鸡新城疫活疫苗室温保存工艺的初步研究

选用海藻糖、明胶、PVP等成分配制耐热保护剂,采用梯度真空干燥方法,将鸡新城疫病毒(La Sota株)进行泡沫干燥,通过37℃10 d耐老化试验筛选到配方T5的病毒滴度损失为0.2 Lg;NDV-T5泡沫干燥疫苗经DSC测定配方玻璃化转变温度Tg为56.45℃,扫描电镜观察可见较为规则的片状结构;NDV-T5在各温度耐热性能均较好,2℃~8℃保存24个月,25℃保存15个月、37℃保存5个月,病毒含量下降≤1.0 Lg;将不同保存温度的NDV-T5泡沫干燥疫苗免疫1月龄雏鸡,鸡只均能在免疫后14 d产生抗体,与现有商品疫苗效力相当。     

耐热保护剂提高鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗保存效果研究

为提高鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗的耐热性能,根据前期研究设计了3个耐热保护剂配方,比较不同配方对疫苗的抗原冻干损失、温度耐受性和保存期的影响.结果显示,保护剂TS11、TS37、TS51所制备疫苗的抗原冻干损失均在0.5 lg以下,相互之间差异不明显.但TS37所制备疫苗在37℃和45℃耐受后的抗原效价下降滴度明显低于TS11和TS51,这说明TS37具有更好的耐热保护效果.另外,25℃、2～8℃保存试验显示,配方TS37可使疫苗在室温下至少能保存1个月、冷藏条件下至少保存27个月而抗原含量和攻毒保护仍能达到质量标准要求.因此,本试验研制成功针对鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗的耐热保护剂TS37,该保护剂可使疫苗实现2～8℃下长期保存.     

猪瘟活疫苗耐热保护剂研究

为了延长猪瘟活疫苗保存期,提高产品质量,通过试验,初步筛选出1组符合要求的耐热保护剂.通过对比试验,证明应用耐热保护剂的猪瘟活疫苗优于常规保护荆疫苗.热稳定性试验结果表明,耐热保护剂疫苗在37℃条件下可保存14 d.外观性状、剩余水分、稳定性等都符合要求.     

鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗的研究 Ⅱ、稳症性、保存条件及保存期的测定

本文报道了鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗的稳定性、保存条件和保存期。稳定性的测定是采用了不同保存条件、不同保存期（月）的二联苗，用抗鸭瘟高免血清或抗鸭病毒性肝炎高免血清中和掉二联苗中的相应弱毒后，测定剩下的鸭病毒性肝炎弱毒和鸭瘟弱毒（满度）分别对9日龄鸡压的半数致死置（LD60）和对鸡胚成纤维细胞（CEF）的半数感染量（TCID60）来判定二联苗的稳定性．保存期的测定是采用不同保存条件（℃）不同保存期（月）的二联苗免疫成年鸭，10天后采血测定抗鸭肝炎病毒中和抗体效价及抵抗1万倍最小致死量鸭瘟强毒攻击的能力．试验结果表明：非冻干二联苗子－15—25℃条件下可保存18个月，0℃冻冻结态下可保存1年，4－10℃可保存半年，15－25℃保存10天。疫苗冻干后，－15—25℃条件下可保存20个月，0℃保存问个月，4－10℃保存12个月，15－25℃保存20天．     

鸭病毒性肝炎活疫苗的耐热冻干工艺策略设计

【目的】为了提高鸭病毒性肝炎弱毒(DHV)活疫苗的耐热性能。【方法】选用蔗糖、普鲁兰糖、明胶、甘油、磷酸盐等成分设计耐热保护剂组方,根据配方的共晶点、塌陷温度科学设计冻干程序,并比较了不同预冻方式对鸭病毒性肝炎活疫苗的效价影响。【结果】耐热保护剂配方A在37℃10 d、15 d病毒损失分别为0.35、0.61 Lg;对快冻、慢冻以及退火3种不同的冻干方式进行比较,发现对鸭肝炎病毒耐热损失由大到小依次为:退火慢冻快冻;疫苗长期保存期试验结果表明,可在2~8℃可保存2年;采用10倍剂量免疫2日龄雏鸭均未出现死亡,且精神饮食体重增长均正常。【结论】采用A配方与快速冻干冻方式的耐热性能最好,延长保存期并且提高了耐热性能,为动物疫苗耐热新剂型的研发提供技术支撑。     

