东北细毛羊胎羊卵巢卵泡超微结构研究

为给胚胎工程研究提供基础材料,应用电子显微镜对东北细毛羊不同胎龄胎羊卵巢卵泡的超微结构进行了观察研究,结果表明:1)7周龄胎儿卵巢形成了原始卵泡雏形,10周龄才形成结构较完整的原始卵泡。2)卵母细胞呈圆形或椭圆形。卵母细胞膜双层不规则;核仁呈网状,单核仁或双核仁;核大多位于卵母细胞的边缘;并发现由双核构成的卵母细胞和胞质中形成不含细胞器的“透明区”;在10周胎龄卵巢,发现有1条线正将1个卵母细胞一分为二。早期线粒体多数圆形,但发现了1个线状的线粒体。随着卵母细胞发育,除圆形以外,还出现了类似菱形、不规则型、幼稚型的线粒体。单个粗面内质网可见,但高尔基体却很少见到。12周龄原始卵泡形成类似“透明带”物质。3)卵泡细胞核多数不规则,个别呈扁长形或纺锤形;卵泡细胞环绕于卵母细胞周围,早期数量少,随着卵泡发育逐渐增多。4)东北细毛羊胚胎卵巢卵母细胞发育的各阶段都有一定数量卵母细胞发生退行性变化———闭锁。     

滩羊胎儿成纤维细胞系的建立及其生物学特性研究

【目的】以滩羊胎儿皮肤组织为材料,获得符合体细胞克隆转基因基本要求的供体细胞系。【方法】取滩羊胎儿皮肤组织,采用组织块法分离培养获得滩羊胎儿成纤维细胞,观测其形态和生长情况,鉴定其性别,并对其染色体核型和红色荧光报告基因质粒(pmCherry-N1)转染等生物学特性进行研究。【结果】采用组织块法成功获得了滩羊胎儿成纤维细胞,其细胞群体倍增时间(PDT)约为48h;5代、15代、25代滩羊胎儿成纤维细胞核型分析表明,各代细胞染色体均为2n=54,未见异常;滩羊胎儿成纤维细胞的转染效率较高,约为50%,对最终获得的稳定表达红色荧光蛋白的胎儿成纤维细胞进行核型分析,结果证明遗传物质没有发生变化。【结论】建立了滩羊胎儿成纤维细胞系,为滩羊分子育种奠定了基础。     

Study on features of female fetal reproductive system development in Chinese northeast fine-wool sheep

Some charaterasics of female fetal reproductive system were studied in different gestation phases of Chinese northeast fine-wool sheep.The results showed that reproductive system consisted of ovary,oviduct,uterus and genitalia.The fetal ovaries were granular in early phase and became elliptic in later phase.The functional formula of ovarian weight,length and volume was obtained. Primary oocyte was encapsulated by monolayer cells in 7-week fetal ovary cortex.Primordial follicles were formed in 8-week fetal ovary,the follicular cells were sporadically arranged and not always regular.Complete organization of primordial follicles appeared until 10-week gestation,most of them scattered in nests in the following weeks of gestation.Two types of follicular complexes were found in fetal.There were continuous and quick mitosis of oogonia in fetal ovaries,large complexes were formed by oogoniaes encapsulated by multilayer of follicular cells,then they differentiated into small complexes,one or more primary oocytes were formed by mitosis of oogonia,primordial follicles which were caused by follicular cell approaching into them developed.     

德国美利奴羊胎儿期骨骼肌组织学结构发育特征研究

【目的】探究胎儿期绵羊肌纤维的形成与发育规律,揭示德国美利奴羊胎儿期骨骼肌的组织学生长发育特征。【方法】选择妊娠期第75天(D75)、第105天(D105)和第135天(D135)的胎羊,测定其体长、体高和体质量;采集背最长肌,进行组织切片和HE染色,统计不同发育阶段胎儿单位肌纤维数量、直径和密度;应用免疫组化方法研究不同发育阶段背最长肌中快/慢肌纤维的类型和密度。【结果】随着怀孕母羊妊娠时间的增加,从75~135d胎儿体质量增长近17倍,体长、体高增加近1.5倍;单位肌纤维数量总体呈先增加后减少的变化趋势,在105d时单位面积肌纤维数量最高;肌纤维直径于妊娠75~105d增长幅度较为平缓,105~135d增长速率明显变大;早中期发育主要以慢肌(Ⅰ型肌纤维)为主,后期发育主要以快肌(Ⅱ型肌纤维)为主。【结论】德国美利奴羊胎儿肌纤维数量在妊娠105d时达到峰值,且此时肌纤维数量基本恒定,是肌纤维从肌增生转为肌肥大发育的关键时期,早中期发育主要以慢肌(Ⅰ型肌纤维)为主,后期发育主要以快肌(Ⅱ型肌纤维)为主。     

