主范围.     

传染性支气管炎病毒青岛腺胃分离株(SD/97/02)基质蛋白、5a、5b 蛋白基因的克隆和序列分析

参考 Gen Bank上的传染性支气管炎病毒 (IBV)序列 ,自行设计合成了 3条引物 ,对 IBV青岛腺胃分离株 (SD/97/ 0 2 ) RNA进行 RT- PCR扩增 ,扩增含基质蛋白 (M)及 5 a、5 b蛋白基因的约 1.6 5 kb的片段 ,对 PCR产物进行克隆后测序。序列分析显示 ,M蛋白基因与其他 IBV相应的基因同源性在 90 .33%～ 92 .75 %之间 ,氨基酸序列比较 ,同源性在 89.82 %～ 94.2 5 %之间 ;5 a基因与其他 IBV的基因同源性在 84.34 %～ 87.37%之间 ,氨基酸同源性在 81%～82 %;5 b基因与其他 IBV的基因同源性在 91%～ 92 %之间 ,氨基酸同源性在 93%左右。     

Cytochrome oxidase I gene sequence of Hypoderma sinense infecting yaks in the Qinghai-Tibet high plateau of China

The previous scanning electron microscopy study of the Hypoderma species suggested that Hypoderma sinense Pleske (H. sinense) was different from Hypoderma bovis (H. bovis) and Hypoderma lineatum (H. lineatum). In this study, the mitochondrial cytochrome oxidase I (COI) gene sequence of H. sinense was compared with those of the other two species. The H. sinense sequence showed only 88.3% homology to H. bovis and 88.5% to H. lineatum. The results of the sequencing analysis confirm that H. sinense is a different species from H. bovis and H. lineatum.     

基于旋翼无人机低空遥感的高原鼠兔危害等级划分技术研究

高原鼠兔是青藏高原特有的小型啮齿动物,是高寒草地生态系统的关键种。科学合理防控高原鼠兔危害,对其危害程度开展监测和评价十分必要。通过无人机空中遥感平台并结合地面调查,以甘肃省玛曲县高原鼠兔危害草地为研究对象,选择不同危害程度的典型样地,采用自主设计的软件提取无人机影像中高原鼠兔洞口数、地上生物量、草地盖度等指标;构建了由洞口数、地上生物量、盖度和可食牧草比例组成的高原鼠兔危害等级综合指标体系,并对研究区样地进行危害等级划分。最终形成一套适用于高原鼠兔危害的低空遥感监测方法,可为后期高效、准确监测高原鼠兔危害提供有力的技术支持。主要结果如下：1）经实地人工调查结果验证,无人机影像洞口数量和植被盖度解译精度分别达到95%和93%。2）筛选了可见光波段差值植被指数VDVI作为估测地上生物量的最佳植被指数,并构建了估测模型。经实地调查验证平均精度为86.54%。3）构建了综合危害指数DRI,并提出了划分危害级别的各指标量化值。通过聚类分析将研究区鼠害地划分为5个等级,即I-无危害草地,Ⅱ-轻度危害草地,Ⅲ-中度危害草地,Ⅳ-重度危害草地,V-极度危害草地。     

鸭肝炎病毒GD株的全基因组序列测定与分析

为了给在分子水平上研究鸭肝炎病毒(DHV)的致病机理奠定基础,进一步丰富DHV的遗传变异和进化信息,试验采用RT-PCR方法分段克隆获得DHV-1 GD株的全基因组序列并进行序列分析。结果表明:GD株的基因组全长7 690 nt[不含Poly(A)尾],5’端和3’端非编码区长度分别为626 nt和314 nt,单一开放阅读框架(ORF)为627～7 376 nt,编码2 249个氨基酸;GD株与DHV-1参考株比较,其核苷酸和氨基酸同源性分别为94.8%～99.7%和97.7%～99.6%;与中国台湾和韩国新型DHV(DHV-N)相比同源性分别为72.7%～73.2%和81.8%～83.4%;GD株与DHV-1参考株遗传进化关系较密切,处于同一分支,而与DHV-N遗传关系较远,处于不同分支。     