猪瘟耐热活疫苗节能冻干曲线的优化研究

猪瘟疫苗真空冷冻干燥工艺,可减少冻干对制品活性的影响,降低制品冻干过程的耗能,缩短冻干周期,故研制安全、耐热、节能的猪瘟减毒冻干疫苗极为重要。选用甘露醇、甘氨酸等成分设计猪瘟耐热保护剂配方,通过间接免疫荧光法比较制品在37℃、10 d的冻干和耐热损失,并用兔体热反应法复核。检测优化配方的共晶点和塌陷温度设计冻干程序,比较不同预冻方式对猪瘟耐热疫苗冻干的影响,调整冻干周期。猪瘟耐热保护剂配方A-4的冻干和耐热损失最小,分别为0.30 lg和0.45 lg。根据制品的共晶点-27.51℃,对预冻方式筛选,发现快冻冻干和耐热损失最小,分别为0.17 lg和0.38 lg,根据塌陷温度-24.3℃,成功将冻干曲线缩短至24 h。调整后的配方可使猪瘟活苗在37℃保存15 d、45℃保存7 d;内毒素和动物试验表明该疫苗安全、无副反应。上述结果表明,试验成功筛选出猪瘟耐热保护剂配方A-4,在保证疫苗质量的前提下优化冻干曲线,调整后的保护剂配方保证疫苗耐热性能,安全无副反应。     

鸡新城疫V4克隆株疫苗研究与应用Ⅰ·V4克隆株/HB92选育及生物学特性测定

从澳大利亚引进NDV4自然无毒株,经耐热选育,利用蚀斑技术克隆病毒,选育出NDV HB92株,56℃ 6h对该毒株病毒活性没有影响;室温(10～25℃)条件下保存6个月,37℃保存2周,病毒仍有活力;37℃下保存8周,HA滴度不变.鸡胚平均致死时间(MDT)>168h;1日龄鸡脑内致病指数(ICPI)为0.00;鸡静脉致病指数(IVPI)为0.00.将含毒尿液接种18日龄雏鸡,接种量为105EID50,接种后14d测定NDHI抗体效价≥24,强毒攻击保护为100%.     

猪细小病毒病弱毒疫苗的保存期试验

将2批猪细小病毒病弱毒疫苗分别在2—8℃保存11个月、12个月、13个月,-20℃保存22个月、24个月、26个月,进行物理性状、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验、安全试验及免疫效力试验,探讨不同保存条件和保存期对疫苗的影响。结果表明:物理性状、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验均符合《中国兽药典》的要求。安全试验每批次疫苗接种乳鼠全部健活;以10头份/头的剂量接种PPV HI抗体阴性猪,接种后定期采集血样和鼻肛分泌物进行病毒分离,结果均为阴性。疫苗在2—8℃保存至13个月,-20℃保存至26个月TCID_(50)均≥10~(6.25)笛/头份;接种PPV HI抗体阴性豚鼠抗体全部转为阳性;疫苗免疫PPV HI抗体阴性猪,免疫后1个月、7个月分别用PPV强毒攻击获得100%保护。     

疫苗的泡沫冷冻干燥研究

以鸡新城疫活疫苗为例,介绍了泡沫冷冻干燥的工艺过程,并对用泡沫冷冻干燥法制得的样品进行热分析及鸡胚半数感染量(50%egg infectious dose,EID50)测试,然后与用传统冷冻干燥法生产的低毒疫苗和耐热疫苗进行对比。结果表明:经泡沫冷冻干燥工艺处理的疫苗与低毒疫苗、耐热疫苗的玻璃化转变温度分别为33.9℃、30.2℃和40.1℃;泡沫冷冻干燥疫苗和耐热疫苗的耐老化试验下降滴度分别为1.1和0.8。表明用泡沫冷冻干燥法制得的疫苗在耐热性能上有其优越性,值得进一步深入研究。     

猪细小病毒N株耐热性研究

观察不同温度对猪细小病毒N株血凝活性的影响.结果表明,猪细小病毒N株在37℃条件下十分稳定,作用28d血凝滴度变化不大,只下降1～3个滴度;在60℃恒温水浴下的血凝滴度变化缓慢,血凝滴度在前7d-直稳定;随着温度的升高,病毒血凝的稳定性迅速降低,短时间内即可失去血凝活性,在75℃1h、80℃10min、85℃5min,检测不出病毒血凝活性.由此证明,猪细小病毒N株在37、60℃时血凝活性十分稳定,对热有很强的抵抗力,为将该弱毒株开发成方便运输、保存和使用的疫苗提供了依据.     

