番鸭中网状内皮组织增生症病毒感染的检测

网状内皮组织增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)是一种可感染多品种禽的免疫抑制病病原,禽类感染REV后会导致机体发生免疫抑制并由此引发多种病原的继发感染(或混合感染),给养禽业造成极大损失。本研究利用针对REV基因组长末端重复序列(long terminal repeat,LTR)的特异性引物,对21份2013年收集的福建(12份)和浙江(9份)两省的番鸭源病料(肝脏和脾脏组织)进行检测。其中来源于福建漳州(1株,记为REV-FJ-MD01)和浙江宁波(1株,记为REV-ZJ-MD01)的番鸭源病料检测到REV感染阳性。将目的片段经克隆后进行序列测定分析发现,REV-FJ-MD01和REV-ZJ-MD01在该扩增区域的核苷酸同源性为100%,与GenBank中的REV参考株(除鸽源REV和鸭源713株仅1个碱基差异外)核苷酸同源性也为100%;从遗传进化关系可以看出,REV-FJ-MD01和REV-ZJ-MD01与REV参考株遗传进化较近,处于相同的遗传进化分支。本研究首次证实在福建番鸭中存在REV感染。     

昆明地区禽网状内皮组织增生症的血清流行病学调查

网状内皮组织增生症的危害日益严重,成为养殖业的又一大危害,主要导致免疫抑制、生长抑制、采食抑制。为了了解昆明地区(安宁)是否存在该病,该试验采集了昆明地区(安宁)几个肉鸡场的鸡血清,用酶联免疫法(ELISA)对采集的100份样本进行了鸡网状内皮组织增生症病毒抗体的检测,结果表明:昆明地区(安宁)的肉鸡场目前还没有该病的存在,尽管如此也应该引起足够的重视,做好此病的预防工作,保证昆明地区肉鸡业的健康发展,保证养殖户的养殖效益。     

黔东南小香鸡种群禽白血病、禽网状内皮组织增生症和鸡白痢感染情况检测与分析

为了解黔东南小香鸡种群禽白血病（AL）、禽网状内皮组织增生症（RE）和鸡白痢（PD）的感染状况,便于有效预防、净化疫病,更好地保护黔东南小香鸡的种质资源,从鸡群采集524份血清样品,采用ELISA检测禽白血病病毒p27抗原（ALV-p27）、禽网状内皮组织增生症病毒（REV）及鸡白痢感染抗体水平,采用PCR核酸检测进行禽白血病病毒A、B、J亚群（ALV-A、B、J）鉴定。结果表明：样品中ALV-p27抗原的阳性率为85.88%、ALV-J亚群的阳性率42.67%,REV抗体的阳性率为25.57%,鸡白痢抗体的阳性率为3.82%。根据检测结果,建议尽早对种群采取净化措施,以避免AL进一步发生及流行。     

福州市鸡群网状内皮增生症病毒血清学调查与初步分析

应用ELISA抗体检测试剂盒,对福州市9个养殖场鸡群进行网状内皮增生症病毒(Reticuloendotheliosis Virus,REV)抗体检测。共采集了鸡血清样品427份。结果表明,被检样品总的阳性率为29.51%(126/427),阳性的鸡场数占鸡场总数的77.78%(7/9),养殖场个体阳性率在0~98.36%之间。经比较不同品种REV抗体阳性率,发现肉鸡的感染率最高(61.18%),蛋鸡次之(15.48%),种鸡最低(6.60%)。不同日龄段不同品种的鸡群REV抗体阳性率呈散在分布。     

14株网状内皮组织增生症病毒中国分离株gp90基因的分子特征

[目的]研究十四株网状内皮组织增生症病毒中国分离株gp90基因的分子特征。[方法]对分离于我国不同商品蛋鸡场的14株REV的表面囊膜基因gp90进行了扩增和序列测定。[结果]序列分析表明,这14株REV不同于我国早期分离毒株与亚型3毒株亲缘关系较近。另外发现,这14株REV与美国和我国台湾的流行毒株同源性较高。[结论]本研究对深入研究我国REV的流行和遗传演化意义重大。     