绵羊妊娠期胎儿垂体促性腺激素细胞的发生发育与血浆B-LH浓度的变化关系

为了研究绵羊胚胎期垂体中促性腺激素细胞的发育及功能变化，分别在胎儿发育的第60、90、120天和出生期采集垂体和血液，利用免疫荧光标记和生物学测定方法研究了垂体中促黄体激素β亚单位（LH-β)的表达和血液中LH生物活性的变化。结果证明：在胚胎发育的第60天，在腺垂体可观察到少量散在的LH-β阳性细胞；在胎儿发育的90d，LH-β阳性细胞率显著高于60d(P＜0．01)时，且均匀分布于整个腺垂体；在胎儿发育的120d，LH-β阳性细胞率达到高峰，但出生期又显著降低。胚胎发育过程中，垂体的LH-β细胞阳性率与血液中B-LH浓度呈现相似的变化趋势，且无显著的性别差异。以上研究征明绵羊垂体促性腺激素细胞的功能在胚胎中期之后最活跃，在后期垂体中LH-β阳性细胞率和血浆BLLH浓度都有降低，这种波动可能与胎儿垂体-性腺物的负反馈调节机制的建立有关。     

凉山半细毛羊与山谷型藏绵羊染色体核型的比较

以微量全血培养法制备染色体标本,对凉山半细毛羊和山谷型藏绵羊的染色体核型进行了比较。结果表明,凉山半细毛羊和山谷型藏绵羊二倍体细胞核型均为公羊2N=54,XY;母羊2N=54,XX。2品种羊6号、24号染色体相对长度差异显著(P<0.05),1号、15号、23号、25号染色体相对长度在P<0.10水平上存在差异,其余染色体相对长度差异均不显著(P>0.10)。第1号、2号、3号染色体的臂比指数差异不显著(P>0.10)。同源染色体不等长现象在凉山半细毛羊和山谷型藏绵羊中均存在,凉山半细毛羊条比值较山谷型藏绵羊高,其中1号染色体在P<0.10水平上显著高于山谷型藏绵羊。     

威宁绵羊和贵州半细毛羊FecB 基因SNP 分析

利用威宁绵羊和贵州半细毛羊构建DNA池,设计11对引物扩增其Fec B基因外显子和部分内含子的序列,对纯化后的PCR产物双向测序,分析确定多态性位点。然后利用生物信息学软件分析SNPs位点对Fec B基因RNA二级结构、Fec B蛋白结构的影响。结果显示,在扩增的Fec B基因中筛选到10个SNPs,其中exon5-A39G、exon9-C37A、exon11-C87A、intron2-A62G、intron4-A1023G、intron10-G24A突变为威宁绵羊和贵州半细毛羊中所共有,而exon9-A8G和intron1-G243A突变为威宁绵羊所特有,intron3-G177A和exon8-T86C突变为贵州半细毛羊所特有。上述的SNPs中,exon5-A39G和exon9-A8G为错义突变,exon5-A39G突变导致编码的异亮氨酸(Ile)变为缬氨酸(Val),exon9-A8G突变导致编码的天冬酰胺(Asn)变为天冬氨酸(Asp);exon9-C37A和exon11-C87A多态位点均未改变氨基酸的编码,为同义突变。     