禽流感油乳剂灭活疫苗的研制及应用

采用分子生物学技术,用陕西省部分地区自然发病鸡群分离鉴定的AIV毒株,按不同的抗原含量研制成AIV的双价油乳剂灭活疫苗进行质量检验和安全试验。结果表明:该灭活疫苗符合兽药生物制品规程的要求;免疫易感鸡后3～5 d出现HI抗体,14 d达1:128以上,21～30 d达到高峰(1:1024),并维持3～6个月(1:256);用同源AIV毒株攻毒,5 d产生保护力,7 d达100%(5/5),保护期为9个月;疫苗4℃保护期暂定12个月。区域性免疫试验,免疫后第14 d抽血检验HI滴定在(1:128)以上。使用安全,效果可靠。     

流感病毒快速诊断试剂中HA抗原热稳定性的研究

[目的]筛选流感病毒HA抗原保护剂。[方法]将H3N2和H1N1亚型流感病毒分别加入A～F组中,在37℃下进行加速试验,并通过血凝试验测定HA滴度。[结果]在28 d A组(添加PBS缓冲液)中H3N2和H1N1亚型流感病毒的HA抗原血凝滴度分别为20和32。F组(添加BSA、岩藻糖、Proclin 300、Triton 100)HA抗原的热稳定性最好,在28 d H3N2和H1N1亚型流感病毒HA抗原血凝滴度分别为48和96。[结论]F组成分对流感病毒HA抗原的保护作用最好,可作为保护剂候选配方。     

狂犬病（HEP／BHK_（21））活疫苗免疫期试验

应用效价为１０（－４．５０）ＭＩＣＬＤ（５０）／０．０３ｍｌ的狂犬病ＨＥＰ／ＢＨＫ（２１）活毒疫苗免疫犬后，对免疫前和免疫后１、３、６、１２、３０个月血样进行了血清学评价和免疫原性分析。１５只犬免疫１月后，血清抗体全部阳转，６６％的犬在３０个月后抗体仍维持在一个较高水平。免疫１年后９０％以上的动物能够得到保护。统计表明，不同地区、不同性别、不同年龄的犬免疫反应无显著差异，但三月龄以下犬反应欠佳。     

PPV_(S-1)A株保存期研究及免疫原性测定

为了确保疫苗质量,保证生产用种毒的稳定性,将猪细小病毒PPVS-1A株的干毒和湿毒分别在-20℃和-70℃保存,每12个月取样一次,分别进行病毒含量测定、红细胞凝集价测定、乳鼠安全试验和豚鼠抗体检测。结果病毒含量均大于107.25;红细胞凝集价为1∶1024;乳鼠接种未见不良反应;豚鼠抗体检测HI均不低于1∶32。确定猪细小病毒PPVS-1A株湿毒在-20℃的保存期为24个月,在-70℃的保存期为48个月;猪细小病毒PPVS-1A株冻干毒在-20℃的保存期为36个月,在-70℃的保存期为60个月。猪细小病毒PPVS-1A株毒保存期长,具有良好的安全性和免疫效力。     

狂犬病（HEP／BHK_（21）活疫苗的试制

狂犬病ＦｌｕｒｙＨＥＰ株经ＢＨＫ（２１）细胞传代后，从１９８７年试制了７批疫苗，批间毒价稳定，ＭＩＣＬＤ（５０）均在１０（－４．５）／０．０３ｍｌ以上，冻干苗毒价≥１０（－４．５）／０．０３ｍｌ。冻干苗以５％蔗糖、１％明胶为保护剂，在－２０℃保存一年，４－８℃保存一年，室温（１８～２５℃）保存７天，毒价均无明显下降。     

Ⅰ群禽腺病毒双价油乳剂灭活苗的研究

【目的】提高国内I群禽腺病毒疫苗的防控能力,防止I群禽腺病毒蔓延。【方法】优化I群禽腺病毒的增殖条件,以I群禽腺病毒血清4型（FAV-4）及血清8型（FAV-8）的抗原液制备油乳剂单价及双价灭活苗,比较甲醛及β-丙内酯（BPL）的灭活效果,并检验疫苗性状、监测免疫抗体水平及进行免疫攻毒试验和田间试验。【结果】疫苗灭活以1.00 mL/L终浓度的甲醛或0.500 mL/L终浓度的BPL为宜;3种疫苗均为白色状乳液,4°C下保存期均可达12个月,单价疫苗的最小免疫剂量为100 μL/羽,双价疫苗的最小免疫剂量为250 μL/羽;免疫抗体水平监测结果表明,免疫后第4周抗体水平达到峰值,且在免疫后第8周仍维持较高水平;免疫攻毒试验结果显示,3种疫苗的保护率均为100%,能完全抵抗病毒攻击;田间试验结果表明,在免疫初期3种疫苗抗体均达到预期免疫效果,免疫保护期在6个月以上,在生产中使用双价疫苗可以减少注射次数。【结论】FAV-4、FAV-8双价油乳剂灭活苗免疫效果好、保存期长、安全性好,为净化I群禽腺病毒提供了技术支撑。     

