宠物源大肠杆菌的血清型和毒力基因及耐药性调查

为研究宠物源致病性大肠杆菌(Escherichia coli)的血清型、毒力基因和耐药性之间的相关性,本研究由健康和患病犬、猫直肠拭子样品中分离177株E.coli,并采用玻片凝集法鉴定其血清型,结果显示分离株中定型菌株135株,分别属于20个不同的血清型,其中O1、O2和O8为主要的流行血清型。PCR方法检测11种毒力相关基因,并采用琼脂稀释法测定分离菌株对14种抗菌药的敏感性,结果表明3个血清型的菌株拥有相似的耐药表型,但毒力基因谱不同。62%的分离菌株携带fimH基因,并且毒力基因组合iroN+hlyF、iroN+fimH和traT+sitA比较流行。55%的O1血清型携带fimH基因,并且多数耐受四环素、多西环素、头孢噻吩和庆大霉素;20.8%的O2血清型菌株携带traT和sitA基因;50%的O8血清型携带traT和fimH基因。3个血清型分离菌株多数对安普霉素和阿米卡星敏感。     

云南省昆明市动物园大肠杆菌分离株毒力基因分布特征

为研究云南省昆明市动物园动物体内大肠杆菌(E.coli)分离株毒力基因的分布特征,从圆通山动物园37个动物种群粪便中分离出37株E.coli,采用生化鉴定方法鉴定大肠杆菌,PCR方法检测19种毒力基因。鉴定结果表明:37株E.coli中,ompA、iroN、fimC、aatA、vat 5种毒力基因携带率分别为100%、95.49%、83.78%、70.27%、51.35%,ibeA、neuC、iutA、traT、stx 5种毒力基因携带率为0,其他9种毒力基因携带率均低于40.00%;分离菌株普遍携带8种以下毒力基因,同时携带10种以上毒力基因的概率为8.10%;分离株强毒力岛基因携带率较高,分布较为普遍。结果表明,昆明市圆通山动物园内流行的大肠杆菌以致病性大肠杆菌为主,不同种类动物体内大肠杆菌的毒力基因携带率存在较大差异,其原因可能与动物的饲养环境以及动物自身的适应能力和抵抗力有关。因此,对于动物园内具有较高大肠杆菌致病风险的动物,要采取相应防治措施,防止大肠杆菌病发生与流行。     

江苏省如皋地区母猪子宫内膜炎大肠杆菌的进化分群和耐药特性

为了分析江苏省如皋地区母猪子宫内膜炎大肠杆菌(E.coli)致病性、系统进化分群和耐药情况，本试验于2019—2021年从如皋地区猪场采集疑似患子宫内膜炎母猪的阴道分泌物和脓性分泌物样品204份，采用常规的细菌分离鉴定方法和PCR方法进行E.coli分离鉴定，通过人工感染试验、三重PCR法和K-B药敏纸片法分析其致病性、系统进化分群和耐药性。结果显示，共分离得到108株E.coli,其中87株对小鼠具有致病性，致死率介于40%～100%,87株致病性E.coli中A群有12株(13.8%)、B1群有13株(14.9%)、B2群有32株(36.8%)、D群有30株(34.5%),以B2+D群流行为主(71.3%);87株致病性E.coli对阿莫西林、氨苄西林、链霉素等10种药物耐药率介于51.7%～100%,对其他药物耐药率介于9.2%～28.7%,呈现多重耐药性，以耐10(18.4%)、耐11(16.1%)和耐12(14.9%)种药物菌株为主。结果表明，从该地区分离的87株致母猪子宫内膜炎E.coli以B2+D群流行为主，呈现严重多重耐药性。本试验结果为母猪子宫内膜炎大肠杆菌流行病学调...     