7个绵羊微卫星DNA标记在绵(山)羊群体中的多态性检测

选择分别位于绵羊2,4,6,9,17和19号染色体上的7个微卫星标记OarFCB11,OarFCB128,MAF70,OarAE101,MAF33,OarFCB48和OarFCB304,对湖羊、同羊及长江三角洲白山羊的典型群随机样本相应位点进行了PCR检测。结果表明,每个微卫星座位发现7个以上等位基因,且均存在多态;湖羊、同羊、长江三角洲白山羊群体杂合度(H)分别为0.9092,0.9177和0.8867,相应的群体基因平均多态信息含量(PIC)分别为0.9024,0.9116和0.8774,有效等位基因数(Ne)分别为11.7723,12.4538和11.6104,均以同羊为最高;以产生有效条带为标志,随机样本的PCR扩增效率存在明显的群体间和座位间差异,以长江三角洲白山羊和OarFCB128座位为最高;以7个座位微卫星等位基因频率推算群体间标准遗传距离,山羊与绵羊群体间遗传距离远大于绵羊群体之间,湖羊、同羊间亲缘距离系数R为0.1998。研究结果提示:选择的7个微卫星DNA座位均为多态座位;以7个微卫星标记为测度,湖羊、同羊及长江三角洲白山羊具有丰富的遗传多态性;7个微卫星标记可进一步用于绵山羊近缘种间遗传分析研究。     

三氮脒在羊体内的消除规律研究

【目的】研究三氮脒在羊体内的消除规律,为保障动物源食品安全提供理论依据。【方法】分别配制质量浓度为0.05,0.1,0.2,0.5,1,2和5μg/mL的三氮脒标准液,进行高效液相色谱分析,建立三氮脒标准曲线。采集空白羊肌肉、肝脏、肾脏的组织样品,进行三氮脒加标试验,测定批内平均回收率和批内、批间相对标准偏差,建立羊组织中三氮脒残留的高效液相色谱检测方法。选取35只健康湖羊,逐只按5 mg/kg的剂量颈部肌内注射三氮脒3次,每次间隔24 h,在最后一次给药后0.25(6 h),1,3,7,14,21,28 d,分别采集肌肉、肝脏、肾脏和注射部位等组织,采用高效液相色谱法测定各组织中三氮脒的残留量,并用WinNonlin5.2.1软件计算药物消除动力学参数。【结果】在质量浓度为0.05～5μg/mL时,三氮脒质量浓度与峰面积线性关系良好,相关系数(r)为0.999 5;三氮脒高效液相色谱法对羊肌肉的检测限为50μg/kg,定量限为100μg/kg;对羊肝脏、肾脏的检测限为200μg/kg,定量限为500μg/kg;批内平均回收率为83.1%～94.8%,批内相对标准偏差为2.6%～6.2%,批间相对标准偏差为3.0%～4.9%。在给药后6 h,供试湖羊肌肉、肝脏、肾脏和注射部位三氮脒残留量达到最高值,随后在各个检测时点各组织残留量均呈下降趋势;在给药后21 d,肌肉组织中未检出三氮脒残留,肾脏组织和注射部位(定量限同肌肉)中三氮脒的平均残留量降至定量限以下,肝脏中三氮脒的平均残留量也明显降低;给药后28 d,羊各组织均未检出三氮脒残留。三氮脒在羊肌肉、注射部位、肾脏和肝脏组织中的消除半衰期(T_(1/2β))分别为104.21,99.55,102.66和149.42 h,药时曲线下面积(AUC)分别为113.20,349.33,3 658.62和3 370.83 (h·μg)/g,消除速率(β)分别为0.006 6,0.007 0,0.006 7和0.004 6 h~(-1),平均滞留时间(MRT)分别为125.11,140.62,71.20和154.71 h。【结论】三氮脒经肌内注射给药后,在羊体内分布广泛、消除缓慢,在肝脏和肾脏组织中残留量较高。     

影响杜泊绵羊超数排卵效果的因素分析

对53只杜泊绵羊实施超排处理,系统分析了供体羊年龄、胎次、重复超排、两次超排间隔时间、胚胎回收部位和季节对超数排卵效果的影响。结果表明,24月龄以上羊平均回收胚胎数显著高于8~12月龄羊(8.71∶7.18)(P<0.05);8~12月龄羊可用胚胎所占比例显著高于13~24月龄羊(95.29%∶75.96%)(P<0.05)。经产二胎羊平均回收胚胎数显著高于初产羊(8.71∶7.00)(P<0.05);初产羊可用胚胎所占比例显著高于经产一胎羊(96.14%∶75.88%)(P<0.05)。第三次超排处理平均回收胚胎数显著少于首次和第二次处理(8.71∶8.10∶7.00)(P<0.05);首次超排处理平均可用胚胎数高于第二次和第三次超排处理(7.47∶5.90∶5.00)(P<0.05)。两次超排间隔10个月可用胚胎所占比例显著高于间隔1个月(92.14%∶77.09%)(P<0.05)。从输卵管平均回收胚胎数显著多于从子宫角平均回收胚胎数(10.14∶8.22)(P<0.05)。秋季超排处理平均可用胚胎数和可用胚胎所占比例均显著高于冬季(7.53∶5.97)(91.67%∶74.90%)(P<0.05)。     

