辣椒疫霉菌RT-PCR检测技术的建立及应用

根据辣椒疫霉菌（Phytophthora capsici Leonian）与致病疫霉菌（Phytophthora infestans）及其他8种常见土传病害病原菌Actin基因序列差异,设计并筛选出辣椒疫霉菌的特异性引物YM2F/YM2R,建立辣椒疫霉菌的实时荧光定量PCR检测体系,并利用该体系定量检测人工模拟带菌样品及田间发病土壤样品中的辣椒疫霉菌。试验结果表明,利用该引物建立的实时荧光定量PCR检测体系线性关系良好,灵敏度为1 × 10-1 pg ? μL-1,是普通PCR的100倍。该体系无需病原菌的分离培养即可对土壤中的辣椒疫霉菌进行快速、特异且定量检测。对田间土壤样品的检测结果表明,在一定范围内病害发生、流行程度与病原菌密度成正比,从而为该病的流行监测和早期防控提供科学依据。     

辣椒疫病相关基因研究进展

疫病是影响辣椒生产的重要病害。本文主要阐述了利用基因定位、基因鉴定和功能基因组学等技术挖掘的辣椒抗疫病相关基因,以及疫霉菌的致病基因和效应子的具体研究进展,旨在为植物疫病抗性机制、抗病育种等研究提供一定的理论参考依据。     

青海省辣椒疫霉菌生理小种鉴定

以来自青海省7个主要辣椒种植区域的43株辣椒病样为试材,采用离体叶片法及形态学观察,对辣椒疫霉菌的生理小种进行划分,并研究了生理小种的分布特点。结果表明:青海省辣椒疫霉菌生理小种划分为2号和3号,没有发现1号生理小种,发生频率分别为32.6%和67.4%;初步确定3号生理小种为青海省辣椒疫霉菌的优势小种。     

辣椒疫霉菌肉碱脂酰转移酶基因CAT的表达、蛋白纯化及结晶

肉碱脂酰转移酶CAT是与附着胞的形成紧密相关的一类酶,与辣椒疫霉菌的致病性密切相关。该研究基于辣椒疫霉菌全基因组序列,以辣椒疫霉高致病菌株SD33全基因组DNA为试材扩增CAT基因,采用了原核表达方法诱导表达重组蛋白6×His-CAT,并对重组蛋白进行亲和层析纯化、分子排阻层析纯化及蛋白结晶试验,以期获得纯蛋白及蛋白晶体。结果表明:经上述方法所获蛋白具有较高的纯度,且有较好的结晶性能,为进一步阐明CAT作用机理奠定基础。     

辣椒疫霉菌全球传播与危害及生物学特性研究进展

辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)是一种毁灭性、世界性的植物病原菌。现对辣椒疫霉菌的发现、命名、全球不同地区的传播与危害、生物学特性的研究进展进行了综述,以期为了解辣椒疫霉菌的起源、扩散路径和可持续性治理提供依据和思路。     

辣椒疫霉菌对甲霜灵的抗性风险研究

通过对安徽省各地辣椒疫霉菌对甲霜灵抗性进行监测和室内抗性诱导, 结果发现: 野生辣椒疫霉菌株中敏感、中抗和抗性菌株分别占 63.2%、30.4% 和 6.4%, 说明敏感菌株是安徽省辣椒疫霉菌的优势种群, 但 EC50 测定结果表明安徽的辣椒疫霉菌对甲霜灵的敏感性群体水平上已出现不同程度的分化; 室内药剂直接诱变容易获得抗性突变株, 且抗性水平可较其敏感亲本高近 1 000 倍, 说明辣椒疫霉菌对甲霜灵存在较大的抗药性风险, 据此, 讨论了相应的抗药性治理对策。     

辣椒疫病生防菌的初步筛选

采用平板对峙培养法,筛选对辣椒疫霉菌具有抑菌效果的生防菌。结果表明：从功能微生物资源库中选择的25个菌株中,11个菌株对辣椒疫霉菌具有抑制作用,其中菌株PSB-13-2-2,YC-10和KLP-1对辣椒疫霉菌抑制作用明显,抑制率分别为51.85%,50.97%和52.60%。     

瓜类蔬菜幼苗对辣椒疫霉菌的抗病性鉴定

以10种瓜类蔬菜幼苗为材料,在其2片真叶展平时,分别以孢子浓度为2×103、2×104、2×105个.mL-1的辣椒疫霉菌游动孢子悬浮液进行了人工灌根接种和苗期抗病性鉴定。结果表明,不同瓜类蔬菜品种幼苗对辣椒疫霉菌的抗病性表现完全不同,其中早熟1号肉丝瓜和新秀丝瓜幼苗未感染辣椒疫霉菌;其余9种瓜类蔬菜幼苗随着接种辣椒疫霉菌游动孢子浓度的提高而抗病性降低,在接种辣椒疫霉菌游动孢子浓度为2×104个.mL-1时,蜜本南瓜和新广优节瓜幼苗抗病性较强,早优苦瓜和碧峰黄瓜中度抗病,特大新红宝西瓜、秀美青筋白瓜、银辉薄皮甜瓜、台优蒲瓜和晶莹1号西葫芦高度感病。     