鸭源大肠杆菌分离鉴定及其毒力基因检测

从信阳市部分规模化鸭场疑似大肠杆菌感染病料中,通过传统分离培养及phoA基因检测,分离得到19株大肠杆菌。对分离菌进行种系发育分群、动物致病性试验和毒力基因检测。系统发育分子分群结果显示,19株分离菌中10株(52.63%)属于B2群,7株(36.84%)属于D群,1株(5.26%)属于B1群,1株(5.26%)属于A群。动物致病性试验结果显示,高致病性菌株9株(47.38%),中致病性菌株7株(36.84%),低致病性菌株3株(15.78%)。毒力基因的检测结果显示,ompT、iroN、hlyF、iutA和Iss五种毒力基因的检出率均为89.47%;fimC、marA和irp2基因检出率为63.16%;fyuA基因检出率为42.11%。     

河北地区鸡源致病性大肠杆菌毒力基因检测与耐药性分析

为分析河北地区鸡源致病性大肠杆菌(E.coli)毒力基因的携带情况及其与耐药性的相关性,本研究采用PCR方法和K-B纸片法,测定了2013年~2016年从河北省蛋鸡场分离的104株致病性E.coli的19种毒力基因及其耐药性情况。结果显示,从104株致病性E.coli中检出16种不同的毒力基因,总检出率为84.2%(16/19),其中毒力基因irp2、fyuA、ompT、iucD~a、colv、tsh的检出率均在90%以上,毒力基因iroN、fimC、papC、hlyF、ECs370、ECs3737的检出率在62.5%~88.5%,iucA、astA、vat和iss毒力基因的检出率均低于60%,Ler、eaeA和sfa毒力基因未检出;E.coli分离菌株对20种抗菌药物呈现出多重耐药性,其中耐11~14种抗生素最多,占总分离菌的50.96%(53/104),对四环素、阿莫西林、氨苄西林、复方新诺明有较高的耐药率,分别为99.04%、96.15%、92.31%、91.35%;采用SPSS18.0软件统计学方法分析显示,分离的104株鸡致病性E.coli携带的毒力基因和耐药性两者之间不存在明显的相关性。本研究为河北地区鸡致病性E.coli的防控提供科学依据。     

邢台地区致鸡卵黄性腹膜炎大肠杆菌血清型鉴定、毒力基因检测及耐药性分析

为分析邢台地区致鸡卵黄性腹膜炎大肠杆菌(E.coli)分离株的血清型、毒力基因和耐药性,本实验采用常规鉴定方法和16S rRNA PCR的方法,从邢台地区不同养鸡场46份患卵黄性腹膜炎的40周龄~45周龄蛋鸡病料组织中分离鉴定出37株E.coli。人工感染1日龄的雏鸡,结果显示32株分离菌为致病性E.coli,采用玻板凝集法检测其血清型分布,结果显示定型的27株致病性E.coli分离株共属于11个血清型,以O_(78)、O_(148)、O_2及O_8为优势血清型。采用PCR方法检测32株致病性E.coli分离株14种毒力基因,其中irp2、fyuA、ompT、Iss~a、iucD~a、iutA、iroN、hlyF、fimC毒力基因检出率最高,分别为100%、96.9%、93.8%、86.7%、84.3%、71.9%、65.7%、56.3%和50%,其余毒力基因检出率较低。耐药性分析结果显示,32株致病性E.coli分离株仅对头孢克肟、左氧氟沙星、阿奇霉素、头孢曲松和氟苯尼考5种药物高度敏感,对其他药物存在不同程度的耐药性。本研究为防治致病性E.coli引起蛋鸡卵黄性腹膜炎提供了实验依据。     