野生高原鼠兔体内外寄生虫的驱治效果观察

为了探求一种安全高效的驱除野生高原鼠兔的寄生虫的方法，对124只野生高原鼠兔采用伊维菌素联合球虫灵、联克杀联合灭害灵分别进行体内外寄生虫的驱治，结果显示该方法可有效驱除野生高原鼠兔体内外寄生虫，可以应用于高原鼠兔寄生虫的驱虫工作中。     

氯敌鼠钠盐防治草地害鼠药效试验

氯敌鼠钠盐杀鼠剂在我省青南牧区典型的高寒草甸草地上,对高原鼠兔具有良好的防治效果。以０．０７％剂量的燕麦毒饵,平均校正灭洞率为９０．８０％,且具有适口性好,使用方便,比较安全等特点。     

风险性声讯信号对高原鼠兔行为模式的影响

为探讨利用天敌动物声讯信号控制高原鼠兔(Ochotona curzoniae)种群数量的可行性,于2006年8月分别就猛禽类、兽类的啸叫声和鼠兔的惨叫声对高原鼠兔行为模式的影响进行研究。结果表明,天敌动物的啸叫声和同类个体的惨叫声是高原鼠兔捕食风险的重要组成因素,猛禽类、兽类的啸叫声和同类个体的惨叫声均可对高原鼠兔的行为格局造成强烈干扰。其中,尤以同类惨叫声的影响最为强烈。同类个体的惨叫声可显著增加洞内躲避时间,减少警戒时间。猛禽类和兽类的鸣叫声可显著减少高原鼠兔的采食时间,而猛禽类的鸣叫声则可延长鼠兔的警戒时间。高原鼠兔在受到风险性声讯信号的干扰时,通常均以减少采食时间、增加警戒时间和洞内滞留时间为响应,但具体应对策略则因风险类别和性质而异。高原鼠兔对声讯信息具有较强的辨识和估测能力,是实施行为决策的重要依据。应用模拟风险性声讯信号营造和强化风险环境实施对鼠类种群数量的局部调控是一个值得探索的新途径。     

植被均匀度与高原鼠兔种群数量相关性研究

通过在高原鼠兔不同密度区对植被地上生物量、盖度、高度三项指标分布均匀度的测定与分析,对高原鼠兔种群密度与植被均匀度间的关系进行了研究。结果表明,凡高原鼠兔分布地,植被三项指标均表现为不均匀性分布,在一定范围内,鼠群密度随植被均匀度的下降而增加,两者间存在极显著线性相关关系。植被的斑块状极度破坏是诱使高原鼠兔迁入的重要因素,尤以斑块状裸地的诱迁作用为甚。     

高原鼠兔和高原鼢鼠在高寒草甸中的作用

作为青藏高原高寒草甸生态系统组分的关键种,高原鼠兔Ochotona curzoniae和高原鼢鼠Myospalaxbaileyi在高寒草甸生态系统物质循环和能量流动中具有重要作用。虽然高原鼠兔和高原鼢鼠数量极端扩张后所产生的消极影响已被广泛认识,但其行为活动对生态系统土壤和植被的积极作用也不容忽略。通过简述青藏高原地区危害最严重的高原鼠兔和高原鼢鼠的生物学特征,全面分析了这2个种群的行为活动对高寒草甸生态系统植被和土壤的双重作用,指出这2个种群在适宜范围内对高寒草甸植被群落结构的种类组成、多样性、生物量及种子传播具有一定的积极效应,但当种群密度过大便会对高寒草甸生态系统的植被和土壤产生巨大的消极作用,加速植被和土壤退化。高原鼠兔和高原鼢鼠活动利害转变的关键在于确定种群致灾密度,从而发挥其积极作用,维持高寒草甸生态系统的平衡。