青海省辣椒疫霉菌交配型分析及分布特征

以青海省不同地区的42株辣椒疫霉菌为试材,采用直接配对法进行了交配型的测定。结果表明:A1交配型14株、A2交配型26株、A0交配型2株,分别占被测菌株总数的33.3%、61.9%、4.8%,未发现其它交配型辣椒疫霉菌。青海省辣椒疫霉菌交配型呈不均势分布,其中以A2交配型占主要优势。     

纳米氧化亚铜对辣椒疫霉菌和根腐病菌的抑制作用

利用纳米材料的特性生产纳米级杀菌剂是近年来农药研发的新领域。为了解纳米氧化亚铜（Cu2O）对辣椒疫霉菌和辣椒根腐病菌的抑菌效果,配制了5个浓度的纳米Cu2O,分别为250、500、750、1 000、1 250 mg?kg-1,采用含药培养基法进行了毒力测定。结果表明：同一质量浓度的纳米Cu2O对辣椒疫霉菌的抑菌效果明显优于对辣椒根腐病菌的抑菌效果|质量浓度与抑制作用呈正相关,毒力回归方程的相关系数都在0.97以上|纳米Cu2O对辣椒疫霉菌和辣椒根腐病菌的EC50分别为135.4 mg?kg-1和706.2 mg?kg-1。纳米Cu2O对辣椒疫霉菌有明显的抑制作用。     

大蒜粗提物挥发性成分分析及其对辣椒疫病的控制作用

采用室内毒力测定与田间防效试验研究大蒜粗提物对辣椒疫病菌的抑制作用及对病害的控制效果。结果表明，大 蒜不同部位粗提物均对辣椒疫病菌有很好的抑制作用，浓度越高抑制作用越强，特别是鳞茎粗提物，在150.0 mg·mL^-1 浓 度下，对辣椒疫病菌生长抑制率达100.00%。随着培养时间的延长，各粗提物对辣椒疫病菌的抑制作用下降。盆栽试验结果 表明，不同浓度大蒜各部位粗提物对辣椒疫病均有一定的控制效果，大蒜鳞茎粗提物浓度为150.0 mg·mL^-1 时，防效可达 59.38%。GC-MS 测定结果表明，大蒜根、茎叶和鳞茎粗提物中分别有20、19 和23 种挥发性物质，均以有机硫化物为主， 占总挥发性物质的90% 以上，但其组成成分和含量有明显差别。向培养基中加入硫醚类有机硫化物纯品，对辣椒疫病菌的 生长均有明显抑制作用，其中100 mg·L^-1 二烯丙基三硫醚对辣椒疫病菌的抑制效果最好，达60.55%。与大蒜轮作或混栽可 有效降低辣椒疫病的病情指数，防效分别达59.81% 和62.09%。这些结果说明大蒜挥发性物质在辣椒疫病的绿色防控上有很 好的应用前景。     

黄柄曲霉ASD 菌株抑菌谱测定及抑菌物质初探

采用对峙培养法对黄柄曲霉（Aspergillus flavipes）ASD 菌株抑菌谱进行了测定，试验结果表明：黄柄曲霉ASD 菌株具有较广的抑菌谱，对辣椒疫病菌（Phytophthora capsici Leonian）、番茄晚疫病菌（Phytophthora infestans）有较好的抑制作用。ASD 菌株发酵液对辣椒疫病菌的抑菌带宽度为7.4 mm，抑菌活性较强。ASD 菌株的发酵液经50% 硫酸铵饱和度沉淀并透析后得到的抑菌物质对辣椒疫病菌的抑菌效果最好，抑菌活性可达80.78%，且抑菌物质为蛋白类物质。     

表油菜素内酯诱导南瓜幼苗抗疫病研究

采用叶面喷施的方法，研究了24-表油菜素内酯(24-Epibrassinolide,EBR)对南瓜疫病的诱抗作用及其生理机制。结果表明，EBR处理降低了南瓜幼苗疫病病情指数，最高降幅达29.0 %；喷施EBR使南瓜叶片中H2O2含量增加，丙二醛（MDA）含量下降，过氧化氢酶（CAT）活性增强，过氧化物酶（POD）活性先缓慢下降然后升高；接种疫霉菌后，EBR使H2O2和MDA含量缓慢增加，但EBRP处理与CP处理相比，MDA含量显著降低，CAT活性显著提高，POD活性显著降低；喷施EBR明显促进南瓜幼苗生长，即使在接种疫霉菌后，植株的长势也强于CP处理。表明EBR通过调节植物体内氧的代谢平衡，增强南瓜对疫病的抗性。     