西北肉用绵羊新品种群陶滩寒蒙组合生长发育性状的比较研究

以引进的无角陶赛特羊与滩羊、小尾寒羊和蒙古羊不同杂交组合的后代(F1、F2及F3)为研究对象,采用随机抽样的方法对已培育出的西北肉用绵羊新品种群部分杂交组合生长发育性状以及在不同月龄的体重、体高和体长等指标进行测定与分析,探讨培育新品种的最佳杂交组合模式.结果表明:杂种三代生长发育速度快于对应杂种二代,杂种二代生长发育速度快于对应杂种一代;3种杂交组合改良小尾寒羊和蒙古羊效果都好,尤其是高代或三元杂交经济效应更为显著.选择理想型的三代或二代杂种羊进行横交固定培育新品种的技术方案是可行的,培育的新品种群是国内肉用绵羊育种计划最具代表性和遗传性能表现最好的育种基础群和最宝贵的种质资源.     

应用两类遗传标记方法分析湖羊和同羊的遗传多样性

随机抽取湖羊 6 3只、同羊 6 5只分别进行 14个结构基因座和 7个微卫星标记的遗传检测 ,比较由两种遗传标记获得的群体基因平均杂合度 (H)、多态信息含量 (PIC)及群体有效等位基因数 (Ne)。结果表明 :由微卫星等位基因频率获得的群体基因平均杂合度、多态信息含量及有效等位基因数显著大于由结构基因座获得的 ,且在两群体中变化趋势一致。提示 :结构基因座和微卫星标记是绵羊群体遗传多样性研究的可靠遗传标记 ,而微卫星标记揭示更为丰富的遗传变异 ;两绵羊群体在结构基因座和微卫星DNA两个层次上具相当的遗传多样性 ;微卫星标记可有效用于近缘群体间的遗传分析。     

凉山半细毛羊、山谷型藏绵羊染色体G-带、C-带核型研究

以凉山半细毛羊、山谷型藏绵羊为研究对象,以微量全血培养法制备染色体标本,采用GTG法和CBG法获得染色体G-带和C-带,并对其核型进行分析。结果表明,两品种羊的G-带核型基本一致;以凉山半细毛羊和山谷型藏绵羊G-带核型为基础所作的G-带核型模式图共有275条带,其中阳性带129条;两品种羊C-带核型在分布上无明显差异。     

Experiment on super-ovulation in Xinjiang fine-wool sheep

[目的]提高并稳定新疆细毛羊超数排卵效率,为以生产2～8-细胞期胚胎的转基因研究提供素材.[方法]分别从激素生产厂家、供体年龄、激素处理方案等3个方面探讨新疆细毛羊的超数排卵效果,确定新疆细毛羊超数排卵供体羊的最佳年龄及其有效处理方案.[结果]不同生产厂家的激素对新疆细毛羊黄体数和可用胚胎数均存在极显著影响(P＜0.01):1.5周岁以内的新疆细毛羊超排后,其黄体数(6.17个/只)和可用胚胎数(1.50枚/只)均极显著低于2.0周岁以上的新疆细毛羊(黄体数12.24个/只,可用胚胎数8.30枚/只)(P＜0.01);FSH剂量在150～200 U/只范围内不影响超排效果和胚胎质量( P＞0.05):FSH+PMSG超排处理的新疆细毛羊黄体数(6.05个/只)和可用胚胎数(1.76枚/只)则显著低于FSH+PG超排处理(黄体数17.11个/只,可用胚胎数10.38枚/只)(P＜0.01).[结论]新疆细毛羊超数排卵时宜选用2.0周岁以上的供体羊,FSH剂量控制在150～200 U/只,若能与PG联合使用其超排效果更好,但不宜与PMSG联合使用.     