蛋鸡网状内皮组织增生病病毒分离鉴定

山东某鸡场饲养的10000只父母代海兰蛋种鸡于育成前期出现进行性消瘦、生长发育不良等症状;剖检以腺胃肿胀、淋巴器官萎缩为特征,至70日龄发病率达90%;经ELISA方法检测抗体及间接免疫荧光原位病原检测证明该病与网状内皮组织增殖病病毒(REV)感染有关。取7只病鸡肝脏研磨处理后接种鸡胚成纤维细胞(CEF),用REV单抗11B118进行间接免疫荧光检测,结果均呈阳性;根据REV-HA株前病毒基因组DNA env囊膜糖蛋白基因序列设计引物,提取阳性CEF基因组DNA作为模版,PCR扩增后得到438 bp的目的片段;PCR产物测序结果比对显示,该毒株与其他中国野毒株的同源性高于与REV-HA株的同源性。综合诊断判定该病可能与鸡群早期感染致病力较强的REV有关。     

鸡痘病毒整合禽网状内皮组织增生病病毒基因的分子生物学鉴定及致病机理研究

 【目的】验证FPV野毒株是否存在REV基因整合现象,初步研究整合毒株致病鸡群REV的抗体变化规律、FPV感染组织细胞的病变及发病鸡的病理组织学变化特征。【方法】自泰安及周边地区搜集的9例典型FP临床病例取其病变组织分离FPV,电镜观察FPV形态特征、PCR扩增REV-env和LTR序列、ELISA检测FP发病鸡群血清REV抗体变化特征及病理组织学检查病鸡的病理学变化。【结果】9株FPV野毒株均有REV基因片段的整合,整合毒株使感染组织细胞的核由原来紧密球状变成较松散的螺旋状;FP患病鸡REV抗体阳性率显著升高;发病鸡除FP的一般病变外,同时显示脾脏、胸腺、法氏囊等免疫器官的淋巴组织严重萎缩,网状内皮细胞增生;肝脏、十二指肠、肺脏等器官内的淋巴组织亦表现相应的病理变化;用分离纯化整合REV基因的FPV毒株对SPF鸡试验性感染表明：整合REV基因的FPV毒株试验性感染SPF鸡患痘后期REV抗体水平的变化及组织器官的病理变化与野毒株FPV自然感染鸡所致病变相同。【结论】泰安及周边地区流行的FPV野毒株普遍存在REV基因的整合现象,整合有REV基因的FPV野毒株的致病性已发生改变,具有REV的某些致病特征。     

禽网状内皮组织增殖病病毒感染鸡的外周血白细胞动态变化

３２只１日龄ＳＰＦ鸡随机分为３个试验组和１个对照组。试验组分别腹腔接种３株禽网状内皮组织增殖病病毒（ＲＥＶ－Ｔ、ＲＥＶ－ＤＩＡ和ＲＥＶ－Ｃ４５）,０．５ｍＬ／羽;对照组注射等量生理盐水。在不同时期检测感染鸡外周血白细胞数的动态变化。结果发现,各试验组鸡的白细胞总数和异嗜性白细胞百分率及总数均呈先升高后降低的趋势;淋巴细胞百分率先降低后升高,而淋巴细胞总数则在接种后第３天显著（Ｐ＜０．０１）高于对照组,第１０天起则显著低于对照组。各试验组间白细胞数的变化不尽相同。     

鸡病防治中网状内皮组织增殖病病毒(REV)的有害作用

本文报道对禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)进行的一些研究,电镜观察表明REV是典型的RNA肿瘤C型病毒,具有“苯环状结构”,动物感染试验表明REV与火鸡疱疹病毒(HVT)之间可产生协同作用来危害鸡群。作者采用了冰冻切片结合荧光抗体或酶标抗体技术来检测组织中的REV抗原,采用间接荧光抗体试验对广东10个鸡场进行了血清学调查,结果表明只有2个鸡场是REV抗体阴性的,其余8个场均呈不同程度的抗体阳性,特别值得提到的是,其中1个场两批鸡因注射不同来源的HVT疫苗而表现出REV抗体阳性率的显著差异,这显示了“HVT疫苗失效”一个很可能的原因是REV污染了HVT疫苗。     

禽网状内皮组织增殖病病毒SYBR GreenⅠ实时荧光PCR检测方法的建立

为了探究禽网状内皮组织增殖病的快速检测方法,根据禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)LTR和gag基因的保守区域各设计并合成一对引物,建立检测插入感染与全病毒感染的SYBR Green I模式的实时荧光PCR方法(Real-time PCR)。以pMD-LTR,pMD-gag重组质粒为标准品建立标准曲线,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行评价。结果表明:该方法线性关系良好;敏感性能检测到10拷贝标准品;能特异性检测REV样品,不与其它禽相关病原发生交叉反应;板内、板间重复试验的变异系数均低于3%。应用该方法对人工感染REV的鸡的心、肝、脾、肺、肾、盲肠扁桃体、腺胃和法氏囊进行初步检测,结果显示法式囊中的含量最高。     