β- 氨基丁酸诱导甜( 辣) 椒抗疫病作用的研究

 报道了用β- 氨基丁酸( DL-β-aminon-butyric acid, BABA) 喷雾处理辣椒叶片和茎后的诱导抗疫病作用。研究证明: 高浓度BABA ( 1 000 g/mL) 对离体辣椒疫霉病菌无抗菌活性, 用其喷雾处理辣椒的茎叶所诱导的抗疫病作用可完全控制其危害; 用BABA 诱导处理后3 d 接种辣椒疫霉病菌, 辣椒植株开始表达出较高的诱导抗性, 这种抗病作用可持续20 d 以上, 并表现出与数量抗病性相似的特性。     

辣椒品种疫霉菌抗性鉴定试验研究

对引进的辣椒品种在5～6叶期,接种孢子囊浓度为10250个/mL,体积为5mL的疫霉菌,进行疫霉菌抗性鉴定试验。结果表明,在供试的28份干椒和线椒品种中,高抗品种有12个,抗病品种有6个;38份供试的牛角椒和羊角椒品种中抗病品种有4个。     

四川主要辣椒栽培品种对疫病的抗性鉴定及评价

为了全面、准确地评价四川省主栽辣椒品种对疫病的抗性水平，采用室内苗期接种（6～8 片真叶期）、移栽大田后接种（分枝期）和病圃试验（结果期）3 种方法对四川省主栽的56 个辣椒品种进行疫病抗性鉴定。结果表明，5 个辣椒品种采用3 种鉴定方法均对疫病具有抗性，18 个品种均表现为感病，其余品种由于接种时期和栽培环境不同抗性类型发生变化；相关性分析结果表明，室内苗期人工接种能更准确地反映辣椒在田间的真实抗性水平。     

不同抗性辣椒品种根系分泌物对疫霉菌的影响

为分析辣椒根系分泌物与抗疫病的相关性,测定了4 个不同抗性辣椒品种的根系分泌物对辣椒疫霉菌的影响。结果表明：对辣椒疫病表现抗病的PRMND 和DNP56 的根系分泌物对疫霉菌的菌丝生长、游动孢子囊形成、游动孢子释放和休止孢子萌发均有显著的抑制作用,而对辣椒疫病表现高度感病的科星6 号和新机遇的根系分泌物对疫霉菌的菌丝生长没有明显影响,科星6 号根系分泌物对游动孢子囊的形成没有明显的影响,而新机遇根系分泌物对游动孢子囊形成有明显抑制作用,科星6 号和新机遇的根系分泌物对游动孢子释放和处理8 h 后对休止孢子萌发具有明显的抑制作用,但其抑制效果显著低于抗病品种。     

离体筛选抗疫病辣椒变异体研究

以辣椒自交系B17、B25为试材，用子叶外植体诱导愈伤组织，以辣椒疫病病原菌粗毒素作为选择剂，筛选抗疫病辣椒变异体植株。结果表明，辣椒疫病病原菌粗毒素对辣椒子叶愈伤组织的诱导、不定芽的分化具有抑制作用，且随着粗毒素浓度的增加抑制作用增强，获得的抗性愈伤组织变异系对辣椒疫病病原菌粗毒素具有稳定抗性。     

辣椒疫霉菌拮抗细菌L14-3的生防潜力及其鉴定

为探讨L14-3菌株对辣椒疫病的生防潜力,采用皿内对峙试验和孢子萌发试验,测定其对辣椒疫霉菌的抑制活性,通过盆栽试验验证其对辣椒疫病的防治效果,并根据形态特征、生理生化特性和16S rDNA序列同源性分析对其进行鉴定.结果表明,L14-3菌株对辣椒疫霉菌的菌丝生长、游动孢子囊的形成、游动孢子的释放和休止孢子的萌发均具有...     

防治辣椒疫病的芽孢菌株的筛选及其抑菌效果的测定

从辣椒根际土壤中分离出293个分离物,通过平板对峙培养,筛选出对辣椒疫霉菌有较强拮抗作用的5个芽孢菌株。室内测定其对辣椒疫霉菌的抑菌带宽达8.0-11.3mm。温室控病试验表明,芽孢菌Bn-130对辣椒疫病防治效果最好,达64.7%。无菌滤液试验表明,拮抗菌Bn-130无菌滤液在一定浓度范围内能有效地抑制菌丝生长,减少孢子萌发。