番茄环斑病毒的提纯

通过对番茄环斑病毒繁殖寄主、抽提缓冲液、澄清剂、浓缩方法和悬浮缓冲液等比较试验,初步筛选出得率高,并能保持病毒完整的提纯程序,即:用番杏为繁殖寄主,用0.05M 磷酸钾缓冲液(pH 7.5,内含0.02M 巯基乙醇)抽提,加1%Tritonx-100澄清,经8%聚乙二醇沉淀,接着差速离心(28000转/分,4小时)浓缩病毒,最后用0.01 MPB(pH 7.5内含0.002MEDTA)悬浮,低速离心,上清液为部分提纯的病毒制剂。此提纯制剂具有侵染性;病毒粒体完整,为等轴对称,直径约28μm;且具有典型的核蛋白吸收曲线。     

小麦梭条斑花叶病毒(WSSMV)提纯、粒子性质和血清学

 采用冰冻患病小麦叶片,经0.5M磷酸钾缓冲液pH7.0抽提,1/4体积四氯化碳澄清,6%聚乙二醇,3% NaCl和1% Triton X-100沉淀,二次差速离心(含20%蔗糖垫,0.3% Triton X-100).一次10-50%蔗糖密度梯度离心,最后经一次超速离心浓缩,成功地获得部分提纯制剂。经电镜观察,可见大量线状病毒粒子,很少有杂质。病毒粒子在中性条件下稳定,在酸性条件下变形。病毒粒子直径13-14nm.长度250-1800nm,其中在300-400nm,550-700nm之间具有二个主要分布峰。经紫外读数,病毒制剂表现为典型的核蛋白吸收特性.其中OD260/OD244为1.19,OD260/OD280为1.29。病毒粒子外壳蛋白有二个组分,分子量分别约为30kd和27kd。
在免疫电镜实验中,小麦梭条斑花叶病毒(WSSMV)和小麦黄花叶病毒(WYMV)抗血清不仅均能显著而有效地捕获汁液中的WSSMV粒子,而且还可在粒子外面包上一层厚厚的抗血清外套。     

侵染花椰菜的芜菁花叶病毒及RT-PCR扩增外壳蛋白基因研究

 从杭州市郊区及本校附近菜园地表现严重花叶症状的花椰菜上分离到一种线状病毒,接种6科31种鉴别寄主,能侵染5科22种植物。病组织超薄切片可见风轮状内含体和片层聚集状内含体。感病的芥菜叶片,用0.5mol/L磷酸钾缓冲液(pH7.5)匀浆后汁液加4% PEG-8000沉淀3h,5%~40%甘油梯度离心纯化病毒,可获得较高的产量。提纯的病毒均为一弯曲的线状颗粒,长度740nm左右。病毒提纯液于264nm处有一吸收峰,为典型的核蛋白紫外吸收。TuMV-H分离株抗血清包被的铜网能大量吸附病毒颗粒。用特异的PCR引物扩增其外壳蛋白基因,可得-0.9Kb的片段。     

我国草莓斑驳病毒研究鉴定

 作者采集6省13市病样73株。经鉴定带SMoV的67株,占样本的91.78%。采取指示植物小叶嫁接法及蚜虫分离和传播病毒试验,并辅以病毒提纯,人工摩擦接种草本植物,病毒粒子电镜及超薄切片观察等手段加以确证。在辽宁省田间获得一种草莓中瘤钉毛蚜(Chaetosiphon sp.)以及棉蚜和桃蚜均传播本病毒,传播率依次为70%,40%及33%(最高率),系半持久性传播。病毒提纯制荆最大吸收值在260nm处,最小吸收值在240nm处。A260/280=1.21。电镜观测病毒粒子为球形,直径28~30nm,病叶超薄切片观察,在细胞质里有晶状球形颗粒,直径约25nm,排列整齐。以分离物(M-3)提纯制剂为抗原所制备的抗血清与有关病样呈阳性反应。试验证实了国内SMoV的发生和分布。     