禽网状内皮组织增殖病的组织病理学和超微结构的动态变化

一日龄雏鸡腹腔接种禽网状内皮组织增殖病病毒(REV),观察感染后不同时期肝、脾、心、脑、胸腺、腔上囊、腺胃、十二指肠、盲肠、胰腺和性腺等器官组织的肉眼,组织学和超微结构的变化。根据组织病理学和超微结构检查表明:禽网状内皮组织增殖病(RE)的典型病变是实质细胞坏死和网状细胞增生。本病的靶器官主要是肝脏,其次是心、脾、腺胃、腔上囊、胰腺和性腺等。本病增生的网状细胞,通过光镜和电镜观察,能区别于鸡马立克氏病和淋巴性白血病。此外REV可导致雏鸡发生生长抑制和腔上囊萎缩,因此对病畜的增重和其它禽病的免疲预防具有较大的影响。     

禽网状内皮增生病毒囊膜基因gp90的克隆表达及ELISA方法的初步建立

根据禽网状内皮组织增生症病毒( reticuloendotheliosis virus,REV) SNV株前基因组cDNA序列,经生物信息学分析,设计并合成引物,以四川分离株REV-SC1为模板,扩增囊膜基因gp90抗原性、亲水性较高的121～1 023 bp基因片段;将目的基因克隆至pMD-19T载体,进行测序和比对;将基因片段按正确的阅读框架定向克隆至pET-32a(+),转化大肠杆菌BL21( DE3),以IPTG诱导表达,包涵体洗涤纯化,探讨以重组gp90蛋白为包被抗原初步建立检测REV的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法.结果表明:1)REV-SC1株gp90核苷酸序列与在GenBank上已发表序列的同源性最高为99%,于231位、870位发生了2个碱基突变;2)SDS-PAGE分析表明表达蛋白分子质量约为45 ku,与预期分子质量大小相符;免疫印迹(Western-blot)结果表明重组蛋白具有生物学活性;3)间接ELISA检测方法的最佳抗原包被质量浓度为1.5 mg.mL-1,一抗稀释度为1:320,临界值为0.126;特异性、敏感性试验结果良好.综上,本试验成功表达了REV gp90蛋白,并对其在ELISA检测方面的应用作了初步探讨.     

母源抗体对禽网状内皮增生病病毒感染诱发生长迟缓和免疫抑制的预防作用

【目的】确定经禽网状内皮增生病病毒（REV）细胞适应毒免疫的种鸡提供的母源抗体在雏鸡抗REV感染中的保护性免疫作用。【方法】分别对有母源抗体和无母源抗体的雏鸡人工感染REV野毒，比较它们的生长速度和对新城疫病毒（NDV）和禽流感病毒(AIV)灭活苗免疫后的抗体反应。【结果】在没有REV母源抗体的商品代肉鸡，1日龄感染REV不仅造成生长迟缓，还会显著抑制对NDV和AIV (H5和H9）疫苗的免疫反应。由致弱的REV疫苗免疫的父母代种鸡提供的母源抗体，不仅可预防REV野毒感染引起的生长迟缓，也可预防REV引起的对NDV和AIV灭活疫苗免疫反应的抑制作用。在1日龄攻毒REV后，有REV母源抗体组对所有三种灭活疫苗免疫后的抗体水平都显著高于无母源抗体组。免疫后4周，有母源抗体组和无母源抗体组对NDV、AIV-H9和AIV-H5的血凝抑制（HI）抗体滴度分别是3.36±2.04 vs 1.58±1.69(P＜0.01)，6.27±3.87 vs 0.71±1.60(P＜0.01)和6.72±3.92 vs 0.54±1.44(P＜0.01)。【结论】来自免疫种鸡的REV母源抗体不仅有效地预防雏鸡感染REV，而且有效地预防或减弱REV感染造成的生长迟缓及其对NDV和AIV灭活疫苗免疫后抗体反应的抑制作用。     

鸡网状内皮组织增生病的科学防控

鸡网状内皮组织增生病由网状内皮组织增生病毒感染引起,呈世界流行,病毒主要破坏免疫系统,可引发机体免疫力下降,该病一年四季都有发生,饲养密度大、通风不良、管理不达标的鸡场发病率较高;根据具体临床表现不同,本病分为急性网状细胞瘤型、矮小综合征型和慢性肿瘤型3种,分别表现急性肿瘤症状,生长发育不良及慢性肿瘤综合征,临床危害较...     