华东部分地区禽致病性大肠杆菌系统进化分群及毒力相关基因的检测

采用PCR方法,对华东地区分离的66株禽致病性大肠杆菌(APEC)进行系统进化分群和9个毒力相关基因的检测。APEC分离株在各系统进化群中均有一定比例的分布,其中A群为33.4%(22/66),B1群为31.8%(21/66),B2群为13.6%(9/66),D群为21.2%(14/66)。毒力基因分布检测结果表明:编码自分泌黏附素的aatA和aatB、侵袭素ibeA、空泡形成毒素基因vat、温度敏感性血凝素tsh、摄铁系统的ybtX、耶尔森毒力岛内的ireA、VI型分泌系统的clpV1和vgrG等基因的分布率分别为59.1%、13.6%,7.58%、37.9%、36.4%、25.8%、6.06%、21.2%和42.4%,其中aatA、tsh、vat、ybtX、ireA、clpV1 6个基因在各进化群中分布较为广泛,而个别基因如ibeA仅在B2群中检出,在其他进化群没用检出。本研究有助于进一步了解禽大肠杆菌病的分子流行病学特点,并为该病的防控提供了基础。     

致蛋鸡卵黄性腹膜炎大肠杆菌分子分群、耐药表型及耐药基因型检测与分析

为分析邢台和秦皇岛地区致蛋鸡卵黄性腹膜炎大肠杆菌(E.coli)分离株的分子分群情况及耐药表型和耐药基因型之间的相关性,本研究采用PCR法和96孔板微量肉汤稀释法分别对临床分离的42株致鸡卵黄性腹膜炎E.coli的系统进化分群、耐药基因和12种抗菌药物耐药表型进行检测。结果显示,42株分离菌株中属于A、B1、B2、D群的分别有7株、9株、14株、12株,以B2+D群流行为主;42株分离菌株对12种抗菌药物耐药性严重且呈现多重耐药性,其中对阿莫西林-克拉维酸、磺胺间甲氧嘧啶、多西环素等9种药物耐药率在45.24%以上,对其它药物耐药率在19.04%～38.10%,耐12种、9种抗菌药物分离菌株最多,分别占分离菌株的19.05%、16.67%;42株分离菌株中耐药基因tetA、Sul1、TEM、Sul2、mcr-1、floR、SHV、tetR检出率在59.52%以上,其它耐药基因检出率为14.29%～38.10%;ESBLs类、四环素类、喹诺酮类、头孢菌素类、磺胺类、多肽类和酰胺醇类7类抗菌药物的耐药表型和耐药基因型符合率在52.6%以上,其中酰胺醇类、多肽类的耐药表型与耐药基因型符合率为100%。本实验为致蛋鸡卵黄性腹膜炎E.coli防控及临床用药提供参考。     

鸡致病性E.coli地方株血清型的鉴定、毒力基因及致病性检测

为了研究河北秦皇岛地区鸡致病性大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)地方流行株的优势血清型、毒力基因和致病性,本研究采用常规鉴定方法和16SrRNA PCR方法,从采集自河北秦皇岛地区不同养鸡场的83份病鸡组织中分离鉴定出56株E.coli。人工感染1日龄雏鸡试验表明,46株分离株为致病性E.coli。采用玻片凝集试验、PCR方法分别测定致病性E.coli分离株的血清型分布和16种毒力基因携带情况。结果显示,定型的42株致病性E.coli分离株包括11种血清型,以O7 8、O89、O142及O1为优势血清型;46株致病性E.coli分离株中以irp2、fuyA、ompT、Iss a、iutA、iroN和hlyF毒力基因检出率较高,在89.1%~100.0%,其他毒力基因检出率为22.0%~72.0%。选择优势血清型代表株QH1(O78)、QH1(O89)、QH1(O142)和QH1(O1)人工感染1日龄雏鸡,计算半数致死量(LD50),确定其致病性。结果表明,QH1(O78)株致病性最强,对1日龄雏鸡的LD50为3.16×106 CFU/mL;对14,49日龄雏鸡的LD50分别为1.07×107,5×108 CFU/mL。本研究为河北秦皇岛地区鸡致病性E.coli地方流行株防控提供试验依据。     