规模化养殖场的羊只智能称重分栏系统设计

为提高规模化养羊场的生产效率和精细化管理水平,设计开发应用于大型养殖场的羊只体重快速测量及分栏管理智能装备。设计的羊只智能称重分栏系统以可编程控制器为核心,通过气力驱动的智能化机电设备系统,利用光电传感器检测羊只行走位置,可实时读取羊只无线电子耳标身份数据,快速获取羊只体重数据并进行羊只分栏。现场试验结果表明,系统工作稳定可靠,当系统对15只不同羊进行试验时,羊只体重数据的实际值和测量值差异不显著(P>0.05),系统的称重数据最大相对误差为1.2%、平均相对误差为0.71%、称重分栏效率为3只/min,该羊只智能称重分栏系统可示范应用于规模化养殖场。     

春季卡拉库尔羊和多浪羊的超数排卵研究

在3月下旬至5月中旬,采用CIDR+FSH+LH+PG方法对12只绵羊(多浪羊和卡拉库尔羊)进行超数排卵.结果表明,卡拉库尔羊的春季同期发情率为100%,平均超排的黄体数为13.67枚,平均可用胚数11.00枚,超数排卵率为88%;多浪羊的春季同期发情率为100%,平均超排的黄体数为14.33枚,平均可用胚数12.67枚,超数排卵率为88.42%.     

绵羊卵巢卵母细胞体外成熟培养的研究

研究了绵羊卵巢卵母细胞体外成熟培养,并就影响体外成熟的因素进行了探讨。试验表明:添加10%和15%的胎牛血清(FCS)绵羊卵巢卵母细胞的体外成熟率(81.25%和83.75%)明显高于不添加FCS的对照组的卵母细胞成熟率(65.00%);在基础培养基中10%的FCS存在的条件下,添加一定质量分数的促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)时,卵母细胞的体外成熟率明显高于不添加FSH和LH的对照组的绵羊卵母细胞的体外成熟率;培养24 h和26h卵母细胞体外成熟率(75.00%和80.00%)明显高于培养20 h的卵母细胞体外成熟率(63.30%);从3~6 mm卵泡中抽取的卵母细胞体外成熟率(81.50%)明显高于从1~3 mm卵泡中抽取的卵母细胞的体外成熟率(53.30%)。     

羊传染性胸膜肺炎的病理学诊断

采用常规的病理学诊断方法,对一例羊传染性胸膜肺炎进行了确诊。结果发现该病例具有胸膜肺炎的典型病理变化,呈现纤维素性肺炎和淋巴细胞性间质肺炎,纤维素性物质的渗出和炎性细胞的浸润很明显,肺胸膜增厚,同时在肺间质还可见水肿、出血、血栓和淋巴栓的形成;另外心、肝、肾也均有不同程度的变性,淋巴结呈反应性增生。同时还检验出其病原为支原体。     

新疆细毛羊超数排卵效果研究

[目的]提高并稳定新疆细毛羊超数排卵效率,为以生产2~8-细胞期胚胎的转基因研究提供素材.[方法]分别从激素生产厂家、供体年龄、激素处理方案等3个方面探讨新疆细毛羊的超数排卵效果,确定新疆细毛羊超数排卵供体羊的最佳年龄及其有效处理方案.[结果]不同生产厂家的激素对新疆细毛羊黄体数和可用胚胎数均存在极显著影响(P<0.01):1.5周岁以内的新疆细毛羊超排后,其黄体数(6.17个/只)和可用胚胎数(1.50枚/只)均极显著低于2.0周岁以上的新疆细毛羊(黄体数12.24个/只,可用胚胎数8.30枚/只)(P<0.01);FSH剂量在150~200 U/只范围内不影响超排效果和胚胎质量( P>0.05):FSH+PMSG超排处理的新疆细毛羊黄体数(6.05个/只)和可用胚胎数(1.76枚/只)则显著低于FSH+PG超排处理(黄体数17.11个/只,可用胚胎数10.38枚/只)(P<0.01).[结论]新疆细毛羊超数排卵时宜选用2.0周岁以上的供体羊,FSH剂量控制在150~200 U/只,若能与PG联合使用其超排效果更好,但不宜与PMSG联合使用.     

绵羊李氏杆菌病的诊断

2004年6月4日，吉林省珲春市某个体养殖户送检1只主要表现为神经症状的绵羊．为查明原因，对该病羊进行迫杀，通过解剖检查、病原体分离与鉴定及致病性试验，再结合流行病学调查和临床表现，确诊为李氏杆菌引起的脑炎．