禽网状内皮细胞增殖病病毒感染鸡的外周血白细胞动态变化

３２只１日龄ＳＰＦ鸡随机分为３个试验组和１个对照组。试验组分别腹腔拉种３株禽肉状内皮组织增殖病病毒（ＲＥＶ－Ｔ,ＲＥＶ－ＤＩＡ）和ＲＥＶ－Ｃ４５）,０．５ｍＬ／羽,对照组注射等量生理盐水。在不同时期检测感染鸡外周血白细胞数的动态变化。结果发现,各试验组鸡的白细胞总数和异嗜性白细胞百分率及总数均呈先升高后降低的趋势,淋巴细胞百分率先降低后升高,而淋巴细胞总数则在接种后第３天显著高于对照组,第１０天起     

网状内皮组织增殖病病毒（REV）不同分离株LTR基因的序列分析

从山东，江苏的几个大型鸡场收集疑为REV感染的鸡脾脏，肝脏，提取组织DNA，并以此为模板，通过PCR技术，从山东泰安及江苏海安的某鸡场中分别扩增到REV的LTR基因，将该基因克隆进TA载体中，转化大肠杆菌TG1，经酶切鉴定，得到了两株REV LTR基因的克隆，标记为SD和HA，所将得克隆测序并与国外报道的REVLTR基因进行比较，发现国内分离株与国外株有94％以上的同源性。     

雏鸡感染网状内皮组织增殖病病毒后免疫病理的研究

 研究了 1日龄 SPF雏鸡感染网状内皮组织增殖病病毒 ( REV)后 ,胸腺和脾脏 T细胞增殖反应及 T细胞数量、法氏囊和脾脏 B细胞增殖反应和抗体生成细胞数量、胸腺和脾脏 IL- 2及 IFN诱生活性的动态变化。结果发现 ,雏鸡感染 REV后 ,胸腺和脾脏 T细胞增殖反应及数量、法氏囊和脾脏 B细胞增殖反应和 Ig G+、Ig M+、Ig A+抗体生成细胞数量均明显低于未感染对照雏鸡 ;胸腺和脾脏 IL- 2及脾脏 IFN诱生活性显著下降 ,表明感染 REV后雏鸡中枢和外周免疫器官细胞免疫和体液免疫降低及细胞因子 IL- 2及 IFN免疫调节减弱。     

REV分离株囊膜糖蛋白基因的克隆及序列分析

根据网状内皮组织增生症病毒（REV）SNV株env基因的序列，设计并合成了2对引物，利用该引物，以中国地方分离株SD9901、HA9901前病毒基因组cDNA为模板，通过PCR技术，成功地从国内分离的2株REV毒株中扩增出env基因，并将其克隆到pUCm-T载体中测序。将所得序列与SNV株进行比较，分析其同源性。结果表明：在核苷酸水平上，参考株SNV株的env基因与2株中国分离株的同源性分别为97.7%和95.0%；在氨基酸水平上，其同源性分别为96.9%和92.7%。分析进化关系，HA9901变异较大。     

禽脑脊髓炎病毒的鉴定

对分离到的AEV毒株进行氯仿、乙醚、温度敏感性试验等理化性质及血凝性质的鉴定,表明该毒株理化件质稳定,无血凝性;电镜下观察接毒鸡胚的超薄切片可看到AEV病毒颗粒,大小在25～30 nm.参照AEV的基因序列设计了一对引物,对该病毒进行了特异性扩增,得到了目的片段.证明该分离病毒为AEV毒株,暂定名为AEV HD.     

禽传染性脑脊髓炎病毒的分离鉴定

通过ＳＰＦ鸡胚连接传代，从自然发病肉鸡脑组织中分离出一株禽脑脊髓炎病毒，命名为ＡＥＶ－Ｌ２Ｚ株。该病毒抗原与标准阳性血清之间出现清晰的沉淀线，在接种的发病鸡胚和病鸡的胰岛细胞和大脑神经细胞的胞浆中可见呈六边形颗业状的病毒粒于聚集或散在，直径２５～３０ｎｍ。该病毒对ｐＨ３，氯仿，乙醚，胰蛋白酶，去氧胆酸钠具有抵抗力，在Ｍｇ＾２＋保护下抵抗热效应（５０℃）对ｐＨ２无抵抗力，２５℃和－８０℃反复冻融３，