林麝肺源致病性大肠杆菌分离鉴定及毒力基因PCR检测

为鉴定引起林麝肺炎的病原,本研究采用常规鉴定方法和16S rRNA PCR方法从94份患肺炎的林麝肺组织病料中分离鉴定出30株大肠杆菌(E.coli)分离株。小白鼠感染试验表明,30个分离株均为致病性E.coli,对小白鼠的致死率为100%。通过PCR方法检测这30株林麝肺源致病性E.coli分离株的10种毒力基因结果表明,其中ompA毒力基因检出率为80%,显著高于其sat(36.67%)、vat(26.67%)和iucDa(23.33%);而neuC、sitD ep.a、sfa/focCD、afa/draB、iha和sitD chr.毒力基因的检出率均为阴性。结果提示结合常规鉴定方法,16SrRNA PCR可作为临床快速检测林麝肺源致病性E.coli的有效方法。对林麝肺源致病性E.coli毒力基因的检测及鉴定,为进一步研究林麝肺源致病性E.coli的致病机理奠定了基础,同时为防治林麝E.coli性肺炎提供了依据。     

禽源大肠杆菌可能是人源大肠杆菌的毒力基因储存库

南京农业大学动物医学院王少辉等采用PCR和Dot blot,检测疑似毒力基因在不同地区(101株中国分离株和121株德国分离株)、不同来源(禽源、人源及猪源)大肠杆菌中的分布,并分析其和大肠杆菌系统进化分群的关系。     

致狐狸肺炎大肠杆菌血清鉴定与毒力基因检测

为了确定狐狸肺炎源致病性大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)流行血清型与毒力基因的携带情况并分析其相关性,2016—2017年采集河北省部分地区患肺炎死亡的狐狸的肺脏、心血等组织142份中分离到了105株E.coli,且RT-PCR检测犬瘟热病毒为阴性,人工感染小鼠致病性试验结果显示105株分离菌株中77株为致病性E.coli。采用玻片凝集试验和PCR方法分别检测77株致病性E.coli血清型和毒力基因,结果显示:77株致病性E.coli有9种血清型,其中以O1、O8、O78、O12为流行的优势致病血清型,77株致病性E.coli携带14种不同毒力基因,以irp2、fyuA、papC、fimC、iucD^a、colv、hlyF、ompT 8种毒力基因检出率较高,在32.5%～98.7%之间,其余毒力基因检出率较低。狐狸肺炎源致病性E.coli的优势血清型携带的毒力基因较多,至少携带9种毒力基因,流行的优势血清型与毒力基因之间具有一定的相关性。狐狸肺炎源E.coli流行血清型代表株TS(O1)1、QH(O8)2、QH(O78)3、TS(O12)4均对狐狸很强的致病性。本试验为狐狸肺炎源致病性E.coli防控提供了参考依据。     

广东屠猪肉样品中大肠杆菌耐药性与毒力特征的分析

为分析广东地区屠猪肉中大肠杆菌(E.coli)药物敏感菌株的血清型、毒力基因和系统进化背景,本研究从屠猪肉样品中分离出112株E.coli,采用玻片凝集法鉴定血清型,琼脂稀释法测定10种抗菌药的敏感性,PCR方法检测7种毒力相关基因,多重PCR方法进行系统进化背景判定。结果显示,112株E.coli中,定型菌株95株,分别属于15种血清型,其中O65、O131、O8和O158为优势血清型。几乎所有菌株对氟苯尼考、多西环素和四环素高度耐药,而对头孢曲松高度敏感,其中多重耐药菌株多数耐5种以上药物,常见的多重耐药表型是氟苯尼考/氯霉素/多西环素/四环素/氨苄西林。PCR鉴定结果表明,含有毒力基因的菌株中38%至少具有两个毒力基因,其中EAST1+Stx2e和hlyF+Stx2e比较常见。比较常见的毒力基因为Stx2e和EAST1,STb基因仅在一株菌中检测到。多重PCR鉴定结果显示,屠猪肉样品中E.coli主要分布为共生型的A组和B1组。本研究为大肠杆菌病的控制和合理使用抗生素提供实验依据。     