兰花野百合花叶病的毒病原鉴定

 在日本东北大学农学研究所(仙台市),采集兰花野百合(Crotalaria sessiliflora L.)花叶病标样,经病毒提纯和蔗糖梯度密度分离,获得一种病毒分离物,该分离物的比重与CMV相近。经电镜鉴定和病组织超薄切片观察,该病毒的颗粒形态、大小及在细胞质和液胞中的病毒结晶体也与CMV相似,初步认为属CMV病毒组成员。但经琼脂免疫双扩散抗血清试验,该病毒的沉降线与PSV(落花生矮化病毒)的沉降线完全融合。还初步测定了寄主反应,也基本与PSV的寄主反应一致。因此,认定Crotalaria sessiliflara L.花叶病的毒病原是CMV病毒组的Peanut Stunt Virus(PSV)病毒(落花生矮化病毒)。     

用超声波法使烟草花叶病毒侵染烟草细胞的研究

 本文首次采用超声波法把烟草花叶病毒(TMV)粒子导入带壁烟草细胞,建立病毒-细胞高效侵染体系。将烟草细胞置于含TMV粒子的缓冲液中,用声强为0.5 W/cm²的脉冲超声波处理5 min,培养48 h后使用荧光免疫法检测烟草细胞转染率为59.7%。经酶联免疫吸附测定(ELISA)检测,TMV粒子在烟草细胞体内增殖48 h后达到高峰。电镜观察细胞体内有大量的TMV粒子。用枯斑寄主法测定表明TMV子代有较高的致病力。     

用聚乙二醇沉淀法粗提纯植物病毒

南方菜豆花叶病毒(SBMV)经两次PEG沉淀提纯的粗提纯病毒制剂和经密度梯度提纯的精提纯病毒制剂,在电镜下均能观察到大量的球状病毒,且均具有典型的核蛋白吸收图谱。两种方法提纯的病毒制剂免疫家兔,都能制备出效价高达1/1024(免疫双扩散法)的抗血清。此外,烟草花叶病毒(TMV),黄瓜花叶病毒(CMV),马铃薯Y病毒(N株系)(PVY~N),苜蓿花叶病毒(AMV)和烟草坏死病毒(TNV)用PEG沉淀法粗提纯病毒也均获得良好的效果。     

苹果褪绿叶斑病毒PBM1(李假痘)毒株的提纯、抗血清制备及ELISA检测

 从木本植物分离的苹果褪绿叶斑病毒(apple chlorotic leaf spot virus,Trichovirus组)的PBM 1毒株能引起李品种"Hauszwetshe"的假痘病,将其繁殖在昆诺藜(Chenopodium quinoa)上。感染PBM 1毒株的昆诺藜叶组织用两次蔗糖梯度离心提纯。每100 g叶组织的病毒产量平均为1.68mg。在电镜下可观察到弯曲状病毒颗粒上的螺纹结构。通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,病毒外壳蛋白的分子量为21.5 kDa。用提纯的病毒免疫家兔制备的抗血清和ELISA法,对感染PBM 1的昆诺藜叶片和桃花进行了灵敏的检测。     

甘薯羽状斑驳病毒的分离与提纯

 本文应用标准的甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)抗血清,通过两次蚜传,从徐薯-18、新大紫上得到一种病毒分离物。接种指示植物后这种分离物仅感染Ipomoea setosa、Ipomoea nil,不侵染Gomphrena globosa L.、Beta vulgaris L.、Nicotiana tabacum L.、Nicotiana glutionsa L.、Brassica pekinensis, Datura stramonium L.、Cucumis sativis L.、Brassica、juncea、Raphanus sativus、Phsalis floridana。此病毒分离物可用蚜传、摩擦接种、嫁接三种方式传播,稀释限点为10-5,体外存活期不到24小时,热灭活温度为60~65℃。蚜传这种分离物到 I.Setosa上,再嫁接到I. nil或I. setosa上扩大增殖,用0.2M pH7.2 PB^K进行粗提取,结合垫层超离心,最后经蔗糖密度梯度离心得到了高纯度的病毒的提纯物,OD260/280的比值为1.25,粒体长度主要集中在830~850nm之间。实验证明这种病毒分离物为甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)。病毒收量为64.3mg/kg感病组织。提纯病毒在电镜下任何视野都可见到多量的、密集成堆的病毒粒体。     