2种植物多糖对PRRSV灭活苗免疫猪抗体及T淋巴细胞亚群的影响

将24头35日龄断奶仔猪随机分为6组,2种多糖(山药多糖和黄芪多糖)分别以高、低2个剂量(山药多糖剂量17.10、8.55mg/kg,黄芪多糖剂量为11.50、5.75mg/kg)和猪PRRSV灭活苗同时注射,于免疫后不同时间点采血,监测PRRSV抗体水平和外周血中T淋巴细胞亚群的变化.结果表明,2种多糖均能增强免疫猪的体液免疫,其中以高剂量的黄芪多糖效果较好;2种多糖均能促进猪CD3+细胞的增殖,其中以山药多糖效果较好,提示2种多糖对PRRSV灭活苗免疫效果均有较好的增强作用.     

Correlation Research of the Serological Test (HI) and Challenge Test of Duck Tembusu Virus Inactivated Vaccine

【Objective】The objective of this paper was to evaluate the correlation of the serological test (HI) and challenge test of duck Tembusu virus inactivated vaccine.【Method】Three batches of vaccines ( laboratory trial products) were used to immunize the 51-day-old young ducks and 260-day-old laying ducks by intramuscular injection in 0.15, 0.3, 0.5 and 1.0 mL, respectively. Secondary immunization was proceeded in the same doses and route at 14 day after primary immunization. Ducks were regrouped according to the HI titer and challenged with 0.5 mL (100 DID₅₀) DTMUV at day 28 after secondary immunization. Serum samples were collected at 2 days later for virus isolation and laying ducks were dissected at 8 days later to observe the ovarian lesions. All the results were counted to evaluate the immune potency of vaccines. The correlation of HI titer and immune protection rate was analyzed.【Result】The protection rate of immunized young ducks with HI titer of 1:5 or lower, 1:10, 1:20, 1:40, 1:80, 1:160, 1:320, 1:640 was 50% (20/40), 43.8% (7/16), 74.3% (26/35), 86.7% (26/30), 96.6% (57/59), 92.7% (51/55), 95% (38/40) and 100% (11/11), respectively. The protection rate was 48.2% with HI titer lower than 1:20, while the rate was 74.3% with HI titer of 1:20 and 93.8% with HI titer of 1:40 or greater. In laying ducks, the protection rate of flocks with HI titer of 1:5 or lower, 1:20, 1:40 and 1:80 was 66.7% (12/18), 83.3% (10/12), 95.2% (20/21) and 100% (15/15), respectively. The protected proportion of ducks with HI titer of 1:10, 1:160, 1:320 and 1:640 was 2/3, 7/7, 1/1 and 2/2, respectively. The protection rate was 66.7% with HI titer of 1:10 or below, while the rate was 83.3% with HI titer of 1:20 and 97.8% with HI titer of 1:40 or greater. There were significant positive correlations between the HI titer and the immune protection rate both in young ducks and laying ducks. The Spearman’s correlation coefficient was 0.905 (P<0.01) and 0.932 (P<0.01), respectively. 【Conclusion】There were positive correlations between the HI titer and the immune protection rate of duck Tembusu virus inactivated vaccine (strain HB). The HI detection could be used to evaluate the efficacy of duck Tembusu virus inactivated vaccine (strain HB) instead of challenge test. The HI titer of 1:20 could be defined as the criteria of protection for the duck Tembusu virus inactivated vaccine after immunization.     

ND─EDS二联油乳剂灭活苗的研制

用鸡新城疫（ＮＤ）克隆３０毒株接种鸡胚，鸡产蛋下降综合症（ＥＤＳ）ＢＨ９１毒株接种鸭胚，分别收获ＮＤ鸡胚尿囊液毒和ＥＤＳ鸭胚尿囊液毒，用福尔马林灭活，二者混合后，加入１０号白油油相中，制成ＮＤ─ＥＤＳ二联油乳剂灭活苗。该苗接种在产前母鸡，可使接种鸡获得对ＮＤ和ＥＤＳ强毒攻击坚强的抵抗力。该苗安全、稳定，４℃保存期至少可达１２个月以上，适用于基层推广使用。