新疆不同地区奶牛乳房炎β溶血性金黄色葡萄球菌毒力与基因相关性分析

从新疆5个地区8个奶牛场乳房炎奶样中分离的101株β溶血性金黄色葡萄球菌中随机选64株用小鼠进行毒力测定,同时用随机引物扩增多态性(RAPD)技术分别以3个随机引物进行基因相关性分析,建立种系进化树。结果表明,55%的菌株对小鼠具有较强毒力(可致小鼠2/3死亡),且在乌鲁木齐、奎屯和伊犁地区占据优势。基因相关性分析表明,当相对基因相关性为0.35时,被检测菌株主要分布于6个进化群,86.5%的菌株分布在A、B、C和E4个进化群。其中,50%菌株属于A群,13.5%属于B群,5.8%属于C群,17.3%属于E群。从地区分布可见,乌鲁木齐、伊犁和奎屯地区分离的菌株分别有69.6%、61.1%和71.4%分布在A群;昌吉3个牛场48%、24%的分离菌株分布在B群和C群;库尔勒牛场35.7%、57.1%的分离菌株分布在A群和E群。26株对小鼠具有致死性的菌株分布在A群,这些菌株占致死小鼠菌株的74.3%。     

奶牛养殖场环境大肠杆菌的ERIC-PCR分型和系统进化分群

旨在了解奶牛养殖场环境中大肠杆菌流行情况及遗传多样性，探究不同样品分离菌株的遗传关系及系统进化分群情况，收集2017—2019年新疆某大型奶牛场养殖环境中的209份样品进行大肠杆菌分离和16S rRNA鉴定，对非重复菌株进行ERIC-PCR分型和系统进化分群试验。结果显示，共分离到338株大肠杆菌，分离率为67.46%。ERIC-PCR将其分为Ⅰ~ⅩⅣ共14型。Ⅳ（196株）型为优势型；其次为Ⅰ型（59株）、Ⅴ（31株）、Ⅹ（11株）；剩余41株分布于其他10种型。除2株未分群外，其他被分为6个群，B1群（75.45%）分布最多，其次是A群（18.34%）、C群（2.96%）、D或E群（1.18%）、F群（0.30%）。综上表明，奶牛养殖场环境中大肠杆菌存在广泛的DNA多样性，且不同时间及来源菌株间存在较近的亲缘关系；系统进化分群以B1群为主。     

动物源E.coli O157∶H7 stx基因的检测与系统进化分析

为了解2009－2010年间在河南、甘肃地区分离鉴定的5株大肠埃希菌O157(E.coli O157)携带stx的情况及不同分离株间stx分子进化与变迁的情况,本研究利用PCR方法对分离株进行了stx基因检测,并完成了序列测定与系统演化分析。结果表明,5株不同动物源的分离株均含有stx1及stx2基因。序列分析结果显示5株分离株间stx1、stx2的核苷酸及氨基酸同源性均较高;stx1基因均与参考株中的山羊源和食品源E.coli O157菌株的同源性较高,进化树中遗传距离最近;分离株的stx2基因与多株牛源及少数人源参考株也具有较高的同源性,进化树中虽然5株分离菌均在一个大主干分支中,但分离株27与其他各分离株及参照株遗传距离最远,独自处于一次级分支中;分离株L37与W、12与50分别分布于牛源、人源E.coli O157小次级分支中;由此可推测,分离株所携带的stx1很有可能是经食品源或羊源E.coli O157传递而来;分离株L37与W、分离株12与50的stx2可能是由牛源、人源E .coli O157菌株传递而来,分离株27的stx2来源不清楚。研究结果表明,5株E.coli O157分离株均含有stx1、stx2基因,但两个基因的起源存在差异。     

牛源非O157产志贺毒素大肠埃希菌耐药基因和毒力基因发生共转移

为探究牛源非O157产志贺毒素大肠埃希菌(STEC)的耐药基因与毒力基因是否发生共转移,本研究采用PCR方法对29株牛源非O157 STEC利用"Top six"血清群筛查、系统进化分群和毒力基因检测,结果显示31.03％(9/29)STEC为O145血清群;系统进化分群以A群为主(68.97％);75.86％(22/...     