安徽省来安县小麦梭条花叶病的病原鉴定和防治

近年来安徽省来安具发生一种呈典型梭条花叶病症状的小麦病害,用病叶进行一系列抽提,制得病原初提纯制剂。经紫外扫描测定为标准的核蛋白吸收曲线,最大吸收值在260nm处,A260/A280为1.27,Amax/Amin为1.16。电镜观察病原为线状病毒颗粒,宽12—13nm,长度分布在100nm—600nm之间,1000nm以上颗粒所占比例较少。提纯病毒制剂经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳,可见到36.8kd的模糊蛋白带,但最易出现的是29kd和27kd二条明显的带。病原与小麦梭条花叶病毒抗血清起阳性反应。仪发现侵染小麦,并通过土壤传播,最后鉴定该病病原为小麦梭条花叶病毒,并对该毒源病毒外壳蛋白组分易于降解成较小的产物和不同分离物致病力关系提出讨论。同时在来安引种3165等抗病良种并结合其它措施进行防治,取得了明显的防治效果。     

应用单克隆抗体检测大麦黄花叶病毒

作者应用已建立的大麦黄花叶病毒(BaYMV)的4F_(10)单克隆抗体杂交瘤细胞株,经小白鼠腹水生产单克隆抗体,用过碘酸钠法制备了辣根过氧化物酶标记的酶标单克隆抗体。并由此建立了检测大麦黄花叶病毒的标准的双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)。其检测提纯病毒的灵敏度为3.0μg/ml左右,感病大麦叶片汁液的最大稀释度为1:2560,病茎稀释度为1:160。对采自我国7个主要BaYMV发病区感病的样品进行了检测,绝大多数均显示强阳性,只有宝山样品例外。本项试验为BaYMV诊断的标准试剂盒的建立进行了有益的尝试。     

应用A蛋白免疫电镜技术快速检测病株中大麦黄花叶病毒

 用A蛋白免疫电镜技术,检测大麦病汁液中的大麦黄花叶病毒(BaYMV),其捕获抗血清的适宜工作浓度范围很宽,320-20,480倍均能达到满意的结果;抗原孵育条件以室温(约25℃)下30分钟或冰箱(约4℃)中3小时,捕获到的病毒粒子数量较多。应用这项技术,在稀释3,125倍的病汁液中还能检测到BaYMV粒子,比普通免疫电镜方法的灵敏度至少高5倍。BaYMV在病株中的分布以症状明显的花叶中含量最高,黄化叶中较少,茎和根中找不到病毒。利用该技术可以快速而灵敏地进行大麦品种抗病性的鉴定与筛选。本文最后还讨论了BaYMV的稳定性。     

新疆哈密瓜上两种病毒的血清学特性

铜绿金龟(虫甲)是北京地区的一种重要害虫,一年发生一代,以3龄幼虫在土壤51～75厘米深层越冬。成虫每年6～9月出现,成虫有较强的趋光性,一日内以19:30′～21:00′活动最盛。成虫食性杂,每一雌虫一生可产卵30～40粒。产卵期为4～5天。在9种含水量(0.3、2、4、6、8、10、15、20和25%)土壤与5种温度(10、17、25、30、37℃)组合下,试验结果卵在温度25℃与8～15%含水量土壤内孵化率最高。卵的发育起点温度是9.14±1.15℃,发育有效积温为178.05日度。幼虫季节性垂直分布与10厘米土温变化有关,秋季当10厘米土温低于10℃,幼虫向土壤深层迁移,春季当10厘米土温高于6℃幼虫向土壤表层迁移。每年4～5月及8～9月幼虫10厘米作物外进行为害,这时亦导防治的有利时机。     

The distribution of barley yellow mosaic virus (BaYMV) and barley mild mosaic virus (BaMMV) in UK winter barley samples, 1987-1990

Improved diagnosis of barley yellow mosaic (BaYMV) and barley mild mosaic (BaMMV) viruses was obtained by adjusting the buffers used in immunospecific electron microscopy (ISEM) to ensure a pH ≥ 7-0 and in ELISA by replacing ovalbumin with 10 g/l full cream milk powder.
Over 70% of samples of winter barley with symptoms of mosaic received from different sites in the UK during 1987-90 had BaYMV and 37% had BaMMV, with 11% containing both viruses. BaMMV was much more common on malting cultivars than on those grown for feed and this resulted in an easterly bias to the geographical distribution of the virus. Both viruses were, however, widely distributed in areas where winter barley is grown intensively. A small number of BaYMV records were from cultivars previously regarded as resistant and these are probably a distinct strain of the virus.     