江苏地区动物粪便及食品中大肠杆菌O157的生物学特性分析

收集江苏地区养殖场及农贸市场动物粪便及食品样品700份,经显色培养基筛选、PCR鉴定大肠杆菌O157,并分析其进化分群、毒力基因、生物被膜形成能力、耐药性和耐药基因,了解O157污染情况。分离得到16株大肠杆菌O157,在粪便和食品中的分离率分别为2.6%(13/500)和1.5%(3/200),进化分群显示D群占68.75%(11/16)为优势分群,68.75%(11/16)分离株能形成生物被膜。毒力基因stx1、stx2、hly A、eae的分布率分别为25%、37.5%、68.75%、63.16%。综合分析显示,不同来源菌株进化分群及毒力基因型相似。分离株的耐药率在56%以上,且至少同时耐受7种药物;耐药基因tet A、TEM、floR、cml A、aph3、aad A1、aad A2检测率50%~63%,其他耐药基因检测率小于30%。本研究表明动物粪便作为大肠杆菌O157的贮库,可能由养殖场感染动物并污染食品,威胁人类健康。     

仔猪腹泻大肠杆菌流行株鉴定及毒力与耐药性分析

为明确河南地区一规模化猪场暴发新生仔猪腹泻疫情的病原特性及其耐药谱,本研究对肠道致病大肠杆菌进行了分离鉴定。对腹泻仔猪粪便中分离的大肠杆菌进行13种毒力基因检测和21种抗生素的药敏试验。结果显示,34.8%分离株检出EAST1基因;所获分离株均为多重耐药菌株,且至少对5类抗生素耐药,耐9类以上抗生素的菌株达到75.3%,对氨苄西林、哌拉西林、环丙沙星、左氧氟沙星和莫西沙星耐药率达到100.0%。细菌种系进化分群结果显示,21.7%分离株属于有致病性的B2群和D群。本研究获得了腹泻仔猪大肠杆菌分离株的毒力基因、耐药谱的基本数据和种系进化分群的遗传背景,为制定有针对性的治疗和防控技术方案提供依据。     

猪、鸡与貂源肠外致病性大肠杆菌群型、耐药性与致病性分析

为检测不同动物源肠外致病性大肠杆菌(ExPEC)的耐药及致病性差异,本研究从132份鸡、猪和水貂等动物肠道外组织中分离鉴定大肠杆菌,并对分离菌株进行了16S rRNA基因测序、毒力基因检测、药敏试验、O抗原鉴定、系统进化群分析及动物致病性试验。实验结果显示:分离出53株ExPEC,且至少携带特异性毒力基因pap、sfa/foc、afa/dra、iutA、kpsMTII中的两种基因,并携带fimH、ibeA、hlyA、malX、iss、iroN等其它相关毒力基因。53株ExPEC分离株对氯霉素、卡那霉素、头孢噻吩、四环素、多粘菌素B、氨苄青霉素等呈现不同程度的多重耐药性;O抗原主要分布于O1、O2、O8、O11、O38、O78、O120血清型;系统进化群分析结果显示:28株属于A群,19株属于B1群,1株为B2群,5株属于D群。选取20株ExPEC分离菌株按照6×10~6cfu/只对小鼠进行腹腔注射,验证其致病性;并测定ExPEC6、ExPEC42、ExPEC52、ExPEC53菌株对BALB/c小鼠的LD_(50),其结果分别为3.49×10~6cfu/mL、9.49×10~5cfu/mL、9.48×10~6cfu/mL、2.38×10~7cfu/mL。本研究为动物源性ExPEC的预防诊断提供依据,并为下一步研究其致病机理等奠定基础。