感染黄花叶病毒大麦的超微结构研究

 不同抗病性的大麦品种,在大田感染了大麦黄花叶病毒(BaYMV)后,从叶片和根的超微结构观察表明:(1)除感病和耐病品种外,首次在抗病性品种中发现有病毒存在,但病毒含量很低:(2) BaYMV对叶绿体结构有一定的影响,外部病症严重的叶片其解体或发育不全的叶绿体比例显著高于无病症的叶片;(3)感病后期细胞中的部分线粒体出现肥大和自溶;(4)感病细胞的细胞膜松弛,在细胞壁和膜之间有代谢物沉积,并有细胞膜溶解现象;膜状结构内质网肥大,有病毒内含体附着其上;(5)感染细胞中除发现片层、单向风轮状和多向风轮状内含体之外,还见到带柄风轮状内含体和堆束状病毒纤维。最后,初步讨论了BaYMV感染大麦后的细胞学变化与外部症状的相互关系以及大麦抗病性品种的抗性机理。     

The effects of infection by barley yellow mosaic virus on the yield and components of yield of barley

Infection by barley yellow mosaic virus (BaYMV) was greater in a crop sown in October than in November and in cv. Maris Otter than in cv. Sonja. However, a greater proportion of plants of Sonja than of Maris Otter were infected, and more severely, with the soil-borne fungus vector of BaYMV. Polymyxagraminis. Indifferent years the yield of individual plants of Maris Otter was decreased by 15% and of Sonja by 40%. The spring barley cultivars Athos. Porthos. Georgie and Ark Royal were all infected with BaYMV when sown in autumn in infected soil. Infected winter barley cv. Igri lost up to 50% of yield when this was measured across a naturally infected patch of crop.     

禾谷多粘菌分离、培养、接种及用于大麦抗黄花叶病的鉴定

 通过禾谷多粘菌Polymyxa graminis L.休眠孢子分离接种感病大麦品种,并进行砂培养,获得13个纯化了的禾谷多粘菌分离物,且其中3个带有大麦黄花叶病毒(BaYMV)。用分别带有BaYMV和大麦温和花叶病毒(BMMV)的英国禾谷多粘菌分离物的游动孢子接种13个中国大麦品种,以及用BaMMV摩擦接种36个中外大麦品种,抗性鉴定结果游动孢子接种与摩擦接种一样,均与田间鉴定结果一致,且大麦对BaYMV的抗性与对BaMMV的抗性一致,从而这2种接种方法可用于大麦品种(系)和育种中间体对BaYMV抗性的快速鉴定和筛选。游动孢子或休眠孢子接种方法还可有效地鉴定大麦对禾谷多粘菌的抗性。     

Serological relationships between five fungally transmitted cereal viruses and other elongated viruses

F(ab')₂ and protein A ELISA tests were used to investigate the serological affinities of five fungally transmitted cereal viruses: barley yellow mosaic (BaYMV), barley mild mosaic (BaMMV), oat mosaic (OMV), wheat yellow mosaic (WYMV) and oat golden stripe (OGSV). Within this group only BaYMV and WYMV were related. Chinese and UK isolates of BaYMV appeared to be similar. In tests using antisera to 29 other elongated viruses, BaYMV was related to one isolate of bean yellow mosaic poty virus (BYMV-G) and OGSV had affinities with BYMV-G, potato virus M, red clover vein mosaic (both carlaviruses) and perhaps Hordeum mosaic virus. The results were confirmed in immunoelectron microscopic tests. No affinities were found for BaMMV, OMV or WYMV.